N-Myc下游调节基因1和p27在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:探讨N-Myc下游调节基因1(N-Myc downstream regulated gene1,NDRG1)蛋白和p27蛋白在宫颈癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测54例宫颈癌组织,32例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织和28例正常宫颈组织中NDRG1蛋白和p27蛋白的表达,并分析它们与宫颈癌临床病理因素的关系。结果:宫颈癌组织中NDRG1的阳性表达率(77.8%)明显高于CIN组(46.9%)和正常宫颈组(28.9%),P<0.0125;表达水平与间质浸润、有无淋巴结转移有关(P<0.05);与临床分期、组织病理分级、组织类型无关(P>0.05)。p27蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率(33.3%)明显低于CIN组(62.5%)和正常宫颈组(92.9%),P<0.0125;其表达水平与组织病理分级、间质浸润、淋巴结转移有关(P<0.05)。结论:NDRG1蛋白过表达、p27蛋白低表达与宫颈癌的发生发展有关,联合检测NDRG1与p27蛋白对于早期诊断宫颈癌以及判断其侵袭转移潜能及预后有一定参考价值。

增殖细胞核抗原和细胞分化相关基因N-myc下游调节基因1在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞分化相关基因N-myc下游调节基因1(NDRG1)在乳腺癌中的表达。方法选择乳腺手术切除标本90例进行切片,应用免疫组织化学链霉亲和素-生物素复合物(SABC)法检测45例乳腺癌组织、23例乳腺增生组织、22例癌旁正常乳腺组织中PCNA和NDRG1蛋白的表达情况,并分析其与乳腺癌生物学行为的关系。结果 PCNA在癌旁正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺癌组织中的表达率分别为36.3%、62.5%和88.9%,PCNA在癌旁正常乳腺组织中的表达明显低于乳腺增生组织(P<0.05)和乳腺癌组织(P<0.05)。NDRG1在癌旁正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺癌组织中的表达率分别为63.6%、30.4%和15.5%,NDRG1在癌旁正常乳腺组织中的表达明显高于乳腺增生组织(P<0.05)和乳腺癌组织(P<0.05)。PCNA与NDRG1表达呈负相关(r=-0.679,P<0.05)。结论 PCNA与NDRG1共同参与乳腺癌的发生与发展,联合检测PCNA和NDRG1蛋白有助于判断乳腺癌的恶性程度。

三叶因子2和N-myc下游调节基因1在不同子宫内膜组织中的表达

目的 探讨三叶因子2（TFF2）和N-myc下游调节基因1（NDRG1）在不同子宫内膜组织中的表达,为早期诊断子宫内膜癌提供新的生物学指标。方法 收集珠海市人民医院经手术切除并经病理检查确诊为子宫内膜癌组织157例,另选择同期经手术切除并经病理检查确诊的子宫内膜不典型增生组织30例及其他病因手术切除的正常子宫内膜20例,分别检测其TFF2和NDRG1蛋白的表达情况,并分析TFF2和NDRG1蛋白的表达与子宫内膜癌临床病理因素的关系。结果 与正常子宫内膜和子宫内膜不典型增生组织比较,TFF2在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著降低（P〈0.05）,但NDRG1在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。TFF2在Ⅰ、Ⅱ期子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著高于Ⅲ~Ⅳ期（P〈0.05）;高、中分化子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著高于低分化组织及其他类型（P〈0.01）。与深肌层浸润的子宫内膜癌比较,浅肌层浸润的子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著升高（P〈0.05）;与有淋巴结转移的子宫内膜癌比较,无淋巴结转移的子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。而高、中度分化的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著低于低分化及其他类型（P〈0.05）。浅肌层浸润的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著低于深肌层浸润（P〈0.01）,与无淋巴结转移的子宫内膜癌比较,有淋巴结转移的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。结论 在子宫内膜组织中,TFF2表达的缺失及NDRG1蛋白的高表达可能与子宫内膜癌的发生发展有重要关系,有望在子宫内膜癌的早期诊断、判断是否存在侵袭转移等临床评估中发挥作用。

