增殖细胞核抗原和细胞分化相关基因N-myc下游调节基因1在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞分化相关基因N-myc下游调节基因1(NDRG1)在乳腺癌中的表达。方法选择乳腺手术切除标本90例进行切片,应用免疫组织化学链霉亲和素-生物素复合物(SABC)法检测45例乳腺癌组织、23例乳腺增生组织、22例癌旁正常乳腺组织中PCNA和NDRG1蛋白的表达情况,并分析其与乳腺癌生物学行为的关系。结果 PCNA在癌旁正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺癌组织中的表达率分别为36.3%、62.5%和88.9%,PCNA在癌旁正常乳腺组织中的表达明显低于乳腺增生组织(P<0.05)和乳腺癌组织(P<0.05)。NDRG1在癌旁正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺癌组织中的表达率分别为63.6%、30.4%和15.5%,NDRG1在癌旁正常乳腺组织中的表达明显高于乳腺增生组织(P<0.05)和乳腺癌组织(P<0.05)。PCNA与NDRG1表达呈负相关(r=-0.679,P<0.05)。结论 PCNA与NDRG1共同参与乳腺癌的发生与发展,联合检测PCNA和NDRG1蛋白有助于判断乳腺癌的恶性程度。

自噬蛋白Beclin-1与N-myc下游调控基因2在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的探索自噬蛋白Beclin-1和N-myc下游调控基因2(NDRG2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达,并探讨两种蛋白作为ESCC预后分子标志物的临床价值。方法采用免疫组织化学染色检测Beclin-1与NDRG2在121例ESCC组织中的表达,通过Pearson相关分析两者表达与临床病理参数的关系。根据Beclin-1与NDRG2的表达情况将所有患者分为2组,高、低表达组的生存概率通过Kaplan-Meier曲线计算,Log-rank检验用于生存分析的比较。采用Cox比例风险模型进行单因素和多因素分析,确定ESCC患者的独立预后因子。结果免疫组织化学染色分析显示Beclin-1蛋白在121例ESCC及癌旁组织中的阳性表达率分别为40.5%(49/121)和59.5%(68/121),差异有统计学意义(χ^(2)=5.973,P=0.015)。NDRG2蛋白在ESCC组织中的阳性表达率亦明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(46.3%vs.61.2%;χ^(2)=5.385,P=0.020)。Beclin-1低表达者有更为频繁的淋巴结转移(χ^(2)=6.158,P=0.013)和更晚的TNM分期(χ^(2)=4.538,P=0.033),而NDRG2低表达与更晚的T分期(χ^(2)=6.607,P=0.010)和TNM分期(χ^(2)=5.744,P=0.017)相关。Kaplan-Meier曲线显示,Beclin-1低表达与高表达患者的3年总体生存(OS)率分别为44.3%和60.9%,差异有统计学意义(χ^(2)=5.696,P=0.017)。NDRG2低表达者的预后亦明显低于NDRG2高表达者,3年OS率分别为43.9%和59.2%(χ^(2)=9.004,P=0.003)。单、多因素Cox比例风险模型分析表明,Beclin-1低表达(HR=1.727,95%CI:1.017~2.934,P=0.043)、NDRG2低表达(HR=1.671,95%CI:1.023~2.730,P=0.040)与TNMⅡ~Ⅲ期(HR=3.823,95%CI:2.133~6.852,P<0.001)是ESCC患者预后不良的独立预测因素。结论Beclin-1和NDRG2表达在ESCC中明显下调,且与患者不良预后相关,其可能是预测ESCC患者生存的预后标志物。

