期刊文献+
共找到24篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白在昆虫细胞中的表达与鉴定
1
作者 张洁 崔鹏飞 +10 位作者 张元成 邢鑫 王丛丛 颜成 王燕 陈源 朱春成 缪葭皓 陈素娟 邓国华 陈化兰 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期40-44,共5页
研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的神经氨酸酶(NA)蛋白。试验为获得具有良好反应原性的NA蛋白,将H5N1亚型AIV(DK/YN/S4469/2022)密码子优化后的N1基因插入载体pFastBac1,构建的重组转移载体pFastBac1... 研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的神经氨酸酶(NA)蛋白。试验为获得具有良好反应原性的NA蛋白,将H5N1亚型AIV(DK/YN/S4469/2022)密码子优化后的N1基因插入载体pFastBac1,构建的重组转移载体pFastBac1-N1转化至DH10Bac感受态细胞,经过蓝白斑筛选获得阳性重组杆粒rBacmid-N1,然后将重组杆粒转染至sf9昆虫细胞,获得N1亚型重组杆状病毒。结果显示:N1重组蛋白在sf9昆虫细胞中正确表达,并且该重组蛋白具有良好的反应原性,能够与N1蛋白单克隆抗体3F3发生特异性反应,其仅能识别N1亚型鸡血清,特异性较好。研究成功制备了N1重组蛋白,为NA蛋白表达方法提供参考并为临床血清样品的N1抗体检测方法的建立奠定基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 杆状病毒表达系统 n1蛋白 血清抗体
下载PDF
蛋白酶N1对小鼠心肌细胞增殖的作用及机制
2
作者 赵宗磊 陈颂歌 +1 位作者 孙锁峰 王丽霞 《新乡医学院学报》 CAS 2024年第3期204-208,共5页
目的探讨蛋白酶N1(PKN1)对小鼠心肌细胞增殖的作用及机制。方法使用异氟烷麻醉1日龄小鼠2只,分离小鼠心肌细胞,并分为对照组和干扰组,干扰组心肌细胞转染PKN1干扰片段,对照组细胞转染对照片段。按照随机数字表法将10只小鼠分为正常组和... 目的探讨蛋白酶N1(PKN1)对小鼠心肌细胞增殖的作用及机制。方法使用异氟烷麻醉1日龄小鼠2只,分离小鼠心肌细胞,并分为对照组和干扰组,干扰组心肌细胞转染PKN1干扰片段,对照组细胞转染对照片段。按照随机数字表法将10只小鼠分为正常组和观察组,每组5只。观察组小鼠于心脏原位注射PKN1干扰腺病毒,正常组小鼠于心脏原位注射空载腺病毒。采用免疫荧光法检测4组小鼠心肌细胞或心肌组织中Ki-67阳性表达率,以Ki-67阳性表达率表示心肌细胞增殖能力;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测对照组和干扰组小鼠心肌细胞中PKN1 mRNA表达;采用Western blot法检测对照组和干扰组小鼠心肌细胞中PKN1和cyclin D1蛋白表达。结果干扰组心肌细胞中Ki-67阳性表达率均显著低于对照组(t=11.201,P<0.01),观察组小鼠心肌组织中Ki-67阳性表达率显著低于正常(t=11.851,P<0.01)。干扰组心肌细胞中PKN1 mRNA相对表达量显著低于对照组(t=7.022,P<0.01)。干扰组心肌细胞中PKN1和cyclin D1蛋白相对表达量均显著低于对照组(t=5.762、6.884,P<0.01)。结论小鼠心肌细胞中PKN1表达降低可抑制cyclin D1蛋白表达,从而抑制心肌细胞增殖。 展开更多
关键词 蛋白酶n1 cyclin D1蛋白 心肌细胞 增殖
下载PDF
血清PKN1、TNFRSF4、DDIT4预测子宫内膜癌患者淋巴结转移及预后的临床价值
3
作者 厉昕妤 刘英杰 +3 位作者 郭佳 许楠 杨小杰 董仙萍 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第16期1931-1935,1940,共6页