行为学干预对血管性痴呆大鼠神经再生及脑组织N-myc下游调节基因1蛋白表达的影响

目的探讨不同干预方法对血管性痴呆(VD)大鼠神经再生及脑组织N-myc下游调节基因1(NDRG1)蛋白表达的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,训练组,b FGF组。采用两血管阻断加硝普钠降压法制作大鼠VD动物模型,用HE、TTC染色法和免疫组织化学方法检测海马组织NDRG1蛋白的表达及穿梭箱训练和b FGF的干预作用。结果脑缺血再灌注第7天缺血海马神经元NDRG1阳性细胞明显增多,且随缺血再灌注时间的延长逐渐增多,第21天达高峰。应用穿梭箱训练和b FGF的干预后NDRG1阳性细胞明显增加。结论穿梭箱训练和b FGF促进神经再生作用可能由NDRG1信号介导。

高危型人乳头瘤病毒感染宫颈癌组织中N-myc下游调节基因1蛋白表达及其临床意义分析

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染宫颈癌组织中N-myc下游调节基因1(NDRG1)蛋白表达及其临床意义。方法选取50例高危型HPV感染宫颈癌患者作为宫颈癌组,同期50例高危型HPV感染宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为CIN组。对比两组组织中NDRG1蛋白表达差异,分析宫颈癌组织中NDRG1蛋白表达情况与临床特征的关系,并分析宫颈癌患者预后的影响因素。结果宫颈癌组患者宫颈癌组织中NDRG1蛋白阳性表达率高于CIN组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。NDRG1蛋白阳性表达与NDRG1蛋白阴性表达高危型HPV感染宫颈癌患者国际妇产科联盟(FIGO)分期、宫旁侵犯情况、淋巴结转移情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。NDRG1蛋白阴性表达高危型HPV感染宫颈癌患者生存情况优于NDRG1蛋白阳性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。FIGO分期为Ⅲ期、合并宫旁侵犯、合并淋巴结转移、NDRG1蛋白阳性表达均是高危型HPV感染宫颈癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论组织中NDRG1蛋白阳性表达是高危型HPV感染宫颈癌患者病情严重、预后不良的重要影响因素。

上调N-myc下游调节基因1表达对胰腺癌细胞增殖及凋亡的作用

目的观察磷酸化增强型绿色荧光蛋白-N-myc下游调节基因N3(p EGFP-NDRG1-N3)上调Nmyc下游调节基因1(NDRG1)表达的胰腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响并探讨其机制。方法以Western blot法对PANC-1、BXPC-3、CAPAN-2、SW1990细胞中NDRG1表达进行检测;构建过表达质粒p EGFPNDRG1-N3转染CAPAN-2细胞,以免疫荧光、Western blot法及实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上调效率;采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测转染后细胞增殖;碘化丙啶(PI)法检测细胞周期;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Western blot显示,NDRG1在4组细胞株中均有表达,而在低分化细胞(PANC-1)中的表达量要高于中分化(BXPC-3)及高分化细胞株(CAPAN-2、SW1990)(P<0.05);免疫荧光显示,p EGFP-NDRG1-N3组荧光细胞数占总细胞数>70%,NDRG1在蛋白及m RNA水平表达上调;在m RNA水平,NDRG1表达上调后Parp、Cleaved Parp、p-P53、Cleaved-Capase3无改变(t=1.456、1.164、2.914和1.075,P>0.05)。在蛋白水平,Parp表达下调,Cleaved Parp表达上调,p-P53下调,Cleaved-Capase3下调(t=6.104、12.273、3.691和14.227,P<0.05);MTT显示,在96和120 h与p EGFP-N3组比较,p EGFP-NDRG1-N3转染后CAPAN-2细胞增殖能力增强(t=8.176和2.246,P<0.05);PI法显示,转染p EGFP-NDRG1-N3的CAPAN-2细胞停留在G1期比例增高,G2及S期比例减少,与p EGFP-N3组比较,差异有统计学意义(t=3.651、4.133和3.092,P<0.05);p EGFPNDRG1-N3凋亡低于p EGFP-N3组,差异有统计学意义(t=9.161,P<0.01)。结论胰腺癌细胞NDRG1表达上调促进胰腺癌细胞增殖,抑制凋亡,促进细胞进入G1期,可作为胰腺癌治疗新的靶向候选基因。