N-myc下游调控基因1在肝细胞癌中的表达及其与预后的相关性

目的肝细胞癌(HCC)是肝最常见的原发性恶性肿瘤之一。N-myc下游调控基因1(NDRG1)在肝癌中的作用尚存争议。文章旨在证实NDRG1在HCC患者中的表达及其预后价值、潜在的生物学功能以及对免疫系统的影响。方法选择TCGA数据库中的肝癌数据,包括58例正常肝组织标本和407例肝癌标本及与之相应的临床资料,对NDRG1基因在正常肝组织和肝癌组织中的表达进行分析。使用GTEx数据库显示NDRG1在人类肝组织中的表达。利用HPA分析NDRG1蛋白在HCC的表达情况。根据NDRG1表达的中位数,将所有患者分为NDRG1低表达组和NDRG1高表达组,并分析2组的生存情况。分析NDRG1表达与组织学分级(G)、临床S分期、临床T分期相关性。通过GSEA富集分析KEGG通路,探讨NDRG1的生物学功能。使用TIMER和CIBERSORT来分析HCC中NDRG1与免疫浸润细胞的相关性。结果与正常肝组织相比,肝癌组织中NDRG1表达增加(P<0.001)。NDRG1表达与组织学分级(G)(P<0.001)、临床S分期(P=0.03)、临床T分期(P=0.018)呈正相关。NDRG1的高表达与较差的总生存率显著相关(P=0.005)。单因素Cox分析分析显示NDRG1高表达与较差的总生存率显著相关(P<0.001)。多因素Cox分析分析表明,高NDRG1表达是独立危险因素,与肝细胞癌患者的总生存期密切相关(P<0.001)。通过GSEA分析,发现NDRG1可能通过DNA修复、E 2 F、MYC-V 1、G 2 M检查点、P53通路、TGF-β通路等途径调控肿瘤的发生发展。TIMER和CIBERSORT分析显示NDRG1的高表达与M 0巨噬细胞呈正相关。结论NDRG1在肝癌组织中高表达,提示预后不佳。可能通过肿瘤免疫浸润细胞改变肿瘤微环境促进肝癌的发生发展。NDRG1可作为HCC预后的生物学标志物。

三叶因子2和N-myc下游调节基因1在不同子宫内膜组织中的表达

目的 探讨三叶因子2（TFF2）和N-myc下游调节基因1（NDRG1）在不同子宫内膜组织中的表达,为早期诊断子宫内膜癌提供新的生物学指标。方法 收集珠海市人民医院经手术切除并经病理检查确诊为子宫内膜癌组织157例,另选择同期经手术切除并经病理检查确诊的子宫内膜不典型增生组织30例及其他病因手术切除的正常子宫内膜20例,分别检测其TFF2和NDRG1蛋白的表达情况,并分析TFF2和NDRG1蛋白的表达与子宫内膜癌临床病理因素的关系。结果 与正常子宫内膜和子宫内膜不典型增生组织比较,TFF2在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著降低（P〈0.05）,但NDRG1在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。TFF2在Ⅰ、Ⅱ期子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著高于Ⅲ~Ⅳ期（P〈0.05）;高、中分化子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著高于低分化组织及其他类型（P〈0.01）。与深肌层浸润的子宫内膜癌比较,浅肌层浸润的子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著升高（P〈0.05）;与有淋巴结转移的子宫内膜癌比较,无淋巴结转移的子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。而高、中度分化的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著低于低分化及其他类型（P〈0.05）。浅肌层浸润的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著低于深肌层浸润（P〈0.01）,与无淋巴结转移的子宫内膜癌比较,有淋巴结转移的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。结论 在子宫内膜组织中,TFF2表达的缺失及NDRG1蛋白的高表达可能与子宫内膜癌的发生发展有重要关系,有望在子宫内膜癌的早期诊断、判断是否存在侵袭转移等临床评估中发挥作用。

行为学干预对血管性痴呆大鼠神经再生及脑组织N-myc下游调节基因1蛋白表达的影响

目的探讨不同干预方法对血管性痴呆(VD)大鼠神经再生及脑组织N-myc下游调节基因1(NDRG1)蛋白表达的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,训练组,b FGF组。采用两血管阻断加硝普钠降压法制作大鼠VD动物模型,用HE、TTC染色法和免疫组织化学方法检测海马组织NDRG1蛋白的表达及穿梭箱训练和b FGF的干预作用。结果脑缺血再灌注第7天缺血海马神经元NDRG1阳性细胞明显增多,且随缺血再灌注时间的延长逐渐增多,第21天达高峰。应用穿梭箱训练和b FGF的干预后NDRG1阳性细胞明显增加。结论穿梭箱训练和b FGF促进神经再生作用可能由NDRG1信号介导。

