神经介素B及受体NMBR和PD-L1在H9N2亚型流感病毒感染过程中的相互作用研究

神经介素B(NMB)及其G蛋白偶联受体(NMBR)发挥的抗甲型流感病毒免疫反应,以及甲型流感病毒感染诱导细胞程序性死亡配体1(PD-L1)高表达均与NF-κB信号通路有直接关系,而NF-κB信号通路的激活受ERK信号通路的调控。为深入探究NMB与NMBR调节H9N2亚型流感病毒感染诱导PD-L1上的作用,本研究以H9N2亚型流感病毒为模式毒株,基于NMBR干扰和过表达细胞系、PD-L1干扰和过表达细胞系以及C57BL/6小鼠,采用RT-PCR和Western blot方法分析NMB与NMBR对PD-L1表达变化以及ERK磷酸化的影响。结果显示:H9N2亚型流感病毒感染诱导的NMBR和PD-L1表达之间存在着负调控的关系,外源性NMB可以有效激活小鼠体内NMBR的表达,进而抑制PD-L1表达,NMB与NMBR也能影响H9N2感染诱导的ERK磷酸化水平。综上,H9N2亚型流感病毒感染诱导表达的NMB与NMBR通过ERK信号通路调节PD-L1的表达而发挥抗流感病毒作用,将为深度剖析宿主-甲型流感病毒之间的互作关系提供新的科学依据。

血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1在急性下呼吸道感染患儿中的表达水平及对其病情预测的研究

目的 观察急性下呼吸道感染患儿血清β-防御素-2(hBD-2)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)表达水平,并分析3项指标对其病情检测的意义。方法 纳入2020年10月至2022年10月该院80例急性下呼吸道感染患儿为急性期组,另选取该院同期60例缓解期下呼吸道感染患儿为缓解期组,所有患儿入院时均接受血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1检测,对比急性期组与缓解期组患儿血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平。依据临床肺部感染评分(CPIS)将急性期组患儿分为轻症组和重症组,对比轻症组和重症组临床资料及实验室指标,分析血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平与急性下呼吸道感染患儿病情的相关性,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析3项指标对患儿病情的预测价值。结果 急性期组血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平高于缓解期组,差异有统计学意义(P<0.05);经CPIS评分结果显示,80例急性下呼吸道感染患儿CPIS评分为(5.83±1.92)分,其中重症32例(40.00%),轻症48例(60.00%);经Pearson相关性分析,结果显示,CPIS评分与血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平呈正相关(r=0.337、0.325、0.386,P=0.002、0.003、<0.001);重症组血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平高于轻症组,差异有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归分析发现,血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平是急性下呼吸道感染患儿病情加重的危险因素(OR>1,P<0.05);绘制ROC曲线,血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平对重症急性下呼吸道感染具有一定预测价值,曲线下面积(AUC)分别为0.728、0.769、0.786,联合检测预测价值更高(AUC=0.830)。结论 急性下呼吸道感染患儿血清hBD-2、NT-proBNP、sICAM-1表达水平升高,3项指标水平与患儿病情严重程度密切相关,可用于预测重症急性下呼吸道感染。

H9N2亚型禽流感病毒M1和NA基因在昆虫细胞中的表达

为通过昆虫细胞表达出H9N2亚型禽流感病毒M1和NA蛋白,并鉴定其免疫活性,利用PCR技术扩增H9N2亚型禽流感病毒M1和NA基因,以pFastBacDual为转移载体构建重组转移载体pFastBacDual-M1和pFastBacDual-NA;将阳性重组转移载体分别转化至DH10Bac感受态细胞,得到重组杆粒rBacmid-M1和rBacmid-NA;将重组杆粒分别转染Sf9昆虫细胞,获得含M1和NA基因的重组杆状病毒rBV-M1和rBV-NA;运用IFA和Western-blot鉴定M1和NA蛋白的表达情况,同时以NA蛋白为包被抗原,运用间接ELISA方法鉴定NA蛋白的反应活性。结果显示,IFA鉴定均出现特异性绿色荧光,Western-blot检测M1和NA蛋白大小分别约为28和52 ku,ELISA检测NA蛋白对抗H9N2阳性血清有很高的反应值。结果表明,M1和NA蛋白可在昆虫细胞中特异性表达且具有反应原性。本试验为进一步研发H9N2亚型禽流感诊断技术和疫苗奠定了基础。