N-MYC及NDRG1在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞生物学特性的影响

目的分析N-MYC及N-MYC下游调节基因1(NDRG1)在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞生物学特性的影响。方法收集2021年1月至2023年5月于该院行手术切除且经病理确诊为胃癌的82例患者的胃癌组织及癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测N-MYC、NDRG1 mRNA相对表达量,收集患者临床资料,分析N-MYC、NDRG1 mRNA表达与患者临床病理特征关系。选择对数生长期NCI-N87细胞,将N-MYC干扰质粒(si-N-MYC)与其阴性对照(si-NC)分别转染到NCI-N87细胞中,记为si-NC组、si-N-MYC组;将si-N-MYC分别与anti-NC、anti-NDRG1共转染至NCI-N87细胞中,记为si-N-MYC+anti-NC组、si-N-MYC+anti-NDRG1组。采用CCK-8实验检测细胞增殖活性,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测细胞中N-MYC、NDRG1蛋白表达。结果胃癌组织N-MYC mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05),NDRG1 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.05)。不同胃癌TNM分期、淋巴结转移、远处转移患者N-MYC、NDRG1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-N-MYC组细胞增殖和侵袭能力下降(P<0.05),NDRG1蛋白表达下调(P<0.05)。与si-N-MYC+anti-NC组比较,si-N-MYC+anti-NDRG1组细胞增殖、侵袭能力增加(P<0.05)。N-MYC可靶向调控NDRG1,敲低NDRG1可逆转N-MYC对细胞产生的生物学作用。结论胃癌组织N-MYC mRNA表达上调、NDRG1 mRNA表达下调,二者参与胃癌的发生发展过程,并对胃癌细胞增殖、侵袭等恶性生物学行为有重要调控作用。

转染NDRG1基因对宫颈癌细胞COX-2、VEGF表达及增殖的影响

目的:通过研究人类N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)对人宫颈癌SiHa细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达及细胞增殖的影响,深入探讨NDRG1抑制宫颈癌侵袭转移的作用机制。方法:经脂质体介导将含有NDRG1真核表达质粒转染人宫颈癌SiHa细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及RT-PCR、蛋白质印迹鉴定;蛋白质印迹法检测阳性克隆细胞COX-2及VEGF表达的改变;噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果:成功建立高表达NDRG1的阳性SiHa细胞克隆(N-12),并证实其COX-2和VEGF蛋白表达及细胞增殖活性均显著降低。结论:NDRG1可能通过下调宫颈癌细胞COX-2、VEGF的表达及抑制细胞增殖而起到抑制宫颈癌进展的作用。

LSD1、NDRG1基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响及两者的关系

目的观察赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)、N-myc下游调节基因1(NDRG1)基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响,并探讨两者的作用关系。方法取人卵巢癌SKOV3细胞株,通过shRNA方法建立诱导型干扰LSD1的SKOV3细胞株(LSD1-shRNA-SKOV3),将其分为对照组、Dox组、转染组和联合组。对照组用水处理,Dox组用100 ng/m L Dox处理,转染组转染NDRG1 siRNA,联合组转染NDRG1 siRNA的同时加入100 ng/m L Dox处理。采用实时荧光定量PCR和Western blotting法分别检测4组LSD1、NDRG1基因mRNA和蛋白表达;染色质免疫沉淀ChIP法和实时荧光定量PCR法分析对照组和Dox组NDRG1基因启动子区组蛋白H3第4位赖氨酸的二甲基化(H3K4me2)程度;Transwell小室测算4组细胞迁移率。结果 Dox组、转染组、联合组、对照组LSD1mRNA表达分别为0.407±0.029、0.936±0.024、0.413±0.018、0.941±0.035,蛋白表达分别为0.306±0.013、0.879±0.036、0.341±0.057、0.893±0.052,Dox组、联合组与对照组相比,P均<0.05。Dox组、转染组、联合组、对照组NDRG1 mRNA表达分别为0.791±0.045、0.107±0.016、0.165±0.021、0.239±0.027,蛋白表达分别为0.907±0.005、0.130±0.006、0.216±0.019、0.358±0.062,Dox组、转染组、联合组与对照组相比,联合组与Dox组、转染组相比,P均<0.05。Dox组、对照组细胞NDRG1基因启动子区H3K4me2水平分别为3.32±0.41、0.83±0.17,两组相比P<0.01。Dox组、转染组、联合组、对照组细胞迁移率分别为21.75%±1.816%、79.13%±2.561%、40.13%±2.039%、68.91%±3.167%,Dox组、转染组、联合组与对照组相比,联合组与Dox组、转染组相比,P均<0.05。结论 LSD1基因沉默人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力降低,NDRG1基因沉默人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力升高;LSD1通过降低NDRG1基因启动子区域H3K4me2水平,抑制NDRG1的表达,从而促进卵巢癌SKOV3细胞转移。