高危型人乳头瘤病毒感染宫颈癌组织中N-myc下游调节基因1蛋白表达及其临床意义分析

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染宫颈癌组织中N-myc下游调节基因1(NDRG1)蛋白表达及其临床意义。方法选取50例高危型HPV感染宫颈癌患者作为宫颈癌组,同期50例高危型HPV感染宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为CIN组。对比两组组织中NDRG1蛋白表达差异,分析宫颈癌组织中NDRG1蛋白表达情况与临床特征的关系,并分析宫颈癌患者预后的影响因素。结果宫颈癌组患者宫颈癌组织中NDRG1蛋白阳性表达率高于CIN组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。NDRG1蛋白阳性表达与NDRG1蛋白阴性表达高危型HPV感染宫颈癌患者国际妇产科联盟(FIGO)分期、宫旁侵犯情况、淋巴结转移情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。NDRG1蛋白阴性表达高危型HPV感染宫颈癌患者生存情况优于NDRG1蛋白阳性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。FIGO分期为Ⅲ期、合并宫旁侵犯、合并淋巴结转移、NDRG1蛋白阳性表达均是高危型HPV感染宫颈癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论组织中NDRG1蛋白阳性表达是高危型HPV感染宫颈癌患者病情严重、预后不良的重要影响因素。

上调N-myc下游调节基因1表达对胰腺癌细胞增殖及凋亡的作用

目的观察磷酸化增强型绿色荧光蛋白-N-myc下游调节基因N3(p EGFP-NDRG1-N3)上调Nmyc下游调节基因1(NDRG1)表达的胰腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响并探讨其机制。方法以Western blot法对PANC-1、BXPC-3、CAPAN-2、SW1990细胞中NDRG1表达进行检测;构建过表达质粒p EGFPNDRG1-N3转染CAPAN-2细胞,以免疫荧光、Western blot法及实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上调效率;采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测转染后细胞增殖;碘化丙啶(PI)法检测细胞周期;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Western blot显示,NDRG1在4组细胞株中均有表达,而在低分化细胞(PANC-1)中的表达量要高于中分化(BXPC-3)及高分化细胞株(CAPAN-2、SW1990)(P<0.05);免疫荧光显示,p EGFP-NDRG1-N3组荧光细胞数占总细胞数>70%,NDRG1在蛋白及m RNA水平表达上调;在m RNA水平,NDRG1表达上调后Parp、Cleaved Parp、p-P53、Cleaved-Capase3无改变(t=1.456、1.164、2.914和1.075,P>0.05)。在蛋白水平,Parp表达下调,Cleaved Parp表达上调,p-P53下调,Cleaved-Capase3下调(t=6.104、12.273、3.691和14.227,P<0.05);MTT显示,在96和120 h与p EGFP-N3组比较,p EGFP-NDRG1-N3转染后CAPAN-2细胞增殖能力增强(t=8.176和2.246,P<0.05);PI法显示,转染p EGFP-NDRG1-N3的CAPAN-2细胞停留在G1期比例增高,G2及S期比例减少,与p EGFP-N3组比较,差异有统计学意义(t=3.651、4.133和3.092,P<0.05);p EGFPNDRG1-N3凋亡低于p EGFP-N3组,差异有统计学意义(t=9.161,P<0.01)。结论胰腺癌细胞NDRG1表达上调促进胰腺癌细胞增殖,抑制凋亡,促进细胞进入G1期,可作为胰腺癌治疗新的靶向候选基因。