目的探讨血清蛋白激酶N1(PKN1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF4)、DNA损伤诱导转录因子4(DDIT4)预测子宫内膜癌患者淋巴结转移和预后的临床价值。方法选取2019年10月至2021年10月于唐山市妇幼保健院治疗的180例子宫内膜癌患者为... 目的探讨血清蛋白激酶N1(PKN1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF4)、DNA损伤诱导转录因子4(DDIT4)预测子宫内膜癌患者淋巴结转移和预后的临床价值。方法选取2019年10月至2021年10月于唐山市妇幼保健院治疗的180例子宫内膜癌患者为子宫内膜癌组。另选取同期在该院治疗的子宫良性疾病患者180例作为良性疾病组,以及在该院体检的180例健康者作为健康组。子宫内膜癌组根据是否发生淋巴结转移分为淋巴结转移组42例和无淋巴结转移组138例,按照随访结果将患者分为预后不良组和预后良好组。比较各组血清PKN1、TNFRSF4、DDIT4水平,Logistic模型分析患者预后的影响因素,以及绘制受试者工作特征曲线分析血清PKN1、TNFRSF4、DDIT4对患者预后的预测价值。结果与健康组比较,子宫内膜癌组、良性疾病组血清PKN1、DDIT4水平升高,血清TNFRSF4水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移组血清PKN1、DDIT4水平高于无淋巴结转移组,TNFRSF4水平低于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组低分化程度、淋巴脉管间隙浸润阳性、肌层浸润≥1/2的占比高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清PKN1、DDIT4水平高于预后良好组,TNFRSF4水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清PKN1、DDIT4、LVSI、肌层浸润是子宫内膜癌预后的危险因素,血清TNFRSF4为子宫内膜癌预后的保护因素(P<0.05)。血清PKN1、TNFRSF4、DDIT4联合对子宫内膜癌患者预后状况的预测效能高于各血清指标单独预测(P<0.05)。结论血清PKN1、TNFRSF4、DDIT4与子宫内膜癌患者淋巴结转移及预后有关,且对患者预后的预测效能较高。 展开更多
关键词 蛋白激酶n1 肿瘤坏死因子受体超家族成员4 DNA损伤诱导转录因子4 子宫内膜癌 预后
下载PDF
冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清骨形态发生蛋白4,N1-甲基烟酰胺和血管生成素样蛋白8水平检测的临床意义 被引量:5
4
作者 关小明 陈锴 王文会 《现代检验医学杂志》 CAS 2021年第4期15-20,共6页
目的研究冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)患者血清骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP-4),N1-甲基烟酰胺(N1-methylnicotinamide,me-Nam)和血管生成素样蛋白8(angiopoietinlike protein 8,ANGPTL8... 目的研究冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)患者血清骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP-4),N1-甲基烟酰胺(N1-methylnicotinamide,me-Nam)和血管生成素样蛋白8(angiopoietinlike protein 8,ANGPTL8)水平检测的临床意义。方法选取2018年1月~2020年1月佛山市中医院诊治的86例CHD患者作为CHD组,以健康体检的60例健康人群为对照组,检测CHD组及对照组血清BMP-4,me-Nam,ANGPTL8,血脂及炎症因子水平。比较不同冠状动脉狭窄程度、不同病变支数患者血清BMP-4,me-Nam及ANGPTL8水平。