上调NDRG1基因对人卵巢癌OVCAR3细胞周期和凋亡的影响

目的研究NDRG1对OVCAR3细胞周期和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法将NDRG1重组表达质粒转染至人卵巢癌细胞株OVCAR3,用经过G418筛选阳性细胞克隆,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹进行鉴定;采用RT-PCR及Western印迹检测转染前后细胞中p21、p53基因mRNA与蛋白表达;通过流式细胞仪检测细胞周期变化和凋亡情况。结果RT-PCR和Western印迹结果表明,重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/NDRG1稳定转染的OVCAR3细胞中,NDRG1表达上调,p21、p53基因表达也随之上调;流式细胞术结果显示,过表达NDRG1使OVCAR3细胞在G0/G1期细胞增多而S期细胞减少,同时细胞凋亡显著增加。结论卵巢癌OVCAR3细胞的NDRG1表达上调后,G0/G1期细胞增多而S期细胞减少,并且明显促进了细胞凋亡,其作用机制可能与p21及p53基因表达提高有关。

上调NDRG1基因表达对肺腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:建立稳定转染N-myc下游调节基因1(N-myc downstream-regulated gene 1,NDRG1)的A549细胞株,探讨NDRG1对A549细胞增殖与凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:经脂质体介导将含有NDRG1的重组表达质粒转染人肺腺癌A549细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆并进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹鉴定;qRT-PCR和蛋白质印迹检测阳性细胞克隆P21及鼠双微体基因2(murine doubleminute 2,MDM2)的表达;MTT比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性;流式细胞仪检测阳性细胞克隆凋亡率。结果:成功建立高表达NDRG1的阳性A549细胞克隆(N11);N11细胞P21表达及细胞凋亡率显著增高(P<0.05),而MDM2表达及细胞增殖显著降低(P<0.05)。结论:上调A549细胞NDRG1表达后,细胞凋亡增加而细胞增殖降低,其作用机制可能与P21表达增高而MDM2表达降低有关。

