碘化正丁基氟哌啶醇对兔心肌缺血再灌注损伤血流动力学和心肌组织中酶的影响

目的 评价碘化正丁基氟哌啶醇 (N n butylhaloperi doliodide ,F2 )对心肌缺血再灌注损伤的保护作用 ,并探讨其作用机制。方法 结扎兔冠状动脉左室支 ,制成急性心肌缺血再灌注损伤模型 ,缺血前 5min ,静脉推注F2 ,观察在急性缺血和再灌注状态下血流动力学的变化及再灌注后心肌组织中超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)、肌酸激酶(CK)、ATP酶的变化。结果 F2能剂量依赖地改善兔心肌缺血再灌注后的血流动力学变化 ,MAP、LVSP、±dp/dtmax均较缺血再灌注对照组升高 ,LVEDP有所降低 ;还能剂量依赖性地降低MDA的产生 ,保护心肌组织SOD的活性和Ca2 + ATPase、Na+ ,K+ ATPase的活性 ,保护心肌酶CK的释放。结论 F2对心肌缺血再灌注损伤有保护作用。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤血流动力学的影响

目的 观察碘化N 正丁基氟哌啶醇 (N n butylhaloperidoliodide,F2 )对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 结扎大鼠冠状动脉左前降支 ,制成急性心肌缺血再灌注损伤模型 ,缺血前 5min ,舌下静脉推注F2 ,观察在急性缺血和再灌注状态下血流动力学的变化。实验结束时测量心肌梗死面积。结果 F2 能剂量依赖地改善大鼠心肌缺血再灌注后的血流动力学变化 ,SP、DP、AP、LVSP、LVDP、LVAP、±dp/dtmax均较缺血再灌注对照组及溶剂组升高 ,HR、LVEDP有所降低 ;同时可减少心肌梗死面积。结论 F2

碘化N-正丁基氟哌啶醇在大鼠的药代动力学及组织分布

目的 研究碘化N 正丁基氟哌啶醇 (F2 )在大鼠体内的药代动力学和组织分布特征。方法 大鼠尾静脉给予F2后 ,采用高效液相 -质谱联用技术检测各时间点血浆和组织器官药物浓度 ,并用 3 p97软件计算药代动力学参数。 结果 静脉给药后药时曲线符合二室开放模型。 1、2、4mg·kg- 13个剂量主要药动学参数为 :分布半衰期T1/2α分别为 0 3 2、0 2 1、0 3 2h ,消除半衰期T1/2 β分别为 5 75、5 68、5 98h ,曲线下面积AUC分别为 71 9、83 6、166 7μg·L- 1·h- 1,血浆清除率CL分别为 13 9、2 3 9、2 4 0L·h- 1。结论 F2 是一种分布迅速 ,Vc较大 ,T1/2 β较长 ,消除相浓度较低的药物。符合一级动力学特征。除脑、睾丸中分布较少外 。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对Egr-1转录及表达的影响

目的 :应用大鼠心肌缺血再灌注模型观察碘化N 正丁基氟哌啶醇 (N n butylhaloperidoliodide ,F2 )对早期生长反应蛋白 1(earlygrowthresponse 1,Egr 1)转录及表达水平的影响 ,及其对心肌炎症及心功能的改善作用。方法 :结扎大鼠冠状动脉左前降支 ,制成急性心肌缺血再灌注损伤模型 ,缺血前5min ,舌下静脉推注F2 ,监测血流动力学的变化 ,病理组织切片观察缺血心肌组织炎性反应变化。应用RT PCR方法及Western blot方法分别检测缺血组织Egr 1mRNA及蛋白水平变化。结果 :与对照组相比 ,F2 治疗组心肌组织内炎性反应及Egr 1的转录与表达均降低 ,心肌功能也得到明显改善。结论 :F2具有明显抑制缺血再灌注大鼠心肌组织内Egr 1mRNA及蛋白表达、减轻炎性损伤的作用 ,这可能是F2 对心肌缺血再灌注损伤显著保护作用的机制之一。