IGF_(2)BP_(1)调控lncRNA NEAT1在类风湿关节炎中的作用

目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的全身性自身免疫疾病,可能导致关节变形和功能障碍。本研究旨在探索胰岛素样生长因子-2 mRNA结合蛋白1(insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF_(2)BP_(1))在RA中的表达水平,以及其对长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核丰富转录本1(nuclear paraspeckle assembly transcript 1,NEAT1)稳定性的影响和在RA发病机制中的作用。方法:通过GEO(Gene Expression Omnibus)数据库获取RA数据集,并将其分为正常对照组和RA组,使用R软件分析获取N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)相关的甲基化酶的表达量并进行差异分析。分析差异表达的m^(6)A甲基化酶与lncRNA NEAT1的相关性。通过在线网站ENCORI预测与lncRNA NEAT1结合的蛋白质,并与lncRNA NEAT1表达相关的m^(6)A甲基化酶取交集,从而获取关键基因。通过RNA蛋白质相互作用分析实验(RNA pull-down)验证在RA滑膜细胞中NEAT1与关键基因结合的情况。通过蛋白质印迹法验证关键基因在正常滑膜细胞和RA滑膜细胞中的表达水平。在RA滑膜细胞中转染关键基因的小干扰RNA,通过real-time RT-PCR检测NEAT1在滑膜细胞中的表达水平。结果:差异分析结果显示:与正常对照组相比,共有8个m^(6)A甲基化基因在RA组中存在差异表达,其中IGF_(2)BP_(1)、甲基转移酶样蛋白14(methyltransferase 14,N^(6)-adenosine-methyltransferase subunit,MEEEL14)与lncRNA NEAT1存在相关性;ENCORI预测结果显示:共有23个蛋白质能够与lncRNA NEAT1结合,与NEAT1共表达m^(6)A甲基化酶取交集,获得NEAT1相关m^(6)A甲基化蛋白IGF_(2)BP_(1)。蛋白质印迹法显示:与正常对照组相比,RA组中IGF_(2)BP_(1)蛋白在RA滑膜细胞中表达升高(P<0.05);RNA pull-down结果显示IGF_(2)BP_(1)蛋白与NEAT1结合;real-time RT-PCR的结果表明:敲减IGF_(2)BP_(1)可显著降低NEAT1 mRNA表达水平(P<0.01)。结论:IGF_(2)BP_(1)可能通过稳定lncRNA NEAT1表达参与RA发病,调控IGF_(2)BP_(1)水平可能是一种新的治疗RA的方法。

结直肠癌组织中lncRNA CCAT2和NDRG1的表达及意义

目的探讨结直肠癌(CRC)患者组织中长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录物2(CCAT2)、N-myc下游调节基因(NDRG)1的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法选取2018年2月至2020年2月在南通市中医院行CRC根治性手术治疗的96例CRC患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR检测组织中lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA表达,采用免疫组织化学检测组织中NDRG1蛋白表达,采用Kaplan-Meier曲线分析不同lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA表达组患者的预后差异,采用多因素Cox回归分析CRC预后影响因素。结果与癌旁组织比较,癌组织中lncRNA CCAT2表达较高,NDRG1 mRNA表达及蛋白阳性率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移比较,TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移的CRC患者癌组织中lncRNA CCAT2表达较高,NDRG1 mRNA表达较低(P<0.05)。lncRNA CCAT2高表达组3年累积生存率低于lncRNA CCAT2低表达组,而NDRG1 mRNA高表达组3年累积生存率高于NDRG1 mRNA低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期、淋巴结转移,lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA是CRC预后影响因素(P<0.05)。结论CRC组织中lncRNA CCAT2表达升高,NDRG1表达降低,二者均参与CRC肿瘤的进展,可作为评估CRC患者生存预后的新指标。