雄激素受体通过微小RNA-9-5p/N-my下游调节基因1通路促进胰腺导管腺癌细胞侵袭的机制研究

目的探讨AR如何通过调控微小RNA(miRNA,miR)-9-5p和N-myc下游调节基因1(NDRG1)通路,从而影响胰腺导管腺癌(PDAC)细胞的侵袭。方法对PDAC组织和相应非肿瘤组织样本的分析。我们通过在PDAC细胞系PANC-1、BxPC-3细胞中过表达或敲低AR,用Transwell方法观察AR对PANC-1、BxPC-3及侵袭的影响。通过生信分析寻找能够调控靶基因NDRG1表达的miRNA,并用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证该miRNA与NDRG1的调控关系,观察其对PANC-1、BxPC-3细胞侵袭的影响。通过转染miR-9-5p和NDRG1等基因来评估对PANC-1、BxPC-3细胞侵袭能力的影响,采用t检验比较各组间差异。结果相对于载体对照细胞(PANC-1、BxPC-3-Ctrl),过表达AR促进了PDAC细胞(PANC-1、BxPC-3-oeAR)的PDAC细胞侵袭(0.65±0.07比2.11±0.52、0.74±0.05比2.28±0.65),差异有统计学意义(t=21.160、10.120,P<0.05)。相对对照细胞(PANC-1、BxPC-3-Scr),敲除AR抑制了PDAC细胞的侵袭(PANC-1-shAR、BxPC-3-shAR)(0.75±0.12比0.34±0.02、0.84±0.13比0.44±0.03)差异有统计学意义(t=45.117、13.155,P<0.01)。miR-9-5p模拟物能显著抑制AR过表达PDAC细胞PANC-1、BxPC-3的侵袭能力(0.67±0.06比2.25±0.22、0.88±0.07比2.07±0.32,t=15.124、8.156,P<0.05),而miR-9-5p抑制剂则能增强对照组细胞的侵袭能力(1.64±0.23比0.75±0.09、1.48±0.26比0.84±0.15,t=11.143、9.175,P<0.05)。PDAC组织里,miR-9-5p的产量明显低于正常胰腺组织(0.23±0.02比1.58±0.57,t=8.122,P<0.05)。利用双荧光素酶基因报告实验,我们更深入地肯定了miR-9-5p直接影响NDRG1的3’非翻译区(3’UTR),以此压低其表达。miR-9-5p的过表达显著降低了NDRG1蛋白水平(0.76±0.04比0.42±0.22,t=7.143、11.106,P<0.05),而miR-9-5p的抑制剂则提高了NDRG1蛋白表达(0.46±0.02比1.22±0.26,t=6.121、15.106,P<0.05)。oeAR显著增加了NDRG1的表达(0.37±0.02比1.56±0.45,t=8.197、8.996,P<0.05),而AR的抑制则减少了NDRG1的表达(0.66±0.05比0.22±0.04,t=11.751、6.196,P<0.05)。过表达NDRG1显著抑制PDAC细胞的侵袭能力(1.13±0.12比0.42±0.06,t=5.175、7.776,P<0.05)。NDRG1敲除PDAC细胞侵袭能力显著升高(0.56±0.06比1.36±0.27,t=16.151、17.135,P<0.01)。结论雄激素受体通过miR-9-5p/NDRG1通路抑制PDAC细胞侵袭的机制,为PDAC的治疗提供治疗策略。

结直肠癌组织中lncRNA CCAT2和NDRG1的表达及意义

目的探讨结直肠癌(CRC)患者组织中长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录物2(CCAT2)、N-myc下游调节基因(NDRG)1的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法选取2018年2月至2020年2月在南通市中医院行CRC根治性手术治疗的96例CRC患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR检测组织中lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA表达,采用免疫组织化学检测组织中NDRG1蛋白表达,采用Kaplan-Meier曲线分析不同lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA表达组患者的预后差异,采用多因素Cox回归分析CRC预后影响因素。结果与癌旁组织比较,癌组织中lncRNA CCAT2表达较高,NDRG1 mRNA表达及蛋白阳性率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移比较,TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移的CRC患者癌组织中lncRNA CCAT2表达较高,NDRG1 mRNA表达较低(P<0.05)。lncRNA CCAT2高表达组3年累积生存率低于lncRNA CCAT2低表达组,而NDRG1 mRNA高表达组3年累积生存率高于NDRG1 mRNA低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期、淋巴结转移,lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA是CRC预后影响因素(P<0.05)。结论CRC组织中lncRNA CCAT2表达升高,NDRG1表达降低,二者均参与CRC肿瘤的进展,可作为评估CRC患者生存预后的新指标。

NDRG-1基因表达的影响因素

恶性肿瘤细胞迁移是一个非常重要的临床问题,也是导致癌症患者死亡的主要原因之一。N-myc下游调节基因1(NDRG-1)是近年发现的与细胞分化相关的基因,在阻止肿瘤细胞入侵和迁移,尤其是抑制肿瘤组织生长的过程中扮演着非常重要的角色。该基因可以被多种分化调节剂诱导表达。我们就影响其表达的几个典型因素做简要综述。