钙拮抗剂通过PKCα/ERK1/2通路拮抗心肌细胞缺氧复氧损伤

目的:观察新型钙拮抗剂碘化N-正丁基氟哌啶醇(N-n-butyl haloperidol iodide,F2)及经典钙拮抗剂维拉帕米对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)时心肌细胞PKCα/ERK1/2信号通路及损伤的作用。方法:建立新生大鼠心肌细胞H/R模型,于缺氧液和复氧液中加入F2(1×10-6mol/L)及维拉帕米(2×10-6mol/L)。采用Western Blot方法检测心肌细胞磷酸化PKCα(pPKCα)、总PKCα、磷酸化ERK(p-ERK1/2)和总ERK1/2蛋白表达的变化;双抗体夹心光化学测定法检测培养细胞上清液中肌钙蛋白(cardiac troponin I,c Tn I)的含量,Hoechst 33342染色法检测心肌细胞早中期凋亡情况,Cell Counting Kit-8比色法检测心肌细胞存活率。结果:H/R激活培养心肌细胞PKCα和ERK1/2,使细胞c Tn I浓度升高,早中期凋亡增加,存活率下降;PKCα抑制剂可下调H/R所致的PKCα和ERK1/2活化程度;ERK1/2抑制剂可抑制H/R所致心肌细胞c Tn I漏出,减少细胞凋亡,提高细胞存活率;F2及维拉帕米能够下调H/R所致PKCα和ERK1/2的活化程度,抑制细胞c Tn I漏出,减少细胞凋亡,提高细胞存活率;PKCα激动剂和ERK激动剂可拮抗F2对H/R心肌细胞PKCα和ERK1/2激活的抑制作用及对心肌细胞损伤的保护作用。结论:H/R可引起心肌细胞PKCα/ERK1/2通路激活,F2和维拉帕米均可通过调节PKCα/ERK1/2信号通路拮抗心肌细胞H/R损伤。

碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制机械损伤诱导的血管平滑肌细胞增殖的作用及机制

目的探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对机械损伤所致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用及其机制。方法原代培养大鼠胸主动脉VSMCs,体外建立机械划伤致VSMCs增殖模型,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况;流式细胞术法测定细胞周期;Western blot法检测p-MEK,p-ERK,Egr-1蛋白表达;Real Time RT-PCR检测MEK和Egr-1 mRNA表达。结果 F2剂量依赖地抑制机械损伤所致VSMCs增殖,降低损伤刺激下VSMCs的生存率和DNA合成,使G0/G1期细胞比例升高,G2/M期细胞百分比下降,并且抑制损伤后VSMCs中MEK/ERK的活化,使p-MEK/ERK蛋白表达降低,同时下调损伤后MEK和Egr-1的高表达。结论 F2对机械损伤所致血管平滑肌细胞增殖有明显抑制作用,其机制可能与影响MEK/ERK/Egr-1信号途径有关。

高效液相色谱法测定碘化N-正丁基氟哌啶醇含量

目的:用高效液相色谱法测定碘化N-正丁基氟哌啶醇 (F 2 )的含量.方法:采用Phenomenex Luna C 18 反相色谱柱( 4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-甲醇-0.025 mol·L -1 磷酸二氢钾(45∶5∶50)作为流动相,流速为 0.8 mL·min -1 ,检测波长:248 nm,柱温:35 ℃,进样体积:20 μL,按外标法以峰面积计算F 2 的含量.结果:F 2 在1～10 mg·L -1 浓度范围内,浓度与峰面积的线性关系良好,r为 0.999 2 ,RSD为 1.70% (n=5).结论:本方法简便,快速,结果准确,可靠,重现性好,可用于本品质量控制.

碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠胸主动脉平滑肌钾通道作用的研究

目的 研究碘化N 正丁基氟哌啶醇 (F2 )对大鼠胸主动脉平滑肌细胞膜钾通道的作用。方法 ①采用全细胞膜片钳技术 ,测定不同浓度F2 作用时单个酶消化分离平滑肌细胞的钾电流 ;②采用大鼠胸主动脉环生物鉴定法 ,测定F2对KCl诱导动脉环收缩的作用以及格列苯脲对F2 扩血管作用的影响。结果 当钳制电压为 - 4 0mV ,去极化电位从 -3 0mV到 + 10 0mV ,步阶脉冲为 10mV ,刺激脉宽为 4 0 0ms的方波钳制方案进行刺激时 ,可记录到外向电流 ,此电流具有电压依赖性。在去极化电位为 + 70mV时 ,3种浓度( 0 1、1和 5 μmol·L-1)F2 使外向电流分别从给药前 ( 2 2 9±2 8)pA、( 2 2 6± 5 7) pA和 ( 2 2 8± 4 2 ) pA升到给药后 ( 3 5 4± 2 9)2 0 0 0 12 2 1收稿 ,2 0 0 1 0 6 10再修回 国家新药研究基金 (No 96 90 1 0 5 2 31)和国家自然科学基金 (No30 0 70 30 4)资助1 汕头大学医学院药理学教研室 ,汕头 5 15 0 31作者简介 :韦日生 ,男 ,31岁 ,硕士研究生。Tel:0 10 62 0 9114 5 ,E mail:rswei@yahoo .com ;石刚刚 ,男 ,44岁 ,教授 ,硕士生导师pA (n =6,P <0 0 1) ,( 5 0 3± 86) pA (n =5 ,P <0 0 1)和( 986± 4 5 )pA (n =5 ,P <0 0 1)。 10 μmol·L-1格列苯脲对F2 增加的外向电流没有影响 ,10mmol·

碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠心脏缺血和再灌注室性心律失常的拮抗作用

目的:研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对心肌缺血和再灌注引发的室性心律失常的拮抗作用。方法:采用大鼠Langendorff灌流心脏模型,通过结扎左冠脉前降支缺血20min,解除结扎再灌注,引出室性心律失常。缺血前5min用含不同浓度F2的台氏液灌流,观察其对缺血和再灌注期室性心律失常发生率的影响,同时观察F2对心电图上PR、QT、RR间期的影响。用心房起搏(5Hz)防止心率变慢,观察1μmol/LF2对缺血和再灌注室性心律失常、PR间期的影响。结果:F2可浓度依赖地降低缺血和再灌注期室性心律失常发生率,并减慢心率,延长PR间期。在心房起搏控制心律下,仍具有拮抗缺血和再灌注室性心律失常、延长PR间期的作用。结论:F2对大鼠心脏缺血和再灌注性心律失常具有直接的抑制作用。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对离体大鼠心脏传导系统的影响

目的研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对离体大鼠心脏传导系统的作用。方法Langendorff灌流离体大鼠心脏,记录希氏束电图和心外膜心电图,并采用外刺激技术观察F2对大鼠心脏传导系统各间期及不应期的影响。结果F2主要作用于A-H间期,延长房室传导时间,延长房室结有效不应期,并呈量效关系;而对S-A间期和H-V间期影响相对较小。但在较大剂量时也可延长S-A间期和H-V间期,使心房有效不应期和心室有效不应期延长。结论F2主要作用于房室结,减慢房室结传导,延长房室结有效不应期,这可能是F2通过终止房室结折返而发挥抗心律失常作用的主要机制。

HPLC-MS法研究碘化N-正丁基氟哌啶醇在兔体内的药代动力学

目的 :研究碘化N 正丁基氟哌啶醇 (F2 )在兔体内的药代动力学过程。方法 :6只新西兰兔耳缘静脉注射碘化N 正丁基氟哌啶醇 (F2 ) 2 .0mg·kg-1后采集血样 ,用高效液相色谱 质谱 (HPLC MS)联用技术测定血浆药物浓度 ,并用 3p97软件拟合计算药代动力学参数。结果和结论 :兔耳缘静脉给药后的血药浓度 时间曲线符合二室开放模型 ,其主要药动学参数为 :分布半衰期T1 2α 是 0 .10h ,消除半衰期Τ1 2 β 是 6 .4h ,曲线下面积AUC为 183μg·h-1·L-1,中央室分布容积VC 为 4L ,清除率Cl为12 .9L·h-1。HPLC MS联用方法测定F2 血药浓度 ,灵敏度高 ,专属性强。

碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制兔颈总动脉球囊损伤后血管内膜和平滑肌细胞增殖的作用研究