N-MYC及NDRG1在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞生物学特性的影响

目的分析N-MYC及N-MYC下游调节基因1(NDRG1)在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞生物学特性的影响。方法收集2021年1月至2023年5月于该院行手术切除且经病理确诊为胃癌的82例患者的胃癌组织及癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测N-MYC、NDRG1 mRNA相对表达量,收集患者临床资料,分析N-MYC、NDRG1 mRNA表达与患者临床病理特征关系。选择对数生长期NCI-N87细胞,将N-MYC干扰质粒(si-N-MYC)与其阴性对照(si-NC)分别转染到NCI-N87细胞中,记为si-NC组、si-N-MYC组;将si-N-MYC分别与anti-NC、anti-NDRG1共转染至NCI-N87细胞中,记为si-N-MYC+anti-NC组、si-N-MYC+anti-NDRG1组。采用CCK-8实验检测细胞增殖活性,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测细胞中N-MYC、NDRG1蛋白表达。结果胃癌组织N-MYC mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05),NDRG1 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.05)。不同胃癌TNM分期、淋巴结转移、远处转移患者N-MYC、NDRG1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-N-MYC组细胞增殖和侵袭能力下降(P<0.05),NDRG1蛋白表达下调(P<0.05)。与si-N-MYC+anti-NC组比较,si-N-MYC+anti-NDRG1组细胞增殖、侵袭能力增加(P<0.05)。N-MYC可靶向调控NDRG1,敲低NDRG1可逆转N-MYC对细胞产生的生物学作用。结论胃癌组织N-MYC mRNA表达上调、NDRG1 mRNA表达下调,二者参与胃癌的发生发展过程,并对胃癌细胞增殖、侵袭等恶性生物学行为有重要调控作用。

老年急性缺血性脑卒中患者N-myc下游调节基因3和信号素3A表达及其临床意义

目的分析老年急性缺血性脑卒中患者N-myc下游调节基因3(NDRG3)和信号素3A(SEMA3A)表达及其临床意义。方法选择2020年9月至2022年9月聊城市人民医院老年病科收治的老年急性缺血性脑卒中患者100例(研究组)。研究组根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为轻度组34例,中度组31例,重度组35例;出院后随访3个月,依照改良的Rankin量表评分分为预后良好组69例,预后不良组31例。另选取同期我院健康体检者100例(对照组)。使用Westernblot法检测外周血单个核细胞(PBMC)中NDRG3、SEMA3A表达,ELISA法检测外周血内皮生长因子、转化生长因子β1、TNF-α、白细胞介素17水平,Spearman等级相关性分析NDRG3、SEMA3A与NIHSS评分的相关性,ROC曲线分析NDRG3、SEMA3A对老年急性缺血性脑卒中患者预后不良的预测价值。结果研究组PBMC中NDRG3、SEMA3A表达较对照组明显升高(1.11±0.16vs0.76±0.13,0.78±0.13vs0.42±0.09,P<0.01)。轻度组、中度组、重度组PBMC中NDRG3、SEMA3A表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。预后不良组NDRG3、SEMA3A表达明显高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.01)。Spearman等级相关性分析显示,老年急性缺血性脑卒中患者NIHSS评分与NDRG3、SEMA3A表达呈正相关(r=0.597,P<0.01;r=0.618,P<0.01),NDRG3与SEMA3A表达呈正相关(r=0.477,P<0.01)。ROC曲线分析显示,NDRG3+SEMA3A联合预测的曲线下面积优于NDRG3、SEMA3A单独预测(0.962vs 0.861、0.880,P<0.01)。结论老年急性缺血性脑卒中患者NDRG3、SEMA3A表达上调,且与患者病情严重程度及预后密切相关。

N-myc下游调节基因1与肿瘤发生、发展及转移的关系

恶性肿瘤是危害人类健康最严重的一类疾病。目前，临床研究领域主要集中在肿瘤的早期发现和寻找新的有效的治疗手段。新的肿瘤标记物的发现可以为恶性肿瘤的诊断和治疗提供很大的帮助。N-myc下游调节基因1（NDRG1）是新近发现的与细胞分化有关的基因，能够被多种生理或病理因素刺激诱导表达。尽管其确切功能仍不十分清楚，但是它在恶性肿瘤中的异常表达引起许多学者的兴趣和关注，对它的研究也不断增多。本文就NDRG1与肿瘤的相关研究进展作一综述。