卵巢癌组织中LSD1、NDRG1基因表达量与癌细胞迁移、侵袭的相关性研究

目的:研究卵巢癌组织中赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine-specific demethylase 1,LSD1)、N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated 1,NDRG1)基因表达量与癌细胞迁移、侵袭的相关性。方法:选择2014年3月~2017年7月扶风县人民医院接受手术切除的卵巢癌患者作为研究对象,手术切除后取卵巢癌组织和癌旁组织,测定LSD1、NDRG1基因及迁移基因、侵袭基因的表达量。结果:卵巢癌组织中LSD1、YKL40、COX2、Twist、IFITM1、CatL、CTHRC1、MMP2、FUNDC1基因的mRNA表达量显著高于癌旁组织,NDRG1、E-cadherin、Wnt5a基因的mRNA表达量显著低于癌旁组织;LSD1高表达的卵巢癌组织中YKL40、COX2、Twist、IFITM1、CatL、CTHRC1、MMP2、FUNDC1的mRNA表达量显著高于LSD1低表达的卵巢癌组织,E-cadherin、Wnt5a基因的mRNA表达量显著低于LSD1低表达的卵巢癌组织。结论:卵巢癌组织中LSD1高表达、NDRG1低表达能够促进癌细胞的迁移、侵袭。

沉默DNA甲基转移酶上调N-myc下游调节基因1表达对前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响

目的观察小干扰RNA（siRNAs）沉默DNA甲基转移酶（DNMTs）上调N-myc下游调节基因1（NDRG1）表达对前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响。方法使用siRNAs分别抑制DU145细胞中DNMT1、DNMT3b及DNMT1＋DNMT3b的表达；使用Westernblot、实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）检测细胞中DNMT1、DNMT3b及NDRG1的表达改变；通过细胞计数试剂盒（CCK-8）、Muse凋亡检测仪、划痕实验和Transwell侵袭实验，检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的改变；筛选上述改变最显著组DU145细胞，抑制细胞中NDRG1表达，再次检测上述细胞生物学行为。结果Westernblot及RT-qPCR结果显示，与对照组比较，DNMT1抑制组、DNMT3b抑制组及联合抑制组的NDRG1mRNA（1．59±0．03，1．23±0．01，1．36±0．11比0．90±0．15，1．00±0．03）和蛋白（1．07±0．16，0．49±0．01，0．92±0．09比0．23±0．04，0．30±0．07）表达显著增加（P〈0．05）。CCK-8结果显示，在24、48、72h，DNMT1抑制组吸光度（A）值为0．189±0．030、0．266±0．048、0．419±0．058；DNMT3b抑制组为0．221±0．023、0．318±0．072、0．498±0．064；联合抑制组为0．199±0．021、0．284±0．062、0．488±0，091，与对照组比较，显著减少（P〈0．05）。凋亡检测结果显示，DNMT1抑制组凋亡率为（22．40±1．36）％、DNMT3b抑制组为（14．20±0．80）％、联合抑制组为（17．60±0．74）％，与对照组比较，显著增加（P〈0．05）。划痕实验结果显示，DNMT1抑制组划痕面积愈合率为（53．01±3．22）％、DNMT3b抑制组为（70．97±2．12）％、联合抑制组为（63．93±4．42）％，与对照组比较显著减少（P〈0．05）。Transwell实验结果显示，DNMT1抑制组侵袭细胞数为（16±3）个、DNMT3b抑制组为（32±5）个、联合抑制组为（20±4）个，与对照组比较，显著减少（P〈0．05）。其中，DNMT1抑制组效果最显著（P〈0．05），联合抑制未见显著协同效应。与对照组比较，NDRG1-siRNA可显著逆转由DNMT1-siRNA引起的DU145细胞生物学行为改变（P〈0．05）。结论通过抑制DNMT1、DNMT3b在前列腺癌DU145细胞中的表达，可部分恢复NDRG1的表达，并可显著抑制肿瘤细胞增殖，促进细胞凋亡，减弱细胞迁移及侵袭能力，其中单独抑制DNMT1效果最显著．联合抑制无明显协同效应．提示DNMT1可以成为前列腺癌去甲基化治疗的一个有效靶点。

