老年急性缺血性脑卒中患者N-myc下游调节基因3和信号素3A表达及其临床意义

目的分析老年急性缺血性脑卒中患者N-myc下游调节基因3(NDRG3)和信号素3A(SEMA3A)表达及其临床意义。方法选择2020年9月至2022年9月聊城市人民医院老年病科收治的老年急性缺血性脑卒中患者100例(研究组)。研究组根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为轻度组34例,中度组31例,重度组35例;出院后随访3个月,依照改良的Rankin量表评分分为预后良好组69例,预后不良组31例。另选取同期我院健康体检者100例(对照组)。使用Westernblot法检测外周血单个核细胞(PBMC)中NDRG3、SEMA3A表达,ELISA法检测外周血内皮生长因子、转化生长因子β1、TNF-α、白细胞介素17水平,Spearman等级相关性分析NDRG3、SEMA3A与NIHSS评分的相关性,ROC曲线分析NDRG3、SEMA3A对老年急性缺血性脑卒中患者预后不良的预测价值。结果研究组PBMC中NDRG3、SEMA3A表达较对照组明显升高(1.11±0.16vs0.76±0.13,0.78±0.13vs0.42±0.09,P<0.01)。轻度组、中度组、重度组PBMC中NDRG3、SEMA3A表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。预后不良组NDRG3、SEMA3A表达明显高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.01)。Spearman等级相关性分析显示,老年急性缺血性脑卒中患者NIHSS评分与NDRG3、SEMA3A表达呈正相关(r=0.597,P<0.01;r=0.618,P<0.01),NDRG3与SEMA3A表达呈正相关(r=0.477,P<0.01)。ROC曲线分析显示,NDRG3+SEMA3A联合预测的曲线下面积优于NDRG3、SEMA3A单独预测(0.962vs 0.861、0.880,P<0.01)。结论老年急性缺血性脑卒中患者NDRG3、SEMA3A表达上调,且与患者病情严重程度及预后密切相关。

自噬蛋白Beclin-1与N-myc下游调控基因2在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的探索自噬蛋白Beclin-1和N-myc下游调控基因2(NDRG2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达,并探讨两种蛋白作为ESCC预后分子标志物的临床价值。方法采用免疫组织化学染色检测Beclin-1与NDRG2在121例ESCC组织中的表达,通过Pearson相关分析两者表达与临床病理参数的关系。根据Beclin-1与NDRG2的表达情况将所有患者分为2组,高、低表达组的生存概率通过Kaplan-Meier曲线计算,Log-rank检验用于生存分析的比较。采用Cox比例风险模型进行单因素和多因素分析,确定ESCC患者的独立预后因子。结果免疫组织化学染色分析显示Beclin-1蛋白在121例ESCC及癌旁组织中的阳性表达率分别为40.5%(49/121)和59.5%(68/121),差异有统计学意义(χ^(2)=5.973,P=0.015)。NDRG2蛋白在ESCC组织中的阳性表达率亦明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(46.3%vs.61.2%;χ^(2)=5.385,P=0.020)。Beclin-1低表达者有更为频繁的淋巴结转移(χ^(2)=6.158,P=0.013)和更晚的TNM分期(χ^(2)=4.538,P=0.033),而NDRG2低表达与更晚的T分期(χ^(2)=6.607,P=0.010)和TNM分期(χ^(2)=5.744,P=0.017)相关。Kaplan-Meier曲线显示,Beclin-1低表达与高表达患者的3年总体生存(OS)率分别为44.3%和60.9%,差异有统计学意义(χ^(2)=5.696,P=0.017)。NDRG2低表达者的预后亦明显低于NDRG2高表达者,3年OS率分别为43.9%和59.2%(χ^(2)=9.004,P=0.003)。单、多因素Cox比例风险模型分析表明,Beclin-1低表达(HR=1.727,95%CI:1.017~2.934,P=0.043)、NDRG2低表达(HR=1.671,95%CI:1.023~2.730,P=0.040)与TNMⅡ~Ⅲ期(HR=3.823,95%CI:2.133~6.852,P<0.001)是ESCC患者预后不良的独立预测因素。结论Beclin-1和NDRG2表达在ESCC中明显下调,且与患者不良预后相关,其可能是预测ESCC患者生存的预后标志物。