目的:探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对兔颈总动脉球囊损伤后内膜及平滑肌细胞增殖的影响。方法:30只新西兰兔随机分为假手术组、模型组、F2高剂量给药组(2mg/kg)、F2中剂量给药组(1mg/kg)、F2低剂量给药组(0.5mg/kg)。模型组及F2各给药组行左侧颈总动脉球囊损伤,各组分别于术后7d取颈总动脉段,常规病理切片,HE染色,免疫组化法测定α-actin、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:与假手术组比较,模型组术后7d血管内膜厚度、内膜面积、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积/中膜面积、血管壁细胞PCNA表达显著增加(P<0.01),F2剂量依赖地降低上述指标。与假手术组比较,模型组血管壁α-actin阳性染色减少,F2各给药组可增加血管壁平滑肌细胞中α-actin阳性染色率。结论:F2能抑制兔颈总动脉机械损伤后血管内膜和平滑肌细胞的增殖。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对豚鼠心房肌细胞乙酰胆碱敏感性钾通道的影响

目的研究碘化N正丁基氟哌啶醇(F2)对豚鼠心房肌细胞乙酰胆碱敏感性钾通道(KACh)的影响,探讨其对KACh的作用机制。方法采用膜片钳全细胞记录方法,测定F2对原代培养的豚鼠心房肌细胞乙酰胆碱敏感性钾电流IK(ACh)的影响。结果细胞外给予F2对豚鼠心房肌细胞IK(ACh)呈可逆性、浓度依赖性的阻断作用。细胞内添入抗水解的GTP类似物GTPγS后,结果同前。细胞内给予50μmol·L-1F2对IK(ACh)无作用。结论F2是豚鼠心房肌细胞KACh的一种快速通道阻断剂,发挥作用部位在细胞膜外侧,作用位点在钾通道本身,与乙酰胆碱受体无关。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的抑制作用

目的探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对血管紧张素Ⅱ(AngII)诱导心肌细胞肥大的抑制作用及其机制。方法培养大鼠心肌细胞株(H9C2细胞),测量细胞表面积和BCA法测定细胞蛋白含量作为心肌肥大指标;Western blot检测核转录因子ERK1/2及CREB蛋白表达。结果 (1)AngII(10-7mol.L-1)处理细胞48 h,心肌细胞表面积增大,蛋白含量明显增加,F2(10-8、10-7、10-6mol.L-1)剂量依赖抑制AngII介导心肌细胞表面积的增大以及蛋白含量的增加;(2)AngII(10-7mol.L-1)处理心肌细胞1 min,磷酸化ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)和磷酸化CREB蛋白(p-CREB)表达即开始增加,5～10 min达最高峰,可持续活化60 min,ERK1/2和CREB蛋白总量没有变化。以AngII处理心肌细胞5 min,p-ERK1/2和p-CREB表达为标准,预先以F2(10-8、10-7、10-6mol.L-1)处理心肌细胞30 min,F2剂量依赖抑制AngII介导心肌细胞p-ERK1/2和p-CREB表达的增高。结论 F2可以抑制AngII诱导的心肌肥大,其机制可能与抑制磷酸化ERK1/2和CREB表达有关。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤及Egr-1表达的影响

目的:观察碘化N_正丁基氟哌啶醇(F2)对大鼠心肌组织缺血再灌注(I/R)损伤病理改变及早期生长反应蛋白_1(Egr_1)表达变化的影响。方法:制作大鼠I/R损伤模型。常规病理染色技术观察心肌组织形态学变化。免疫组织化学法测定缺血心肌组织Egr_1阳性表达的细胞数。结果:I/R造成大鼠心肌组织病理损伤,尤以炎症反应为重;I/R诱导心肌组织Egr_1表达上调。缺血前给予F2则能减轻I/R所致心肌组织内的各种病理反应,抑制心肌组织内Egr_1的过表达。结论:F2对大鼠I/R心肌组织损伤具有保护作用,这可能与其抑制Egr_1过表达有关。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对抗氯化钡引起心律失常的作用

目的研究碘化N-正丁基氟哌啶醇对抗BaCl2引起心律失常的作用。方法采用氯化钡诱导的心律失常动物模型,观察碘化N-正丁基氟哌啶醇对抗BaCl2引起心律失常的作用。结果碘化N-正丁基氟哌啶醇(0.5、1、2、4mg/kg)可剂量依赖的减少氯化钡诱发心律失常的发生率,缩短心律失常的持续时间。结论碘化N-正丁基氟哌啶醇具有明显的对抗BaCl2引起心律失常的作用。