卵巢子宫内膜异位囊肿患者血清APRIL与NDRG1的水平表达及其临床价值研究

目的观察血清增殖诱导配体(a proliferation inducing ligand,APRIL),N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)水平变化,并分析其对卵巢子宫内膜异位囊肿(ovarian endometriomas,OEM)的诊断价值。方法选取2021年7月~2022年7月在自贡市第一人民医院就诊的132例OEM患者作为观察组,并进行定期随访,根据患者预后病情有无复发分为复发组(n=50)和未复发组(n=82)。同期在该院体检的健康者78例为对照组。采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中APRIL和NDRG1水平;并对复发组和未复发组的一般资料进行比较;采用Logistic回归分析影响OEM预后的相关因素;用Pearson法分析OEM患者血清APRIL与NDRG1表达相关性;绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清APRIL和NDRG1对OEM的诊断价值。结果与对照组相比,APRIL水平(35.28±6.81ng/ml vs 26.37±3.19ng/ml)和NDRG1水平(124.39±15.67μg/L vs 9.67±10.82μg/L)升高,差异具有统计学意义(t=10.864,17.278,均P<0.05)。与未复发组比较,复发组血清APRIL(40.38±7.88ng/ml vs 32.16±6.18ng/ml)和NDRG1(132.04±19.83μg/L vs 119.73±13.16μg/L)水平升高,差异具有统计学意义(t=6.668,4.287,均P<0.05)。Logistic回归分析显示,血清APRIL和NDRG1水平是影响OEM患者预后的危险因素(Waldχ^(2)=11.839,28.437,均P<0.001)。Pearson法分析结果显示,OEM患者血清APRIL水平与NDRG1水平呈正相关(r=0.439,P<0.001)。血清APRIL,NDRG1水平联合诊断OEM的曲线下面积(AUC)为0.849,灵敏度和特异度分别为73.95%,85.37%,优于APRIL和NDRG1单独预测(Z=2.644,2.094,P=0.008,0.036)。结论子宫内膜异位囊肿患者血清APRIL和NDRG1水平升高,二者联合对子宫内膜异位囊肿诊断具有较高的临床价值,且与子宫内膜异位囊肿患者的预后密切相关。

微小RNA188-3p靶向调节N-myc下游调节基因1抑制肝癌细胞的增殖

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-188-3p在肝癌发生发展中的作用及其机制。方法收集2018年2月至2019年10月武汉市中心医院肝胆胰外科经手术切除并病理证实的21例原发性肝癌组织标本及对应的13例癌旁组织标本,细胞培养肝癌细胞,用生物信息学预测miR-188-3p和N-myc下游调节基因1(NDRG1)的靶向匹配关系,并用双荧光素酶报告基因系统鉴定。Lipo3000转染miR-188-3p摸拟物后,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time qPCR)检测miR-188-3p和NDRG1 mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测NDRG1蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖。组间比较采用t检验。结果miR-188-3p和NDRG1匹配良好,miR-188-3p能够结合NDRG1 mRNA 3’端非编码区(3’UTR),并有效抑制其mRNA及蛋白表达水平(0.56±0.04比1.12±0.13,t=10.777,P<0.01;0.43±0.07比0.88±0.15,t=9.123,P<0.05)。miR-188-3p能够负向调控NDRG1表达和肝癌细胞增殖(0.76±0.07比1.26±0.19,t=7.509,P<0.05)。结论miR-188-3p可以通过下调靶向癌基因NDRG1的表达来抑制肝癌细胞的增殖。