Pearson线性相关分析CHD组患者血清BMP-4,me-Nam和ANGPTL8之间的相关性及三者与Gensini积分、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)的相关性。ROC曲线分析血清BMP-4,me-Nam,ANGPTL8及联合检测对CHD组患者的诊断价值。结果与对照组相比,CHD组患者高血压史、糖尿病史占比较高,TC,TG,LDL-C,IL-6,TNF-α及hs-CRP水平明显增高,HDL-C水平明显降低,差异均有统计学意义(t=5.950~28.084,均P<0.05)。与对照组相比,CHD组患者血清BMP-4,me-Nam,ANGPTL8水平明显增高,差异均有统计学意义(t=14.201,13.495,37.538,均P<0.05)。随着Gensini积分升高或病变支数的增加,CHD患者的血清BMP-4,me-Nam,ANGPTL8有逐渐升高的趋势(χ^(2)=80.976,75.688,108.641,均P<0.05)。CHD患者血清BMP-4表达与me-Nam,ANGPTL8表达呈显著正相关(r=0.567,0.610,均P<0.05),me-Nam与ANGPTL8的表达呈显著正相关(r=0.562,P=0.000)。血清BMP-4,me-Nam,ANGPTL8及联合检测的曲线下面积分别为0.707(95%CI:0.601~0.812),0.713(95%CI:0.612~0.833),0.759(95%CI:0.667~0.850)及0.847(95%CI:0.722~0.908),联合诊断的诊断效能大于任一单一指标的诊断效能。结论CHD患者血清BMP-4,me-Nam及ANGPTL8水平升高,三者与血脂、炎症因子、冠状动脉狭窄程度及病变支数有关,检测其水平可为CHD病情评估提供一定参考。 展开更多
关键词 冠心病 骨形态发生蛋白4 n1-甲基烟酰胺 血管生成素样蛋白8 血脂 炎症因子 冠脉病变
下载PDF
2009年流行性甲型H1N1流感重症肺炎患儿血清肺表面活性蛋白A、B、C、D的变化 被引量:5
5
作者 舒林华 张晗 +5 位作者 尚云晓 宗志红 相云 刘立云 刘芬 崇维琨 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第48期16-18,共3页
目的探讨流行性甲型H1N1流感(简称甲流)重症肺炎患儿肺表面活性蛋白A、B、C、D在血清含量变化的特点,寻找肺组织损伤的生化指标。方法采用ELISA方法检测8例甲流重症肺炎患儿(甲流组)和20例健康儿童(对照组)血清肺表面活性蛋白A、B、C、... 目的探讨流行性甲型H1N1流感(简称甲流)重症肺炎患儿肺表面活性蛋白A、B、C、D在血清含量变化的特点,寻找肺组织损伤的生化指标。方法采用ELISA方法检测8例甲流重症肺炎患儿(甲流组)和20例健康儿童(对照组)血清肺表面活性蛋白A、B、C、D含量,同时化验前白蛋白和白蛋白等。结果甲流组血清肺表面活性蛋白A、B、C、D含量高于对照组(P均<0.05);外周血白细胞、血浆前白蛋白、白蛋白等低于对照组(P均<0.05);二聚体高于对照组(P<0.05)。结论甲流重症肺炎患儿血清肺表面活性蛋白A、B、C、D含量可作为肺组织损伤严重程度的检验指标。 展开更多
关键词 流行性甲型H1n1流感 重症肺炎 肺表面活性物质相关蛋白质类 前白蛋白 白蛋白
下载PDF
271例甲型H1N1流感C-反应蛋白与白细胞的关系探讨 被引量:2
6
作者 周晓飞 罗冬霞 +4 位作者 周凤先 王玥莲 温贤敏 曾义岚 刘大凤 《现代临床医学》 2012年第3期169-170,共2页