碘化N-正丁基氟哌啶醇减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤作用的机制研究

目的:探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的分子生物学机制。方法:用大鼠在体心肌缺血再灌注模型,通过测定血清中肌酸激酶、乳酸脱氢酶的活性观察心脏损伤的情况;通过测定心肌组织中髓过氧化物酶、超氧化物歧化酶、丙二醛的变化,观察中性粒细胞浸润、氧自由基及脂质过氧化的情况。Western blot法测定心肌缺血组织中早期生长反应基因-1(Egr-1)蛋白水平的变化。结果:与对照组比,反义核苷酸组及反义核苷酸+F2组Egr-1蛋白表达明显减少(P<0.05),炎症反应及心肌损伤程度明显减弱(P<0.05);反义核苷酸+F2组与反义核苷酸组比,Egr-1蛋白表达无统计学意义(P>0.05),心肌损伤及炎症反应程度明显减轻(P<0.05)。结论:F2可通过抑制Egr-1蛋白表达,起到减轻心肌缺血再灌注损伤的作用,除抑制Egr-1蛋白的高表达外,F2还可通过其他机制起到抗心肌缺血再灌注的作用。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对心肌细胞缺氧复氧损伤保护作用机制的研究

目的：探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇（F2）对缺氧复氧心肌细胞损伤及早期生长反应基因-1（Egr-1）蛋白表达的影响。方法：用1—3d的SD大鼠进行心肌细胞原代培养。取生长5-6d的心肌细胞分为对照组、缺氧复氧组、聚乙二醇＋脂质体组、反义寡核苷酸组、反义寡核苷酸＋F2组。除对照组外其他组均做缺氧复氧模型。通过测定肌酸激酶、乳酸脱氢酶、肌钙蛋白、超氧化物歧化酶、丙二醛及肿瘤坏死因子-α的变化，观察心肌细胞损伤及炎症反应情况：Westernblot法检测培养心肌细胞中Egr-1蛋白的表达水平。结果：与对照组比，反义寡核苷酸组及反义寡核苷酸＋F2组Egr-1蛋白表达明显减少（P（0．05），细胞损伤及炎症反应程度明显减弱（P〈0．01）；反义寡核苷酸组与反义寡核苷酸＋F2组比，Egr-1蛋白表达虽无统计学意义（P〉0．05），但细胞损伤及炎症反应改善情况却有统计学意义（P〈0．05）。结论：F2可通过抑制Egr-1蛋白表达来减轻缺氧复氧心肌细胞的损伤，它还可通过其他机制起到保护缺氧复氧心肌细胞损伤的作用。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对缺氧血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制的研究

目的：研究碘化N-正丁基氟哌啶醇（F2）对缺氧大鼠胸主动脉平滑肌细胞（SMCs）增殖的影响，并探讨其作用机制是否与早期生长反应基因-1（egr-1）有关。方法：取第3-4代培养的大鼠胸主动脉SMCs制作缺氧模型，应用噻唑蓝比色法检测细胞增殖情况，流式细胞术测定细胞周期，蛋白印迹杂交方法检测Egr-1及血小板源生长因子（PDGF-A）蛋白表达情况。结果：与缺氧组比，反义寡核苷酸组及F2组比色吸光度A值、细胞周期S＋G2／M期比例均下降（P〈0．01），Egr-1及PDGF-A蛋白表达均减少。结论：F2可通过抑制Egr-1蛋白表达来抑制缺氧SMCs的过度增殖。

碘化N-正丁基氟哌啶醇通过抑制线粒体凋亡通路抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤中线粒体凋亡通路的影响,并探讨其分子作用机制。方法建立H9c2心肌细胞H/R损伤模型,将H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、F_2低、中、高剂量组。流式细胞术分析测定细胞凋亡率;采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞色素C(Cyto C)、Bcl-2、和Bax蛋白表达变化;比色法测定caspase-3的活性。结果与H/R组相比,F_2低、中、高剂量组可明显降低H9c2细胞缺氧/复氧损伤后细胞凋亡率;提高Bcl-2/Bax比值;抑制线粒体中Cyto C的释放;减少caspase-3的活性。结论 F_2能够降低H/R后H9c2心肌细胞凋亡率,其机制可能与抑制线粒体通路的细胞凋亡有关。