NDRG1过表达对去势抵抗性前列腺癌耐药细胞株C4-2/ENZA耐药性的影响及其机制

目的:探讨N-myc下游调节基因1(NDRG1)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)恩杂鲁胺(ENZA)耐药的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养人CRPC C4-2细胞和ENZA耐药株C4-2/ENZA细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测C4-2/ENZA细胞及其亲本C4-2细胞中NDRG1 mRNA表达水平,Western blotting法检测C4-2/ENZA细胞及其亲本C4-2细胞中NDRG1、雄激素受体(AR)和前列腺特异性抗原(PSA)蛋白表达水平,以验证细胞转染效率。将C4-2/ENZA细胞分为空白组(正常培养不进行处理)、阴性对照慢病毒(Lv-NC)组(转染Lv-NC)、Lv-NDRG1组(转染Lv-NDRG1)、Lv-NC+ENZA组(转染Lv-NC后加入ENZA处理)、Lv-NDRG1+ENZA组(转染Lv-NDRG1后加入ENZA处理)、Lv-NDRG1+表皮生长因子(EGF)组(转染Lv-NDRG1后加入EGF处理)和Lv-NDRG1+EGF+ENZA组(转染Lv-NDRG1后加入EGF和ENZA处理)。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞半数抑制浓度(IC_(50))、耐药指数(RI)和细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,RT-qPCR法检测各组细胞中NDRG1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NDRG1、AR、第213位丝氨酸磷酸化雄激素受体(p-ARSer^(213))、第81位丝氨酸磷酸化雄激素受体(p-ARSer^(81))和PSA蛋白表达水平。结果:与C4-2细胞比较,C4-2/ENZA细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),AR和PSA蛋白表达水平明显升高(P<0.01),提示ENZA耐药株C4-2/ENZA中NDRG1低表达;与Lv-NC组比较,LvNDRG1组细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),提示成功构建NDRG1基因过表达C4-2/ENZA耐药细胞株。MTT法,与C4-2细胞比较,C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显升高(P<0.01),RI为17.78;与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显降低(P<0.01)。EGF处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显升高(P<0.01);与Lv-NDRG1组比较,Lv-NDRG1+EGF组C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显升高(P<0.01)。与ENZA处理前比较,不同浓度ENZA处理24 h,C4-2和C4-2/ENZA细胞增殖活性均逐渐降低(F=223.80,P<0.01;F=81.46,P<0.01)。ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组C4-2/ENZA细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。EGF处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组C4-2/ENZA细胞增殖活性明显升高(P<0.01),Lv-NDRG1+EGF组C4-2/ENZA细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。选择10.000μmol·L^(-1) ENZA和干预24 h作为后续检测浓度及时间点。流式细胞术,ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与Lv-NC+ENZA组比较,Lv-NDRG1+ENZA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。EGF处理24h,与Lv-NDRG1组比较,Lv-NDRG1+EGF组细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Lv-NDRG1+ENZA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与Lv-NDRG1+ENZA组比较,Lv-NDRG1+EGF+ENZA组细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。Western blotting法,ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组细胞中AR和PSA蛋白表达水平及p-ARSer^(213)/AR和p-ARSer^(81)/AR比值均明显降低(P<0.05或P<0.01)。EGF处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组细胞中AR和PSA蛋白表达水平及p-ARSer^(213)/AR和p-ARSer^(81)/AR比值均明显升高(P<0.05或P<0.01);与Lv-NDRG1组比较,Lv-NDRG1+EGF组细胞中AR和PSA蛋白表达水平及p-ARSer^(213)/AR和p-ARSer^(81)/AR比值均明显升高(P<0.01)。结论:NDRG1过表达可降低CRPC对ENZA的耐药性,其作用机制可能与抑制AR信号转导有关。

N-myc下游调节基因1在乳腺癌中表达的临床病理意义

目的:探讨N-myc下游调节基因1(N-myc downstream-regulated gene 1,NDRG1)在乳腺癌中表达。方法:收集乳腺癌病例及相应的临床资料包括随访资料,应用免疫组织化学技术检测良性病变(BBD)47例,无淋巴结转移乳腺癌(NMBC)83例,有淋巴结转移乳腺癌(MBC)107例及配对淋巴结转移灶(PLNM)107例中NDRG1的表达,分析NDRG1表达与乳腺癌临床病理指标间(患者年龄、肿块大小、临床分期、组织学类型和分级、淋巴结转移、雌孕激素受体和c-erb B2水平、绝经史)及生存状态的关系。结果:通过免疫组化技术检测乳腺癌中NDRG1的表达,结果显示阳性表达率分别为BBD(95.7%,45/47),NMBC(96.4%,80/83),MBC(98.1%,105/107),PMLN(90.7%,97/107),MBC组织中NDRG1阳性表达率显著高于PMLN中阳性表达率(P=0.021)。NDRG1与组织学分级相关(P=0.041),即分化越差的癌表达NDRG1越强。NDRG1的表达状态与乳腺癌患者的生存预后无显著性相关(P=0.196)。结论:NDRG1表达与乳腺癌淋巴结转移和分化有一定关系。