miR-181c-5p通过靶向N-myc下游调控基因2调控人胶质母细胞瘤生物学行为机制研究

目的探讨miR-181c-5p通过靶向N-myc下游调控基因2(NDRG2)调控人胶质母细胞瘤生物学行为的机制。方法选取2021年4月至2022年4月海南省第二人民医院收治的30例非功能区胶质瘤患者术中的胶质母细胞瘤(GBM)组织标本及邻近正常脑组织标本进行研究。应用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测GBM组织标本、正常脑组织标本中miR-181c-5p的表达水平;荧光素酶检测miR-181c-5p靶向调控NDRG2基因情况;应用qRT-PCR及免疫印迹试验(Western Blot)检测GBM组织标本中NDRG2的基因及蛋白表达水平;检测GBM细胞增殖、迁移和侵袭情况。结果GBM组织中NDRG2 mRNA相对表达量高于正常组织标本(P<0.05);双荧光素酶实验显示,miR-181c-5p模拟物(miR-181c-5p mimics)组NDRG2野生型(NDRG2 WT)的相对荧光素酶活性低于模拟物对照(NCmimics)组(P<0.05);miR-181c-5p抑制剂(miR-181c-5p inhibitor)组U87细胞中NDRG2 mRNA表达和蛋白表达高于抑制剂对照(NCinhibitor)组(P<0.05);miR-181c-5p mimics组U87细胞中NDRG2 mRNA表达和蛋白表达显著低于NC mimics组(P<0.05);细胞增殖-毒性试验(CCK-8)检测结果显示,转染sh-NDRG2(sh-NDRG2)组U87细胞增殖率低于转染sh-NC(sh-NC)组(P<0.05);miR-181c-5p inhibitor+sh-NDRG2组U87细胞增殖率低于miR-181c-5p inhibitor+sh-NC组(P<0.05)。Transwell实验显示,sh-NDRG2组U87细胞迁移数量及侵袭数量低于sh-NC组(P<0.05);miR-181c-5p inhibitor+sh-NDRG2组U87细胞迁移数量及侵袭数量低于miR-181c-5p inhibitor+sh-NC组(P<0.05)。结论miR-181c-5p能够通过调节NDRG2的表达,进而调节人胶质母细胞瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

N-myc下游调控基因1在肝细胞癌中的表达及其与预后的相关性

目的肝细胞癌(HCC)是肝最常见的原发性恶性肿瘤之一。N-myc下游调控基因1(NDRG1)在肝癌中的作用尚存争议。文章旨在证实NDRG1在HCC患者中的表达及其预后价值、潜在的生物学功能以及对免疫系统的影响。方法选择TCGA数据库中的肝癌数据,包括58例正常肝组织标本和407例肝癌标本及与之相应的临床资料,对NDRG1基因在正常肝组织和肝癌组织中的表达进行分析。使用GTEx数据库显示NDRG1在人类肝组织中的表达。利用HPA分析NDRG1蛋白在HCC的表达情况。根据NDRG1表达的中位数,将所有患者分为NDRG1低表达组和NDRG1高表达组,并分析2组的生存情况。分析NDRG1表达与组织学分级(G)、临床S分期、临床T分期相关性。通过GSEA富集分析KEGG通路,探讨NDRG1的生物学功能。使用TIMER和CIBERSORT来分析HCC中NDRG1与免疫浸润细胞的相关性。结果与正常肝组织相比,肝癌组织中NDRG1表达增加(P<0.001)。NDRG1表达与组织学分级(G)(P<0.001)、临床S分期(P=0.03)、临床T分期(P=0.018)呈正相关。NDRG1的高表达与较差的总生存率显著相关(P=0.005)。单因素Cox分析分析显示NDRG1高表达与较差的总生存率显著相关(P<0.001)。多因素Cox分析分析表明,高NDRG1表达是独立危险因素,与肝细胞癌患者的总生存期密切相关(P<0.001)。通过GSEA分析,发现NDRG1可能通过DNA修复、E 2 F、MYC-V 1、G 2 M检查点、P53通路、TGF-β通路等途径调控肿瘤的发生发展。TIMER和CIBERSORT分析显示NDRG1的高表达与M 0巨噬细胞呈正相关。结论NDRG1在肝癌组织中高表达,提示预后不佳。可能通过肿瘤免疫浸润细胞改变肿瘤微环境促进肝癌的发生发展。NDRG1可作为HCC预后的生物学标志物。

