配体对白蛋白稳定性影响的研究进展

应对人血白蛋白制备与储存过程中复杂的温度、光照等条件,提高白蛋白的稳定性十分必要。本文从配体与白蛋白结合的角度,阐述了配体对白蛋白的稳定效果和简单的稳定机制。通过综述对比可以得出,常见配体辛酸钠主要起到提升热稳定性作用,常见配体N-乙酰-L-色氨酸主要起到提升抗氧化性的作用,而相较于N-乙酰-L-色氨酸,近些年研究的N-乙酰-L-甲硫氨酸具有更好的抗氧化性和抗光氧化性。

N-乙酰-L-色氨酸具有对新生鼠脑缺血/缺氧损伤的保护作用

目的探讨N-乙酰-L-色氨酸(L-NAT)对新生鼠脑缺血/缺氧损伤的保护作用。方法出生第7天的沙土鼠90只,随机分为正常对照组、缺血/缺氧组和L-NAT组。制备脑缺血/缺氧损伤模型,L-NAT组在造模前30min腹腔注射L-NAT(5mg/kg)。用Fluoro-Jade B(FJB)染色法观察细胞的死亡情况;用免疫荧光染色、Westernblotting观察活化的Caspase-3和Caspase-9在各组的表达。结果 L-NAT可使缺血/缺氧损伤后FJB阳性细胞数量减少,并抑制缺血/缺氧后Caspase-3和Caspase-9的活化。结论 L-NAT对新生鼠脑缺血/缺氧损伤动物模型具有保护作用。

N-乙酰-L-色氨酸减轻H_2O_2诱导小鼠海马神经元细胞凋亡

目的探讨N-乙酰-L-色氨酸(L-NAT)对海马神经元(PHN)缺血低氧损伤的影响。方法用600μmol/L H2O2诱导PHN制备海马神经元细胞凋亡模型,采用免疫荧光染色检测caspase-3的表达,Rhodamine 123染色检测线粒体膜势能(ΔΨm)的改变,锥虫蓝染色检测细胞存活率,比色法检测caspase-3、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,Westernblot检测caspase-3及凋亡诱导因子(AIF)和细胞色素C(CytC)等线粒体促凋亡因子在胞质蛋白和线粒体蛋白中的表达。结果 L-NAT可减轻H2O2所引起的细胞形态的死亡、存活率的降低、LDH的释放、caspase-3的激活、线粒体膜势能的丧失及AIF和CytC等线粒体促凋亡因子的释放。结论 L-NAT能通过抑制caspase依赖性和非依赖性的细胞凋亡途径,减轻H2O2诱导的小鼠海马神经元的细胞损伤。

N-乙酰-L-色氨酸对新生鼠脑缺血缺氧纹状体损伤的保护作用

目的探讨N-乙酰-L-色氨酸(L-NAT)对新生鼠脑缺血缺氧纹状体损伤的保护作用。方法用出生第7天的SD大鼠制备新生鼠脑缺血缺氧模型,HE染色观察纹状体的形态学变化;免疫荧光染色观察Caspase3、Bcl-2和Bax的表达情况。结果与Sham组相比,HIE组纹状体中神经细胞排列紊乱,且数量明显减少,Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达升高;HIE+L-NAT组纹状体细胞的损伤程度减轻,Bax、Caspase-3表达下降,Bcl-2的表达进一步升高。结论 L-NAT可能通过调节Bcl-2家族蛋白的表达减轻纹状体细胞的损伤程度,从而保护新生鼠脑缺血缺氧损伤。

乙酰化酶动力学拆分N-乙酰色氨酸

在应用 Donald方法的基础上 ,通过选择性水解合成了 DL-N-乙酰色氨酸 ,在酰基水解酶的作用下 ,可将DL-N-乙酰色氨酸拆分成 L-和 D-色氨酸 ,两种对映体的光学纯度都在 98%以上。