基于PINK1-Parkin线粒体自噬通路探讨海昆肾喜含药血清对N2a/APP695细胞的神经保护作用

目的研究海昆肾喜(haikun shenxi,HKSX)含药血清对N2a/APP695细胞的神经保护作用及机制。方法制备HKSX含药血清,高效薄层色谱(high performance thin layer chromatography,HPTLC)对其成分进行分析。应用含药血清干预N2a/APP695细胞,MTT检测HKSX含药血清的细胞毒性;ELISA检测Aβ_(1-42)含量;JC-1法检测线粒体膜电位、DCFH-DA法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)、ATP检测试剂盒检测三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)评价线粒体功能;免疫印迹法(Western blot)检测PTEN诱导的激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)、Parkin、p62、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated-proteinlight chain-3,LC3)及p-Tau S396蛋白的表达;设置线粒体自噬抑制剂Mdivi-1干预组,Western blot检测PINK1、Parkin、p-Tau S396蛋白表达,ELISA检测Aβ_(1-42)含量,验证HKSX的神经保护作用是否与线粒体自噬密切相关。结果与模型对照组(MC)相比,HKSX低、中、高剂量组Aβ_(1-42)含量明显降低,高剂量组尤为明显(P<0.01);线粒体膜电位及ROS含量明显降低(P<0.01)、ATP含量升高(P<0.01);PINK1、Parkin(P<0.01)及LC3Ⅱ(P<0.01)的表达增加,而p62的表达降低(P<0.01),p-Tau S396蛋白亦降低(P<0.01);而Mdivi-1的干预,在很大程度上抑制了HKSX对PINK1、Parkin蛋白的活化(P<0.01)及对p-Tau S396和Aβ_(1-42)的清除(P<0.01),表明HKSX的神经保护作用依赖于PINK1-Parkin信号通路。结论HKSX能够提高线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin蛋白的表达,激活线粒体自噬,提高线粒体功能,抑制Aβ及p-Tau S396蛋白在神经细胞中的沉积,发挥神经保护作用,从而起到防治AD的效果。

高效液相色谱法测定纺织品中的N,N-二甲基乙酰胺以及1-甲基-2-吡咯烷酮

建立了纺织品中N,N-二甲基乙酰胺和1-甲基-2-吡咯烷酮的高效液相色谱测定方法。纺织品中的N,N-二甲基乙酰胺和1-甲基-2-吡咯烷酮经高纯水在超声波辅助条件下提取后,在反相C18柱上用乙腈和磷酸二氢钾洗脱,用二极管阵列检测器检测,检测N,N-二甲基乙酰胺的定量波长为210 nm,检测1-甲基-2-吡咯烷酮的定量波长为200 nm。N,N-二甲基乙酰胺的定量限为0.25 mg/kg,1-甲基-2-吡咯烷酮的定量限为0.50 mg/kg。回收率N,N-二甲基乙酰胺为90.3%~98.1%,1-甲基-2-吡咯烷酮为93.2%~99.8%。N,N-二甲基乙酰胺的相对标准偏差(RSD)为3.18%~8.43%,1-甲基-2-吡咯烷酮的相对标准偏差(RSD)为2.78%~6.56%,符合残留物分析的技术指标要求。

甲型流感病毒H1N1 HA蛋白在果蝇S2细胞中的表达及免疫原性研究

目的在果蝇S2细胞表达甲型流感H1N1HA并分析其免疫原性。方法根据GenBank发表的甲型流感病毒(H1N1)HA基因序列,经过密码子优化,全基因合成编码HA的基因,并于其N端引入特定的空间折叠序列,定向连接至表达载体pMT/Bip/V5-His A,构建重组表达载体pMT-HA。酶切鉴定正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoHygro共转染果蝇S2细胞,潮霉素加压筛选稳定细胞系,在无血清培养基中以硫酸铜溶液诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,经镍柱纯化后免疫小鼠,ELISA检测其诱导的特异性抗体水平。结果获得了稳定表达HA的S2细胞株,目的蛋白以分泌形式表达于上清,并形成三聚体,可以被H1N1HA抗体识别;免疫小鼠后可诱导机体产生抗HA特异性抗体。结论获得了纯化的三聚体形式表达的HA蛋白,并具有较好的免疫原性,具有很好的疫苗应用前景。

禽流感病毒H7N2血凝素HA1基因在大肠杆菌中的表达

目的 表达H7N2亚型禽流感病毒 (AIV)HA1基因 ,用于感染H7亚型禽流感病毒抗体的检测和HA1蛋白功能研究。方法 采用RT PCR方法对H7N2亚型AIVHA1基因进行扩增 ,将PCR产物克隆于pGEM T Easy载体 ,将该基因插入pGEX 4T 2中构建HA1基因原核表达载体 ,转化BL2 1大肠杆菌后 ,在IPTG诱导下表达HA1蛋白 ,Westernblot鉴定表达HA1蛋白。电洗脱方法纯化表达HA1蛋白 ,建立间接ELISA方法 ,对感染AIVH7、H9、H5亚型AIV阳性血清进行检测。结果 成功克隆H7N2亚型AIV的HA1基因 ,其核苷酸序列长度 96 6bp ,编码 32 2个氨基酸残基。构建HA1基因原核表达载体在大肠杆菌内表达出约 6 1× 10 3的HA1融合蛋白。Westernblot和ELISA方法鉴定表明 :表达HA1蛋白与感染H7亚型AIV鸡血清有反应 ,与H5、H9亚型AIV阳性血清没有反应。结论 本研究在大肠杆菌中成功表达了H7N2亚型AIVHA1基因蛋白 ,具有与感染H7亚型AIV阳性血清反应原性 ,不与H5和H9亚型AIV感染阳性血清发生反应。