过表达N-Myc下游调节基因3促进Hela宫颈癌细胞增殖和迁移

目的研究过表达N-Myc下游调节基因(NDRG)3对Hela宫颈癌细胞增殖和迁移的作用。方法构建NDRG3过表达载体,利用Lipofectamine 2000转染试剂建立稳定转染NDRG3的Hela宫颈癌细胞株,细胞计数试剂(CCK)8和Transwell方法研究细胞增殖和迁移能力,酶联免疫吸附实验研究趋化因子CXC配体(L)5的表达情况。结果过表达NDRG3可明显促进Hela的增殖和迁移能力,并上调Hela的分泌性CXCL5蛋白水平。结论 NDRG3可经上调肿瘤相关基因CXCL5的水平参与宫颈癌进程。

N-myc下游调控基因家族与肿瘤相关性的研究进展

N-myc下游调控基因(NDRG)家族包括NDRG1、NDRG2、NDRG3和NDRG4四个成员,它们在不同组织中表达不同,作用也不尽相同。NDRG家族在肿瘤组织中存在异常表达,可能与肿瘤的发生、发展、转归有关,但目前关于NDRG家族成员对肿瘤的作用机制尚未完全明确。随着研究的不断深入,NDRG家族与肿瘤的关系将逐渐被揭示,或有可能成为药物治疗的新靶点。

N-myc下游调控基因1在呼吸系统疾病中的研究进展

N-myc下游调控基因1(N-myc downstream regulated gene-1,NDRG1)是NDRG家族的第一个成员,与低氧和应激相关。NDRG1广泛分布在全身多种组织器官中,具有特有的分子结构和化学修饰。在肺中NDRG1主要表达在呼吸道组织内,其表达水平和化学修饰与多种呼吸系统疾病的发生发展有密切关系,包括感染性疾病、慢性气道炎性疾病、低氧相关疾病(如肺损伤、急性呼吸窘迫综合征)等,同时在肿瘤低氧微环境、肿瘤进展及耐药等方面也发挥重要作用。本文就NDRG1在呼吸系统疾病中的相关研究进展作一综述。

N-Myc下游调控基因2在人腹膜间皮细胞表型转换过程中的作用

目的:探讨N-Myc下游调控基因2(N-Myc Downstream Regulated Gene 2,NDRG2)在人腹膜间皮细胞表型转换过程中的作用。方法:分别利用50 mmol/L的D型葡萄糖和甘露醇刺激人腹膜间皮细胞72 h。通过Real-time PCR及Western blotting检测NDRG2的表达;在未给予任何处理的人腹膜间皮细胞中,分别转染LV-NDRG2、shRNA-NDRG2及空载体。通过Real-time PCR及Western blotting检测NDRG2及细胞表型转换相关蛋白的表达。结果:高糖刺激后,Real-time PCR及Western blotting结果显示,NDRG2的表达下降;上调NDRG2的表达后,抑制人腹膜间皮细胞的表型转换;下调NDRG2的表达后,促进人腹膜间皮细胞的表型转换(P <0. 05)。结论:高糖刺激通过下调DNRG2的表达,促进人腹膜间皮细胞的表型转换。

血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3水平与缺血性脑卒中患者病情和预后的关系

目的探究血清血管性血友病因子裂解蛋白酶13(ADAMTS13)、信号蛋白3A(SEMA3A)、N-myc下游调控基因3(NDRG3)水平与缺血性脑卒中(IS)患者病情和预后的关系。方法选择312例IS患者作为IS组,312例健康体检者作为对照组。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分对IS患者病情严重程度进行评估,根据NIHSS评分将患者分为重度组(n=45)、中度组(n=112)、轻度组(n=155)。对所有患者随访3个月,采用改良Rankin量表(mRS)评分对预后进行评价,根据mRS评分将患者分为预后不良组(n=103)、0~2分为预后良好组(n=209)。Spearman相关法分析血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3水平与mRS评分、NIHSS评分的相关性;受试者工作特征曲线分析血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3水平对IS患者预后的预测价值。结果与对照组比较,IS组血清SEMA3A、NDRG3水平高,ADAMTS13水平低(P均<0.05)。轻度组、中度组、重度组血清SEMA3A、NDRG3水平逐渐升高,ADAMTS13水平逐渐降低(P均<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组血清SEMA3A、NDRG3水平高,ADAMTS13水平低(P均<0.05)。血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3联合预测IS患者预后的曲线下面积为0.861,均高于各自单独预测(P均<0.05)。ADAMTS13与NIHSS评分、mRS评分呈负相关(r分别为-0.527、-0.435,P均<0.05),SEMA3A与NIHSS评分、mRS评分呈正相关(r分别为0.443、0.496,P均<0.05),NDRG3与NIHSS评分、mRS评分呈正相关(r分别为0.487、0.515,P均<0.05)。结论IS患者血清SEMA3A、NDRG3水平高,ADAMTS13水平低,三者与患者病情和预后相关,可预测IS患者预后。