HPLC同时测定复方氨基酸注射液中3个氨基酸的含量

目的:建立HPLC法同时测定复方氨基酸注射液中色氨酸、酪氨酸、乙酰酪氨酸的含量。方法:采用Waters Symmetry■C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为8 mmol·L^-1磷酸二氢钾溶液-甲醇(9∶1),检测波长280 nm,流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃。结果:3个氨基酸可完全分离,色氨酸、酪氨酸、乙酰酪氨酸的线性范围分别为12.15~242.96、4.06~81.13、12.36~247.20μg·mL^-1(r均为0.9999),回收率分别为98.0%、99.4%、102.0%(n=9)。7家企业生产的复方氨基酸注射液中色氨酸、酪氨酸、乙酰酪氨酸的含量分别为88.7%~113.8%、89.4%~103.1%、89.9%~101.3%,结果均合格。结论:所用方法可同时测定复方氨基酸注射液中3个氨基酸含量,并为现行标准的提高提供可靠依据。

N-乙酰-L-色氨酸对大鼠肝脏缺血再灌注后肠损伤的保护作用

目的探讨N-乙酰-L-色氨酸(L-NAT)对大鼠肝脏缺血再灌注中肠损伤的保护作用。方法将健康成年雄性SD大鼠24只分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)和缺血再灌注加L-NAT组(IR+L-NAT组)。用夹闭肝中叶和左叶肝蒂分支的方法制作肝缺血再灌注模型,用苏木素-伊红(HE)染色法观察小肠组织的形态学结构,用免疫组织化学染色观察激活型Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达。结果 (1)IR组小肠绒毛结构破坏,肠黏膜充血脱落,上皮细胞变性坏死,出现炎症细胞浸润;LNAT可使之减轻。(2)免疫组织化学染色显示,与Sham组相比,IR组激活型Caspase-3、Bcl-2和bax的表达升高,L-NAT干预后,Caspase-3和Bax的表达下降,而Bcl-2的表达进一步升高。结论 L-NAT可抑制肝脏缺血再灌注损伤引起的小肠上皮细胞凋亡,减轻小肠上皮细胞损伤。

基于化学成分相似性的川贝母茎叶药效研究

目的在化学成分指引下对川贝母Fritillaria cirrhosa茎叶的药效作用进行研究,为川贝母茎叶的综合开发利用提供依据。方法采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法检测川贝母茎叶及鳞茎中的化学成分,比较两者的相似性,推测川贝母茎叶的功效。选择两者有代表性的30个共有化学成分,采用网络药理学方法研究川贝母茎叶对肺炎、支气管炎、支气管哮喘的作用靶点及其机制,并通过动物实验对其进行药效验证。结果检测得到川贝母茎叶与鳞茎共有成分759个,筛选前30种主要化学成分,搜索得到药物潜在靶点共1816个;检索得到支气管哮喘靶点2358个、肺炎靶点5014个、支气管炎靶点1964个;川贝茎叶对肺炎、支气管炎、支气管哮喘的共同靶点有333个,基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析得到GO条目762个(P<0.05),其中生物过程条目617个、细胞组成条目50个、分子功能条目95个,分别占81%、7%、12%;涉及的京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路主要有代谢通路和癌症通路等。氨水引咳实验及化痰实验结果显示,茎叶水提组与可待因组和急支糖浆组比较,咳嗽次数无显著差异,均能显著增加小鼠酚红排泌量。结论川贝母茎叶与鳞茎化学成分基本相同,可能与鳞茎具有相似的功效,川贝茎叶中的异鼠李素-7-O-葡糖苷(isorhamnetin-7-O-glucoside)、精胺(spermine)、N-乙酰基-L-色氨酸(N-acetyl-L-tryptophan)、γ-亚麻酸(γ-linolenic acid)等成分可能通过CCND1、EP300、CDK2、INS、EGF、CDC42、DNMT1、PARP1等靶点,调节代谢通路和癌症通路等信号通路,发挥其止咳化痰作用,可为川贝母茎叶的进一步开发利用提供依据。