目的:探讨甲型H1N1流感C-反应蛋白(CRP)与白细胞(WBC)的关系。方法:回顾性分析271例住院患者不同临床类型、不同疾病阶段CRP与WBC的关系。结果:①甲型H1N1流感患者感染初期CRP升高常见,且升高程度随着病情的加重而更明显。②轻症患者CR... 目的:探讨甲型H1N1流感C-反应蛋白(CRP)与白细胞(WBC)的关系。方法:回顾性分析271例住院患者不同临床类型、不同疾病阶段CRP与WBC的关系。结果:①甲型H1N1流感患者感染初期CRP升高常见,且升高程度随着病情的加重而更明显。②轻症患者CRP升高幅度<3倍正常值上限(ULN),重症患者CRP升高幅度达10倍ULN,危重症患者CRP升高幅度达20倍ULN。③Pearson相关分析显示,感染初期CRP与年龄、WBC及中性粒细胞百分率(GR%)均呈正相关。当校正了年龄因素后,偏相关分析发现CRP仍与WBC呈正相关,与GR%的相关性消失。结论:甲型H1N1流感患者CRP升高常见,轻度升高(<3倍ULN)与病毒感染所致的炎症反应有关,明显升高(≥10倍ULN)提示合并细菌感染。 展开更多
关键词 甲型H1n1流感 C-反应蛋白 白细胞 相关性
下载PDF
在无血清条件下TNFα通过Pkn1和MAPK-Erk通路对FBJ细胞生长的调控作用 被引量:6
7
作者 王丽 王毅楠 +2 位作者 吴英良 山形贞子 山形达也 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期145-151,共7页
目的研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)在无血清条件下作为生长因子促进FBJ细胞生长的信号通路。方法用细胞活性检测法分析细胞的活性;分别用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptional-polymerase chain reaction... 目的研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)在无血清条件下作为生长因子促进FBJ细胞生长的信号通路。方法用细胞活性检测法分析细胞的活性;分别用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptional-polymerase chain reaction,RT-PCR)法和免疫印迹法检测细胞中TNFα的表达以及胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,Erk)、p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的磷酸化水平。结果在无血清培养基培养条件下,经TNFα(10μg.L-1)处理的FBJ细胞明显对抗无血清条件下诱发的细胞死亡,TNFαsense cD-NA转染的FBJ-LL和FBJ-S1细胞均能提高其在正常培养基以及无血清培养基中的生长速度,TNFα是FBJ细胞中重要的生长因子之一;蛋白酶N1(protein kinase N1,Pkn1)siRNA可明显沉默目的基因Pkn1的表达,同时降低TNFα的含量;Pkn1沉默的细胞在无血清条件下的生长明显被抑制;TNFα处理的细胞能迅速刺激Erk的磷酸化,Erk沉默的FBJ-LL细胞的生长速度明显降低,TNFα通过Erk信号通路诱发细胞生长;TNFα亦能诱导另一有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-ac-tivated protein kinase,MAPK)家族p38的磷酸化;神经节苷脂GD1a可降低TNFα在FBJ细胞中的表达,TNFα诱发的无血清条件下的生长速度也被神经节苷脂GD1a抑制。结论在无血清条件下,TNFα通过Pkn1和MAPK-Erk通路调控小鼠骨肉瘤FBJ细胞的生长。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子α 胞外信号调节激酶 蛋白酶n1 FBJ细胞 细胞死亡 神经节苷脂 GD1a
下载PDF
pEGFP-N1-α-synuclein真核表达载体的构建
8
作者 杨波 苑玉和 +2 位作者 金金 陈虹 陈乃宏 《武警医学院学报》 CAS 2009年第7期573-576,共4页