N-myc下游调节基因对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制研究

目的探究N-myc下游调节基因(NDRG1)对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并分析可能的机制。方法体外培养人胰腺癌细胞系MZ-3262细胞,并分为空白对照组(细胞不做特殊处理)、pcDNANC组(细胞转染pcDNA-NC)、pcDNA-NDRG1组(细胞转染pcDNA-NDRG1)、通路抑制剂组[转染pcDNA-NDRG1后加入含终浓度为1 mmol/L磷脂肌醇3-激酶(PI3K)通路激活剂bpv的培养液];采用实时荧光定量聚合酶链反应检测NDRG1 m RNA的表达;CCK-8法检测细胞存活情况;划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力;Western blotting检测NDRG1、增殖及侵袭迁移相关蛋白[细胞增殖相关核抗原(PCNA)、E-钙黏附蛋白(E-Cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)]及蛋白激酶B/转录激活因子3(Akt/STAT3)通路蛋白[PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、STAT3]的表达。结果与空白对照组、pcDNA-NC组比较,pcDNA-NDRG1组、通路激活剂组MZ-3262细胞NDRG1 mRNA和蛋白、E-Cadherin蛋白相对表达量升高(P<0.05),细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合率、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-STAT3/STAT3相对表达量降低(P<0.05);但通路激活剂组MZ-3262细胞NDRG1 mRNA和蛋白、E-Cadherin蛋白相对表达量低于pcDNA-NDRG1组(P<0.05),细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合率、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-STAT3/STAT3相对表达量高于pcDNA-NDRG1组(P<0.05)。结论过表达NDRG1表达可能通过抑制PI3K/Akt/STAT3通路活化,抑制胰腺癌MZ-3262细胞增殖、侵袭及迁移。

LSD1、NDRG1基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响及两者的关系

目的观察赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)、N-myc下游调节基因1(NDRG1)基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响,并探讨两者的作用关系。方法取人卵巢癌SKOV3细胞株,通过shRNA方法建立诱导型干扰LSD1的SKOV3细胞株(LSD1-shRNA-SKOV3),将其分为对照组、Dox组、转染组和联合组。对照组用水处理,Dox组用100 ng/m L Dox处理,转染组转染NDRG1 siRNA,联合组转染NDRG1 siRNA的同时加入100 ng/m L Dox处理。采用实时荧光定量PCR和Western blotting法分别检测4组LSD1、NDRG1基因mRNA和蛋白表达;染色质免疫沉淀ChIP法和实时荧光定量PCR法分析对照组和Dox组NDRG1基因启动子区组蛋白H3第4位赖氨酸的二甲基化(H3K4me2)程度;Transwell小室测算4组细胞迁移率。结果 Dox组、转染组、联合组、对照组LSD1mRNA表达分别为0.407±0.029、0.936±0.024、0.413±0.018、0.941±0.035,蛋白表达分别为0.306±0.013、0.879±0.036、0.341±0.057、0.893±0.052,Dox组、联合组与对照组相比,P均<0.05。Dox组、转染组、联合组、对照组NDRG1 mRNA表达分别为0.791±0.045、0.107±0.016、0.165±0.021、0.239±0.027,蛋白表达分别为0.907±0.005、0.130±0.006、0.216±0.019、0.358±0.062,Dox组、转染组、联合组与对照组相比,联合组与Dox组、转染组相比,P均<0.05。Dox组、对照组细胞NDRG1基因启动子区H3K4me2水平分别为3.32±0.41、0.83±0.17,两组相比P<0.01。Dox组、转染组、联合组、对照组细胞迁移率分别为21.75%±1.816%、79.13%±2.561%、40.13%±2.039%、68.91%±3.167%,Dox组、转染组、联合组与对照组相比,联合组与Dox组、转染组相比,P均<0.05。结论 LSD1基因沉默人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力降低,NDRG1基因沉默人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力升高;LSD1通过降低NDRG1基因启动子区域H3K4me2水平,抑制NDRG1的表达,从而促进卵巢癌SKOV3细胞转移。