化学分析法测定Li_δNi_(1-x-y)Co_xMn_yO_2中的镍、钴、锰含量

详细阐述了锂离子电池正极材料LiδNi1-x-yCoxMnyO2中镍、钴、锰含量的测定方法。采用化学分析方法(重量分析法和EDTA络合滴定法)测定样品中镍、钴、锰含量,精确度高,准确度好,回收率在97.00%～99.75%之间,较仪器分析更接近理论值,适用于规模化生产中的质量分析。适当调整分析试剂的用量后可以测试LiδNi1-x-yCoxMnyO2系列组分中镍、钴、锰的含量,是一种普适分析锂离子电池正极材料LiδNi1-x-yCoxMnyO2的方法。

NT-proBNP、Ang1～7、ACE2及其抗体联合检测在慢性心力衰竭中的临床价值

目的探讨N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）、血管紧张素（Ang）1-7、血管紧张素转化酶2（ACE2）及其抗体联合检测在慢性心力衰竭（CHF）中的临床价值。方法 CHF患者135例纳入CHF组,45例健康人纳入对照组,分别进行NT-proBNP、Ang1-7、ACE2及其抗体的检测。结果 CHF患者的NT-proBNP、Ang1-7、ACE2及其抗体水平随着纽约心脏病协会（NYHA）分级增高而增加,且与健康对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;Ang1-7、ACE2及其抗体与NT-proBNP水平均呈正相关（r=0.912、0.899、0.928,P〈0.05）。多元线性回归进一步分析显示Ang1-7、ACE2及其抗体是NT-proBNP的独立影响因素（P〈0.05）。结论 NT-proBNP与Ang1-7、ACE2及其抗体联合检测CHF患者,对CHF的早期诊断、治疗及预后有一定的临床价值。

N_1+N_2结构中的意念焦点

在N1+N2复合名词结构中,N1和N2的线性顺序不可随意调换,这也就意味着两者不可能处在完全相同的认知地位上。传统的中心词概念本质上是语法性的,它仅适合描述英语,但不适合描述汉语。即便引入结构中心和语义中心的概念,仍无法满足对汉语复合名词进行准确描述的要求。人们也尝试用认知语言学的理论来对该结构进行阐释,然而其不可靠的阐释基础或者对语言实际的误读,使得所得出的结论令人怀疑。在以上分析的基础上,结合汉英复合名词的语言实际,本文提出一个意念焦点的概念,用来对英汉语复合名词进行统一的阐释。

三叶因子2和N-myc下游调节基因1在不同子宫内膜组织中的表达

目的 探讨三叶因子2（TFF2）和N-myc下游调节基因1（NDRG1）在不同子宫内膜组织中的表达,为早期诊断子宫内膜癌提供新的生物学指标。方法 收集珠海市人民医院经手术切除并经病理检查确诊为子宫内膜癌组织157例,另选择同期经手术切除并经病理检查确诊的子宫内膜不典型增生组织30例及其他病因手术切除的正常子宫内膜20例,分别检测其TFF2和NDRG1蛋白的表达情况,并分析TFF2和NDRG1蛋白的表达与子宫内膜癌临床病理因素的关系。结果 与正常子宫内膜和子宫内膜不典型增生组织比较,TFF2在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著降低（P〈0.05）,但NDRG1在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。TFF2在Ⅰ、Ⅱ期子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著高于Ⅲ~Ⅳ期（P〈0.05）;高、中分化子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著高于低分化组织及其他类型（P〈0.01）。与深肌层浸润的子宫内膜癌比较,浅肌层浸润的子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著升高（P〈0.05）;与有淋巴结转移的子宫内膜癌比较,无淋巴结转移的子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。而高、中度分化的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著低于低分化及其他类型（P〈0.05）。浅肌层浸润的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著低于深肌层浸润（P〈0.01）,与无淋巴结转移的子宫内膜癌比较,有淋巴结转移的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。结论 在子宫内膜组织中,TFF2表达的缺失及NDRG1蛋白的高表达可能与子宫内膜癌的发生发展有重要关系,有望在子宫内膜癌的早期诊断、判断是否存在侵袭转移等临床评估中发挥作用。

N,N'-二茂铁甲基-(1S,2S)-1,2-二苯基乙二胺的合成及其在烯烃的不对称双羟基化反应中的应用

(1S,2S)-1,2-二苯基乙二胺和甲酰基二茂铁经缩合和还原两步反应,以90%的产率合成了N,N'-二茂铁甲基-(1S,2S)-1,2-二苯基乙二胺,并以其为配体催化烯烃的不对称双羟基化反应,获得了较高的对映选择性(71%～86%ee).