N-myc下游调控基因1在呼吸系统疾病中的研究进展

N-myc下游调控基因1(N-myc downstream regulated gene-1,NDRG1)是NDRG家族的第一个成员,与低氧和应激相关。NDRG1广泛分布在全身多种组织器官中,具有特有的分子结构和化学修饰。在肺中NDRG1主要表达在呼吸道组织内,其表达水平和化学修饰与多种呼吸系统疾病的发生发展有密切关系,包括感染性疾病、慢性气道炎性疾病、低氧相关疾病(如肺损伤、急性呼吸窘迫综合征)等,同时在肿瘤低氧微环境、肿瘤进展及耐药等方面也发挥重要作用。本文就NDRG1在呼吸系统疾病中的相关研究进展作一综述。

N-myc分化相关基因1与癌症的关系

N-myc分化相关基因1(N-myc downstream-regulated gene 1,NDRG1)在许多细胞的生理功能中起着重要作用,细胞生长、分化和多种应激的情况都可以影响NDRG1蛋白的表达水平,NDRG1的缺乏可能导致多种疾病。在多种癌细胞系中,NDRG1的转录和翻译与肿瘤的分化和转移有关。在缺氧环境中,NDRG1的表达水平上调,而在许多肿瘤细胞中都存在缺氧的现象,这使得NDRG1与缺氧和癌症之间存在着复杂的关系。NDRG1与癌症的关系使NDRG1可能作为癌症进展的标识和癌症诊断的辅助工具。

分化相关基因NDRG1在消化系统肿瘤中的研究进展

N-myc下游调节基因1（N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1）是近年来发现的一种分化相关基因,多种生理或病理因素的刺激可诱导NDRG1的表达,但其确切的生物学功能尚不完全清楚。

结直肠癌组织中lncRNA CCAT2和NDRG1的表达及意义

目的探讨结直肠癌(CRC)患者组织中长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录物2(CCAT2)、N-myc下游调节基因(NDRG)1的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法选取2018年2月至2020年2月在南通市中医院行CRC根治性手术治疗的96例CRC患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR检测组织中lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA表达,采用免疫组织化学检测组织中NDRG1蛋白表达,采用Kaplan-Meier曲线分析不同lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA表达组患者的预后差异,采用多因素Cox回归分析CRC预后影响因素。结果与癌旁组织比较,癌组织中lncRNA CCAT2表达较高,NDRG1 mRNA表达及蛋白阳性率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移比较,TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移的CRC患者癌组织中lncRNA CCAT2表达较高,NDRG1 mRNA表达较低(P<0.05)。lncRNA CCAT2高表达组3年累积生存率低于lncRNA CCAT2低表达组,而NDRG1 mRNA高表达组3年累积生存率高于NDRG1 mRNA低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期、淋巴结转移,lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA是CRC预后影响因素(P<0.05)。结论CRC组织中lncRNA CCAT2表达升高,NDRG1表达降低,二者均参与CRC肿瘤的进展,可作为评估CRC患者生存预后的新指标。

卵巢子宫内膜异位囊肿患者血清APRIL与NDRG1的水平表达及其临床价值研究

目的观察血清增殖诱导配体(a proliferation inducing ligand,APRIL),N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)水平变化,并分析其对卵巢子宫内膜异位囊肿(ovarian endometriomas,OEM)的诊断价值。方法选取2021年7月~2022年7月在自贡市第一人民医院就诊的132例OEM患者作为观察组,并进行定期随访,根据患者预后病情有无复发分为复发组(n=50)和未复发组(n=82)。同期在该院体检的健康者78例为对照组。采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中APRIL和NDRG1水平;并对复发组和未复发组的一般资料进行比较;采用Logistic回归分析影响OEM预后的相关因素;用Pearson法分析OEM患者血清APRIL与NDRG1表达相关性;绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清APRIL和NDRG1对OEM的诊断价值。结果与对照组相比,APRIL水平(35.28±6.81ng/ml vs 26.37±3.19ng/ml)和NDRG1水平(124.39±15.67μg/L vs 9.67±10.82μg/L)升高,差异具有统计学意义(t=10.864,17.278,均P<0.05)。与未复发组比较,复发组血清APRIL(40.38±7.88ng/ml vs 32.16±6.18ng/ml)和NDRG1(132.04±19.83μg/L vs 119.73±13.16μg/L)水平升高,差异具有统计学意义(t=6.668,4.287,均P<0.05)。Logistic回归分析显示,血清APRIL和NDRG1水平是影响OEM患者预后的危险因素(Waldχ^(2)=11.839,28.437,均P<0.001)。Pearson法分析结果显示,OEM患者血清APRIL水平与NDRG1水平呈正相关(r=0.439,P<0.001)。血清APRIL,NDRG1水平联合诊断OEM的曲线下面积(AUC)为0.849,灵敏度和特异度分别为73.95%,85.37%,优于APRIL和NDRG1单独预测(Z=2.644,2.094,P=0.008,0.036)。结论子宫内膜异位囊肿患者血清APRIL和NDRG1水平升高,二者联合对子宫内膜异位囊肿诊断具有较高的临床价值,且与子宫内膜异位囊肿患者的预后密切相关。