【目的】构建pEGFP-N1-α-synuclein真核表达载体,为研究帕金森病奠定基础。【方法】设计特异引物,PCR扩增α-synuclein cDNA并引入FLAG标签,克隆入pEGFP-N1质粒,对重组质粒进行酶切及测序,鉴定正确后转化Ecoli.DH5(大肠杆菌),大量扩增... 【目的】构建pEGFP-N1-α-synuclein真核表达载体,为研究帕金森病奠定基础。【方法】设计特异引物,PCR扩增α-synuclein cDNA并引入FLAG标签,克隆入pEGFP-N1质粒,对重组质粒进行酶切及测序,鉴定正确后转化Ecoli.DH5(大肠杆菌),大量扩增重组质粒。试剂盒纯化重组质粒。用Lipofectamine TM2000将重组质粒转染2937细胞,Western blotting检测融合蛋白在细胞内的表达。【结果】pEGFP-N1-α-synuclein重组质粒构建成功,Western blotting检测融合蛋白分子量为47kd,符合预期值。【结论】成功构建了人野生型α-synuclein与绿色荧光蛋白基因融合并加入FLAG标签的真核表达载体pEGFP-N1-α-synuclein。 展开更多
关键词 帕金森病 Α-SYNUCLEIN PEGFP-n1 真核表达 融合蛋白
下载PDF
基于H1N1型禽流感病毒的HA蛋白序列进化树研究 被引量:1
9
作者 薛晓丽 李阳 唐旭清 《计算机应用研究》 CSCD 北大核心 2015年第9期2634-2638,共5页
为了从本质上揭示H1N1病毒分子的变异、流感流行等关系,提出一种构建H1N1病毒进化树新方法。在1902—2013年全球22 455条H1N1型禽流感病毒HA蛋白质序列数据的基础上,利用其特征向量构建基于内积的HA蛋白质序列相似度。采用基于相似度的... 为了从本质上揭示H1N1病毒分子的变异、流感流行等关系,提出一种构建H1N1病毒进化树新方法。在1902—2013年全球22 455条H1N1型禽流感病毒HA蛋白质序列数据的基础上,利用其特征向量构建基于内积的HA蛋白质序列相似度。采用基于相似度的完全聚类图的方法进行数据系统粗粒化的相似信息提取。最后,利用基于模糊邻近关系的结构聚类方法进行H1N1型禽流感病毒HA蛋白质序列的进化树研究,将病毒分为33大类。进一步分析表明,H1N1病毒的变异不仅与爆发时间密切相关,还与所分布地域及地域间的距离有很大关系,即分布地域间的距离越近,爆发的病毒进化的相似程度越高。对大量的病毒进行进化树分析,从宏观角度体现了各类病毒之间的进化关系。 展开更多
关键词 H1n1病毒 HA蛋白序列 模糊邻近关系 结构聚类 进化树
下载PDF
重组质粒pEGFP-N1-Srv+免疫SD大鼠后对龋齿的影响
10
作者 杨宁宁 何奎芳 +3 位作者 潘乙怀 王惠宁 邓辉 麻健丰 《上海口腔医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期637-642,共6页
目的:将已构建的变形链球菌表面蛋白可变区重组质粒pEGFP-N1-Srv+经不同途径免疫SD大鼠,观察其在大鼠体内的原位表达,免疫定菌鼠后的特异性抗体形成及对龋齿的影响。方法:20只SD大鼠随机分为4组,重组质粒pEGFP-N1-Srv+经股四头肌肌肉注... 目的:将已构建的变形链球菌表面蛋白可变区重组质粒pEGFP-N1-Srv+经不同途径免疫SD大鼠,观察其在大鼠体内的原位表达,免疫定菌鼠后的特异性抗体形成及对龋齿的影响。方法:20只SD大鼠随机分为4组,重组质粒pEGFP-N1-Srv+经股四头肌肌肉注射和下颌下腺区皮下注射2种途径免疫大鼠,免疫组化观察重组质粒的原位表达;24只SD大鼠随机分为4组,免疫途径同上,免疫剂量为100μg/只,2周后加强免疫1次。应用间接酶联免疫吸附法检测血清特异性IgG抗体和唾液特异性sIgA抗体,Keyes龋齿计分法评估磨牙的患龋情况。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:①大鼠股四头肌细胞、下颌下腺组织内均见重组质粒的阳性表达。②重组质粒pEGFP-N1-Srv+经不同途径免疫定菌SD大鼠后,可检测到血清特异性IgG抗体和唾液特异性sIgA抗体水平升高,均于首次免疫后第4周达到高峰;该时段各组间的抗体水平,实验组均显著高于对照组(P<0.01);经下颌下腺区皮下注射后的sIgA抗体水平显著高于肌肉注射组(P<0.05)。③重组质粒免疫定菌鼠后,实验组和对照组间的龋齿计分无显著差异(P>0.05)。结论:重组质粒pEGFP-N1-Srv+能够在动物体内原位表达,并能诱导SD大鼠血清特异性IgG和唾液特异性sIgA抗体增高;经下颌下腺区皮下注射后的sIgA抗体水平显著高于肌肉注射,具有一定的免疫优势。但该区域单独的龋齿预防效果不明显。 展开更多