血清NDRG3与甲状腺功能指标联合检测对甲状腺乳头状癌的诊断价值

目的探讨血清N-myc下游调控基因3(NDRG3)与甲状腺功能指标联合检测诊断甲状腺乳头状癌的效能。方法选取2021年5月至2022年5月在该院收治的甲状腺乳头状癌患者115例作为甲状腺癌组,选取同期在该院进行诊治的甲状腺良性结节患者115例作为良性对照组。检测并比较两组血清及甲状腺乳头状癌组织NDRG3水平,检测两组甲状腺过氧化物酶抗体(TpoAb)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平等甲状腺功能指标,并计算FT4/FT3比值。采用多因素Logistic回归分析甲状腺乳头状癌发生的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清NDRG3与甲状腺功能指标联合检测对甲状腺乳头状癌的诊断效能。结果甲状腺癌组血清TpoAb、TgAb、TSH、FT4/FT3水平均明显高于良性对照组,NDRG3、FT3水平明显低于良性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NDRG3在甲状腺乳头状癌组织中阳性表达率为36.52%(42/115),明显低于甲状腺良性结节中的阳性表达率[73.91%(85/115)],差异有统计学意义(χ2=32.511,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清TSH≥2.58 mIU/L、FT4/FT3≥3.32为甲状腺乳头状癌发生的独立危险因素(P<0.05),血清NDRG3≥432.89 pg/mg、FT3≥4.47 pmol/L为甲状腺乳头状癌发生的独立保护因素(P<0.05)。血清NDRG3、TSH、FT3、FT4/FT3单独及联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.838、0.766、0.692、0.713、0.906,4项指标联合检测诊断甲状腺乳头状癌的AUC明显大于单项指标检测。存在甲状腺外延伸、淋巴结转移及TNM分期Ⅲ~Ⅳ期的甲状腺乳头状癌患者NDRG3水平明显低于不存在甲状腺外延伸、淋巴结转移及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的状腺乳头状癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲状腺乳头状癌患者血清NDRG3与甲状腺功能指标呈现异常表达,各项指标可能参与了肿瘤的起源或进展,联合检测血清NDRG3与甲状腺功能指标水平可以作为诊断甲状腺乳头状癌的可靠手段。

N-myc下游调节基因2在膀胱癌细胞凋亡中对信号转导和转录激活因子3信号通路的影响

目的探讨N－myc下游调节基因2（N－myc downstream regulated gene 2，NDRG2）在膀胱癌细胞凋亡中对信号转导和转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）信号通路的影响。 方法2014年12月至2015年8月采用蛋白质印迹法检测人膀胱癌细胞BIU－87和膀胱上皮永生化细胞SV－HUC－1中NDRG2的表达水平。分别用空载体（pcDNA3.1）、过表达NDRG2的载体（pcDNA3.1/ NDRG2）、NDRG2小干扰RNA（siRNA－ NDRG2）和对照siRNA转染NDRG2细胞，并分别命名为pcDNA3.1组、pcDNA3.1/NDRG2组、siRNA－NDRG2组和siRNA对照组。培养48h后，蛋白质印迹法检测NDRG2、Cleaved caspase 3、STAT3、p－STAT3、JAK2、p－JAK2表达水平，MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡情况。BIU－87与45 μmol/L的STAT3信号通路抑制剂AG490作用48h后，MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡情况，蛋白质印迹法检测Cleaved caspase 3、STAT3、p－STAT3、JAK2、p－JAK2表达水平。 结果NDRG2在膀胱癌细胞中的表达水平（0.016±0.001）低于膀胱上皮永生化细胞（0.096±0.003）。pcDNA3.1/NDRG2组细胞存活率（40.32±0.06）%显著低于pcDNA3.1组（100.00±0.02）%，差异有统计学意义（P〈0.01）。siRNA－NDRG2组细胞存活率（135.74±0.04）%高于siRNA对照组（100.01±0.05）%。pcDNA3.1/NDRG2组细胞凋亡率（28.64±0.05）%高于pcDNA3.1组（11.21±0.03）%，差异有统计学意义（P〈0.01）。siRNA－NDRG2组细胞凋亡率（6.31±0.05）%低于siRNA对照组（10.32±0.07）%，差异有统计学意义（P〈0.01）。pcDNA3.1/NDRG2组细胞中p－STAT3（0.11±0.04）、p－JAK2（0.13±0.03）的表达水平低于pcDNA3.1组（0.29±0.06、0.32±0.03），差异有统计学意义（P〈0.01）。AG490作用后BIU－87的细胞存活率和凋亡率与转染pcDNA3.1/NDRG2后的趋势一致。 结论NDRG2能够促进膀胱癌细胞凋亡，作用机制与STAT3信号通路有关。