卵巢癌组织中LSD1、NDRG1基因表达量与癌细胞迁移、侵袭的相关性研究

目的:研究卵巢癌组织中赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine-specific demethylase 1,LSD1)、N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated 1,NDRG1)基因表达量与癌细胞迁移、侵袭的相关性。方法:选择2014年3月~2017年7月扶风县人民医院接受手术切除的卵巢癌患者作为研究对象,手术切除后取卵巢癌组织和癌旁组织,测定LSD1、NDRG1基因及迁移基因、侵袭基因的表达量。结果:卵巢癌组织中LSD1、YKL40、COX2、Twist、IFITM1、CatL、CTHRC1、MMP2、FUNDC1基因的mRNA表达量显著高于癌旁组织,NDRG1、E-cadherin、Wnt5a基因的mRNA表达量显著低于癌旁组织;LSD1高表达的卵巢癌组织中YKL40、COX2、Twist、IFITM1、CatL、CTHRC1、MMP2、FUNDC1的mRNA表达量显著高于LSD1低表达的卵巢癌组织,E-cadherin、Wnt5a基因的mRNA表达量显著低于LSD1低表达的卵巢癌组织。结论:卵巢癌组织中LSD1高表达、NDRG1低表达能够促进癌细胞的迁移、侵袭。

NDRG1通过ERK通路增强肝细胞癌对索拉菲尼的耐药

目的 探究N-myc下游调控基因1(NDRG1)对肝细胞癌(HCC)的作用,以及NDRG1是否影响HCC对索拉菲尼(Sorafenib)的敏感性。方法 通过TCGA数据库预测NDRG1在HCC中的表达水平,并通过蛋白质印迹(WB)实验和免疫组织化学(IHC)染色进行验证。构建NDRG1敲除细胞系进行体外实验,通过肿瘤功能学实验细胞计数试剂盒8(CCK-8)、EdU染色、细胞划痕、Transwell实验研究NDRG1及联合Sorafenib对HCC细胞增殖、迁移与侵袭以及凋亡的影响。利用裸鼠皮下荷瘤进行体内实验,研究NDRG1和Sorafenib对HCC成瘤的影响;通过WB实验和IHC染色确定NDRG1调节HCC对Sorafenib敏感性的通路。结果 WB实验和IHC染色显示,NDRG1在HCC中高表达,与TCGA数据结果一致。肿瘤功能学实验结果表明NDRG1敲除或Sorafenib刺激使HCC细胞增殖、迁移及侵袭能力减弱,肿瘤细胞凋亡增加,而NDRG1敲除联合Sorafenib使HCC细胞增殖、迁移与侵袭能力进一步减弱,肿瘤细胞凋亡进一步增加(P<0.000 1)。小鼠皮下荷瘤模型结果表明NDRG1敲除或Sorafenib刺激使荷瘤体积及质量减小,而NDRG1敲除联合Sorafenib使荷瘤体积及质量进一步减小(P<0.000 1)。WB和IHC结果表明NDRG1敲除联合Sorafenib可降低Erk1/2的磷酸化水平。结论 NDRG1在HCC中高表达,高表达NDRG1促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制肿瘤细胞凋亡。NDRG1通过ERK信号通路增强HCC对Sorafenib的耐药。