关键词 变形链球菌 表面蛋白V区 重组质粒pEGFP—n1-Srv+ 基因疫苗
下载PDF
FGFR3和FOXN1在脂溢性角化病患者中的表达及其与良性增殖的关系 被引量:2
11
作者 王峰 黄咏梅 《中国中西医结合皮肤性病学杂志》 CAS 2021年第2期117-120,共4页
目的研究成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)与叉头框蛋白N1(FOXN1)在脂溢性角化病(SK)患者中表达情况及其与肿瘤细胞良性增殖的关系。方法选取2016年4月—2019年1月我院收治的SK患者作为试验组(n=96),以试验组患者病变周围正常皮肤作为正... 目的研究成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)与叉头框蛋白N1(FOXN1)在脂溢性角化病(SK)患者中表达情况及其与肿瘤细胞良性增殖的关系。方法选取2016年4月—2019年1月我院收治的SK患者作为试验组(n=96),以试验组患者病变周围正常皮肤作为正常组(n=96)。另选取同期来院诊治的SK肿瘤细胞中发生恶性病变患者作为对照组(n=13)。按照有无SK家族病史分为有SK家族病史患者(n=54)与无家族史患者(n=42)。按照有无吸烟史分为有吸烟史患者(n=61)与无吸烟史患者(n=35)。采用免疫组化染色法,显微镜下观察FOXN1、FGFR3在各组患者中表达情况。采用Pearson相关系数分析法分析FOXN1与FGFR3表达的相关性,采采用logistic回归分析法分析SK发病危险因素。结果试验组FGFR3与FOXN1阳性细胞数均高于正常组(P<0.05);对照组FGFR3与FOXN1阳性细胞数小于试验组及正常组(P<0.05)。有SK家族病史患者FGFR3与FOXN1阳性细胞数均高于无家族病史患者(P<0.05)。有吸烟史患者FGFR3阳性细胞数高于无吸烟史患者(P<0.05);有吸烟史患者FOXN1阳性细胞数低于无吸烟史患者(P<0.05)。FOXN1与FGFR3成正相关(P<0.05)。有SK家族病史是SK发生的独立危险因素(P<0.05)。结论FGFR3与FOXN1均在SK患者中高表达且呈正比,与患者有SK家族病史密切相关。SK作为一种良性肿瘤,其细胞增殖几乎不存在恶性病变。FGFR3与FOXN1可通过相互作用,促进SK发生时角质形成细胞向良性增殖方向发展,从而避免细胞恶性增生。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子受体3 叉头框蛋白n1 脂溢性角化病 良性增殖
下载PDF
内源性芳香烃配体ITE对宫颈癌细胞生物学行为的影响及机制
12
作者 逯彦越 赵欣欣 +4 位作者 刘立燕 王凯 叶静文 刘凌云 王宝金 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第6期679-687,共9页
目的 探讨内源性芳香烃配体2-(1’H-吲哚-3’-羰基)噻唑-4-羧酸甲酯(ITE)对宫颈癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法 免疫组化检测芳香烃受体(AhR)在宫颈癌及正常宫颈组织的表达及定位;采用ITE处理宫颈癌细胞,MTS实验检测增殖能力... 目的 探讨内源性芳香烃配体2-(1’H-吲哚-3’-羰基)噻唑-4-羧酸甲酯(ITE)对宫颈癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法 免疫组化检测芳香烃受体(AhR)在宫颈癌及正常宫颈组织的表达及定位;采用ITE处理宫颈癌细胞,MTS实验检测增殖能力,Transwell实验检测迁移能力,qRT-PCR及Western blot检测AhR及下游基因CYP1A1、CYP1B1 mRNA和蛋白的表达变化,通过RNA-seq技术和生物信息学筛选参与AhR影响宫颈癌细胞增殖、迁移相关基因及相关信号通路;采用siRNA敲减PKN1后,检测宫颈癌细胞增殖及迁移能力,KEGG分析富集的与增殖及迁移相关的通路,Western blot检测ITE处理后PI3K-AKT通路蛋白表达。