材料参数在Cr15Mn9Cu2Ni1N奥氏体不锈钢高温拉伸失稳中的作用

材料在塑性状态下拉伸变形,存在载荷失稳和几何失稳两种失稳形式。对于既有应变强化又有应变速率强化的材料,载荷失稳与几何失稳并不同时发生,且失稳应变主要受材料性能参数的控制。高温拉伸变形的Cr15Mn9Cu2Ni1N奥氏体不锈钢,表现出明显的应变速率敏感性,使得载荷失稳与几何失稳不同时发生,几何失稳前的均匀变形量明显增大;随变形温度升高,应变速率敏感性系数增大,几何失稳应变也随之增大。

“1+N”模式在出院2型糖尿病合并胰腺癌患者中的应用价值及对血流动力学指标的影响

目的探讨1+N""模式在出院2型糖尿病合并胰腺癌患者中的应用价值及对血流动力学指标的影响。方法以120例糖尿病合并胰腺癌患者为对象,随机分为试验组与常规组,各60例。观察患者并发症、治疗依从性及血流动力学指标水平。结果干预后试验组患者空腹血糖、餐后2 h血糖、全血高切、低切黏度、血浆黏度均低于常规组(P<0.05)。试验组并发症发生率为6.67%(4/60),低于常规组[21.67%(13/60);χ~2=5.551,P=0.018]。实验组患者治疗依从性为95.00%(57/60),高于常规组[71.67%(43/60);χ~2=11.760,P=0.001]。结论糖尿病合并胰腺癌患者采用"1+N"模式进行护理干预,有助于控制患者病情,减少并发症,提高患者的依从性。

“三全育人”视域下高职院校“1+2+N”导师制的实践与探索

作为“三全育人”的一项重要举措,高职院校“1+2+N”导师制的构建,不仅对“三全育人”提供了坚实的机制体制保障,而且丰富了教育的内容,创新了教育的形式。在高职院校的具体实践中,“1+2+N”导师制的改革应健全导师立体教育体系、优化高职院校教师队伍、完善导师育人阶段建设,确保“三全育人”取得实效,促进高职院校高素质技术技能型人才的培养。

Goldbach猜想在N3[1^2，2^2，3^2，……]中的推广

文[1]已将Goldbach猜想推广到N2[12,22,32,……]中去,本文除了仿[1]将此猜想推广到N3[12,22,32,……],此外,还引进与Goldbach猜想对偶的另一猜想,借以研究N3[12,22,32,…]中之偶数表示为不同奇数的线性组合问题,得到可以补救[1]中所用方法之缺陷的新的结果,并由此提出另外的有意义的猜想.

“N1+V1得+N2+V2”句式的构式分析——兼谈构式语法在汉语研究中的运用

本文从构式义的角度分析了N1+V1得+N2+V2句式的两种类型:结果句和致使句,并认为构式义在给句子分类时起到一种导向作用。构式义和句中动词义相互作用,构式义与动词义一致时,生成合格的句子,当构式义与动词义不一致时,构式义通过压制使动词意义发生变化,从而使动词进入句式。同时分析了能进入N1+V1得+N2+V2句式中的动词类型,解释了此类动词进入句式的原因。本文还探讨了构式语法在汉语短语和词这两级单位中的应用,并认为构式语法在构式义突显时使用更为有效。

M1基因模式差异对H9N2亚型禽流感病毒增殖特性的影响

为探究基质蛋白1(M1)对H9N2亚型禽流感病毒适应性的影响,研究基于M1的5种主要模式,利用反向遗传技术拯救了5株具有不同M1基因模式的H9N2亚型禽流感病毒,通过测定病毒的一步与多步生长曲线以及生长竞争优势试验探讨M1对H9N2亚型禽流感病毒增殖能力的影响,将MOI均为0.001的5株病毒共感染MDCK细胞,感染后48h提取细胞上清的病毒RNA,将反转录的cDNA样品进行单核苷酸多态性(SNP)测序。结果显示:M1为P5模式的H9N2亚型禽流感病毒增殖能力显著高于其余4株病毒(P<0.05),P5模式病毒的M1基因所涉及的9个可检测的氨基酸位点占比超过74%。研究表明,M1为P5模式的H9N2亚型禽流感病毒具有最强的增殖能力和明显的生长竞争优势,结果从M1对病毒增殖能力影响角度解释了该分支病毒在我国禽群中广泛流行的原因。