EDS诱导小鼠睾丸间质细胞TM3凋亡中NDRG2的表达及意义

目的探讨N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)是否参与睾丸间质细胞的凋亡。方法选用小鼠睾丸间质细胞系TM3作为实验对象,建立体外的1,2-二甲磺酸乙烷(EDS)诱导睾丸间质细胞凋亡模型。用含有500、750μg/mL EDS的培养基刺激TM3细胞,以Western blot、Real-time PCR、流式细胞术等方法检测TM3细胞凋亡及NDRG2的表达变化。结果随EDS浓度增高,诱导小鼠睾丸间质细胞发生凋亡的比率升高,并且在EDS诱导的小鼠睾丸间质细胞中,NDRG2的表达较对照组呈现剂量依赖性增高。结论 NDRG2可能参与到睾丸间质细胞的凋亡。

微小RNA188-3p靶向调节N-myc下游调节基因1抑制肝癌细胞的增殖

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-188-3p在肝癌发生发展中的作用及其机制。方法收集2018年2月至2019年10月武汉市中心医院肝胆胰外科经手术切除并病理证实的21例原发性肝癌组织标本及对应的13例癌旁组织标本,细胞培养肝癌细胞,用生物信息学预测miR-188-3p和N-myc下游调节基因1(NDRG1)的靶向匹配关系,并用双荧光素酶报告基因系统鉴定。Lipo3000转染miR-188-3p摸拟物后,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time qPCR)检测miR-188-3p和NDRG1 mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测NDRG1蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖。组间比较采用t检验。结果miR-188-3p和NDRG1匹配良好,miR-188-3p能够结合NDRG1 mRNA 3’端非编码区(3’UTR),并有效抑制其mRNA及蛋白表达水平(0.56±0.04比1.12±0.13,t=10.777,P<0.01;0.43±0.07比0.88±0.15,t=9.123,P<0.05)。miR-188-3p能够负向调控NDRG1表达和肝癌细胞增殖(0.76±0.07比1.26±0.19,t=7.509,P<0.05)。结论miR-188-3p可以通过下调靶向癌基因NDRG1的表达来抑制肝癌细胞的增殖。

NDRG1通过ERK通路增强肝细胞癌对索拉菲尼的耐药

目的 探究N-myc下游调控基因1(NDRG1)对肝细胞癌(HCC)的作用,以及NDRG1是否影响HCC对索拉菲尼(Sorafenib)的敏感性。方法 通过TCGA数据库预测NDRG1在HCC中的表达水平,并通过蛋白质印迹(WB)实验和免疫组织化学(IHC)染色进行验证。构建NDRG1敲除细胞系进行体外实验,通过肿瘤功能学实验细胞计数试剂盒8(CCK-8)、EdU染色、细胞划痕、Transwell实验研究NDRG1及联合Sorafenib对HCC细胞增殖、迁移与侵袭以及凋亡的影响。利用裸鼠皮下荷瘤进行体内实验,研究NDRG1和Sorafenib对HCC成瘤的影响;通过WB实验和IHC染色确定NDRG1调节HCC对Sorafenib敏感性的通路。结果 WB实验和IHC染色显示,NDRG1在HCC中高表达,与TCGA数据结果一致。肿瘤功能学实验结果表明NDRG1敲除或Sorafenib刺激使HCC细胞增殖、迁移及侵袭能力减弱,肿瘤细胞凋亡增加,而NDRG1敲除联合Sorafenib使HCC细胞增殖、迁移与侵袭能力进一步减弱,肿瘤细胞凋亡进一步增加(P<0.000 1)。小鼠皮下荷瘤模型结果表明NDRG1敲除或Sorafenib刺激使荷瘤体积及质量减小,而NDRG1敲除联合Sorafenib使荷瘤体积及质量进一步减小(P<0.000 1)。WB和IHC结果表明NDRG1敲除联合Sorafenib可降低Erk1/2的磷酸化水平。结论 NDRG1在HCC中高表达,高表达NDRG1促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制肿瘤细胞凋亡。NDRG1通过ERK信号通路增强HCC对Sorafenib的耐药。