NDRG1过表达对去势抵抗性前列腺癌耐药细胞株C4-2/ENZA耐药性的影响及其机制

目的:探讨N-myc下游调节基因1(NDRG1)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)恩杂鲁胺(ENZA)耐药的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养人CRPC C4-2细胞和ENZA耐药株C4-2/ENZA细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测C4-2/ENZA细胞及其亲本C4-2细胞中NDRG1 mRNA表达水平,Western blotting法检测C4-2/ENZA细胞及其亲本C4-2细胞中NDRG1、雄激素受体(AR)和前列腺特异性抗原(PSA)蛋白表达水平,以验证细胞转染效率。将C4-2/ENZA细胞分为空白组(正常培养不进行处理)、阴性对照慢病毒(Lv-NC)组(转染Lv-NC)、Lv-NDRG1组(转染Lv-NDRG1)、Lv-NC+ENZA组(转染Lv-NC后加入ENZA处理)、Lv-NDRG1+ENZA组(转染Lv-NDRG1后加入ENZA处理)、Lv-NDRG1+表皮生长因子(EGF)组(转染Lv-NDRG1后加入EGF处理)和Lv-NDRG1+EGF+ENZA组(转染Lv-NDRG1后加入EGF和ENZA处理)。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞半数抑制浓度(IC_(50))、耐药指数(RI)和细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,RT-qPCR法检测各组细胞中NDRG1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NDRG1、AR、第213位丝氨酸磷酸化雄激素受体(p-ARSer^(213))、第81位丝氨酸磷酸化雄激素受体(p-ARSer^(81))和PSA蛋白表达水平。结果:与C4-2细胞比较,C4-2/ENZA细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),AR和PSA蛋白表达水平明显升高(P<0.01),提示ENZA耐药株C4-2/ENZA中NDRG1低表达;与Lv-NC组比较,LvNDRG1组细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),提示成功构建NDRG1基因过表达C4-2/ENZA耐药细胞株。MTT法,与C4-2细胞比较,C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显升高(P<0.01),RI为17.78;与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显降低(P<0.01)。EGF处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显升高(P<0.01);与Lv-NDRG1组比较,Lv-NDRG1+EGF组C4-2/ENZA细胞IC_(50)明显升高(P<0.01)。与ENZA处理前比较,不同浓度ENZA处理24 h,C4-2和C4-2/ENZA细胞增殖活性均逐渐降低(F=223.80,P<0.01;F=81.46,P<0.01)。ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组C4-2/ENZA细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。EGF处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组C4-2/ENZA细胞增殖活性明显升高(P<0.01),Lv-NDRG1+EGF组C4-2/ENZA细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。选择10.000μmol·L^(-1) ENZA和干预24 h作为后续检测浓度及时间点。流式细胞术,ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与Lv-NC+ENZA组比较,Lv-NDRG1+ENZA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。EGF处理24h,与Lv-NDRG1组比较,Lv-NDRG1+EGF组细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Lv-NDRG1+ENZA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与Lv-NDRG1+ENZA组比较,Lv-NDRG1+EGF+ENZA组细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。Western blotting法,ENZA处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NDRG1组细胞中AR和PSA蛋白表达水平及p-ARSer^(213)/AR和p-ARSer^(81)/AR比值均明显降低(P<0.05或P<0.01)。EGF处理24 h,与Lv-NC组比较,Lv-NC+EGF组细胞中AR和PSA蛋白表达水平及p-ARSer^(213)/AR和p-ARSer^(81)/AR比值均明显升高(P<0.05或P<0.01);与Lv-NDRG1组比较,Lv-NDRG1+EGF组细胞中AR和PSA蛋白表达水平及p-ARSer^(213)/AR和p-ARSer^(81)/AR比值均明显升高(P<0.01)。结论:NDRG1过表达可降低CRPC对ENZA的耐药性,其作用机制可能与抑制AR信号转导有关。