结果 AhR在宫颈癌组织中表达高于正常宫颈组织,ITE激活AhR及下游基因CYP1A1和CYP1B1且呈剂量和时间依赖性抑制宫颈癌细胞SiHa和CaSki的增殖和迁移能力(P <0.05)。RNA-seq技术和生物信息学筛选显示,经ITE处理后,与宫颈癌增殖、迁移功能密切相关的PKN1表达下调(P <0.05),且Western blot结果显示,SiHa和CaSki宫颈癌细胞系中PKN1蛋白表达在ITE处理后显著降低(P <0.05)。通过敲低细胞PKN1表达后,SiHa和CaSki细胞的增殖及迁移能力显著下降(P <0.05)。KEGG信号通路富集分析结果显示,差异表达基因相关的信号通路主要集中在PI3K-AKT信号通路。PI3KAKT通路抑制剂LY294002可阻断ITE诱导的P-AKT水平的增加(P <0.05),并逆转ITE对宫颈癌细胞增殖及迁移的抑制作用(P <0.05)。结论 内源性芳香烃配ITE可以抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭能力,可能与下调PKN1及激活PI3K-AKT通路有关。 展开更多
关键词 宫颈癌 2-(1’H-吲哚-3’-羰基)噻唑-4-羧酸甲酯 芳香烃受体 蛋白激酶n1 PI3K-AKT通路
下载PDF
牛FADD基因的克隆分析及其真核表达载体的构建 被引量:3
13
作者 杨润军 张路培 +2 位作者 许尚忠 李俊雅 高雪 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第2期15-20,26,共7页
【目的】克隆牛FADD基因并构建真核表达载体,以探讨其在牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采用RT-PCR技术,从牛卵巢组织总RNA中反转录FADD cDNA,对编码区核苷酸序列分析后,将其全长cDNA删除终止密码子,采用定向克隆技术连接克隆到... 【目的】克隆牛FADD基因并构建真核表达载体,以探讨其在牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采用RT-PCR技术,从牛卵巢组织总RNA中反转录FADD cDNA,对编码区核苷酸序列分析后,将其全长cDNA删除终止密码子,采用定向克隆技术连接克隆到含有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-Nl中,用BglⅡ、EcoRⅠ双酶切、测序进行鉴定,并进行了牛FADD mRNA的组织表达谱分析。【结果】克隆的牛FADD基因编码区全长序列与NCBI公布的序列完全一致,核苷酸和氨基酸序列与猪的同源性最高,与鸡的同源性最低,仅为42.5%和44%;通过PCR方法在FADD阅读框两端引入了BglⅡ和EcoRⅠ克隆位点,并于起始位点前加入Kozak序列,成功构建pAcGFP-N1-bFADD融合蛋白表达载体。组织表达谱分析表明,牛FADD mRNA高表达于肝脏、淋巴组织及睾丸、卵巢组织,在小肠、心、胰腺、肺、肾及肌肉中则弱表达或无表达。【结论】成功克隆了牛FADD基因,并构建pAcGFP-N1-bFADD融合蛋白表达载体,为FADD基因在牛卵母细胞发育调控中的基础研究提供了一种简便可靠的方法。 展开更多
关键词 FADD基因 pAcGFP—n1载体 融合蛋白 重组质粒
下载PDF
基因1b型不同准种株HCV核心蛋白真核表达质粒的构建及表达 被引量:1
14
作者 颜学兵 梅蕾 +3 位作者 潘修成 韩方正 汪莉萍 张言超 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期257-260,共4页
目的构建基因1b型丙型肝炎病毒(HCV)不同准种株截短片段核心蛋白(CP)绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白表达质粒。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增获得等长度片段的CP基因:