N-myc下游调控基因2在恶性肿瘤中作用机制研究进展

N-myc下游调控基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)是NDRG家族成员,与细胞增殖、分化、凋亡、应激反应和细胞迁移、侵袭等密切相关。NDRG2最早在神经系统中被发现,在脑和骨骼肌中高表达,但在乳腺癌、结直肠癌、胶质瘤、口腔鳞状细胞癌、黑色素瘤和淋巴瘤组织中低表达或无表达。NDRG2作为一种新的抑癌候选基因,在多种恶性肿瘤中以不同机制发挥抑制肿瘤生长的作用。本文就NDRG2在恶性肿瘤中作用机制的研究进展作一综述。

核受体NR6A1与NDRG1互作促进肝癌进展

核受体在细胞稳态的维持以及疾病的发生发展等方面发挥着重要的作用。为了探究核受体亚家族6A组成员1(nuclear receptor subfamily 6 group A member 1,NR6A1)在肝癌中的作用及机制,首先,分析了癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)等数据库信息,发现NR6A1在肝癌中异常高表达且与患者预后不良有关;然后,通过CCK-8(Cell Counting Kit-8)、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine,EdU)、划痕实验发现,干扰NR6A1使肝癌细胞的增殖明显受到抑制但不影响细胞的迁移;其次,通过免疫共沉淀、免疫荧光、RNA干扰和过表达等实验,鉴定出N-myc下游调控基因1(N-myc downstream-regulated gene 1,NDRG1)是NR6A1在肝癌中的互作蛋白质,二者在肝癌中的表达呈正相关,且NR6A1正调控NDRG1的表达;最后,利用功能拯救实验证实,干扰NDRG1可以抑制NR6A1过表达造成的肝癌细胞增殖增强的现象。综上可知,NR6A1通过与NDRG1相互结合且上调NDRG1的表达来发挥促癌作用。

As2O3和全反式维甲酸对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的 探讨As2O3和全反式维甲酸（ATRA）对人宫颈癌HeLa细胞体外生长的影响及其机制.方法 采用不同浓度As2O3和ATRA分别作用于人宫颈癌HeLa细胞,观察细胞形态 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长情况 半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot法检测细胞中N-myc下游调节基因1（NDRG1）mRNA和蛋白的表达.结果 As2O3和ATRA能够抑制宫颈癌HeLa细胞生长,12.5 μmol/L As2O3处理HeLa细胞48 h的抑制率为（36.5±1.2）%,明显高于同时间低浓度组 1 × 10-5mol/LATRA处理HeLa细胞48 h的抑制率为（23.5±3.1）%,明显高于同时间低浓度组,并且同浓度的药物处理72 h的抑制率高于处理48 h的抑制率,呈浓度和时间依赖性（P〈0.05）.As2O3和ATRA能够从分子水平和蛋白水平上调宫颈癌HeLa细胞中NDRG1基因的表达,12.5 μmol/L As2O3和5×10-6mol/L ATRA处理HeLa细胞后,NDRG1 mRNA表达量分别为0.942±0.169和0.894±0.138,明显高于低浓度组的表达量 12.5 μmol/LAs2O3和5×10-6 mol/LATRA处理HeLa细胞后,NDRG1蛋白表达量分别为1.220±0.202和1.233±0.103,明显高于低浓度组的蛋白表达量.结论 As2O3能够抑制宫颈癌HeLa细胞生长,其抑制作用与NDRG1基因的表达上调相关.