雄激素受体通过微小RNA-9-5p/N-my下游调节基因1通路促进胰腺导管腺癌细胞侵袭的机制研究

目的探讨AR如何通过调控微小RNA(miRNA,miR)-9-5p和N-myc下游调节基因1(NDRG1)通路,从而影响胰腺导管腺癌(PDAC)细胞的侵袭。方法对PDAC组织和相应非肿瘤组织样本的分析。我们通过在PDAC细胞系PANC-1、BxPC-3细胞中过表达或敲低AR,用Transwell方法观察AR对PANC-1、BxPC-3及侵袭的影响。通过生信分析寻找能够调控靶基因NDRG1表达的miRNA,并用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证该miRNA与NDRG1的调控关系,观察其对PANC-1、BxPC-3细胞侵袭的影响。通过转染miR-9-5p和NDRG1等基因来评估对PANC-1、BxPC-3细胞侵袭能力的影响,采用t检验比较各组间差异。结果相对于载体对照细胞(PANC-1、BxPC-3-Ctrl),过表达AR促进了PDAC细胞(PANC-1、BxPC-3-oeAR)的PDAC细胞侵袭(0.65±0.07比2.11±0.52、0.74±0.05比2.28±0.65),差异有统计学意义(t=21.160、10.120,P<0.05)。相对对照细胞(PANC-1、BxPC-3-Scr),敲除AR抑制了PDAC细胞的侵袭(PANC-1-shAR、BxPC-3-shAR)(0.75±0.12比0.34±0.02、0.84±0.13比0.44±0.03)差异有统计学意义(t=45.117、13.155,P<0.01)。miR-9-5p模拟物能显著抑制AR过表达PDAC细胞PANC-1、BxPC-3的侵袭能力(0.67±0.06比2.25±0.22、0.88±0.07比2.07±0.32,t=15.124、8.156,P<0.05),而miR-9-5p抑制剂则能增强对照组细胞的侵袭能力(1.64±0.23比0.75±0.09、1.48±0.26比0.84±0.15,t=11.143、9.175,P<0.05)。PDAC组织里,miR-9-5p的产量明显低于正常胰腺组织(0.23±0.02比1.58±0.57,t=8.122,P<0.05)。利用双荧光素酶基因报告实验,我们更深入地肯定了miR-9-5p直接影响NDRG1的3’非翻译区(3’UTR),以此压低其表达。miR-9-5p的过表达显著降低了NDRG1蛋白水平(0.76±0.04比0.42±0.22,t=7.143、11.106,P<0.05),而miR-9-5p的抑制剂则提高了NDRG1蛋白表达(0.46±0.02比1.22±0.26,t=6.121、15.106,P<0.05)。oeAR显著增加了NDRG1的表达(0.37±0.02比1.56±0.45,t=8.197、8.996,P<0.05),而AR的抑制则减少了NDRG1的表达(0.66±0.05比0.22±0.04,t=11.751、6.196,P<0.05)。过表达NDRG1显著抑制PDAC细胞的侵袭能力(1.13±0.12比0.42±0.06,t=5.175、7.776,P<0.05)。NDRG1敲除PDAC细胞侵袭能力显著升高(0.56±0.06比1.36±0.27,t=16.151、17.135,P<0.01)。结论雄激素受体通过miR-9-5p/NDRG1通路抑制PDAC细胞侵袭的机制,为PDAC的治疗提供治疗策略。

转染NDRG1基因对宫颈癌细胞COX-2、VEGF表达及增殖的影响

目的:通过研究人类N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)对人宫颈癌SiHa细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达及细胞增殖的影响,深入探讨NDRG1抑制宫颈癌侵袭转移的作用机制。方法:经脂质体介导将含有NDRG1真核表达质粒转染人宫颈癌SiHa细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及RT-PCR、蛋白质印迹鉴定;蛋白质印迹法检测阳性克隆细胞COX-2及VEGF表达的改变;噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果:成功建立高表达NDRG1的阳性SiHa细胞克隆(N-12),并证实其COX-2和VEGF蛋白表达及细胞增殖活性均显著降低。结论:NDRG1可能通过下调宫颈癌细胞COX-2、VEGF的表达及抑制细胞增殖而起到抑制宫颈癌进展的作用。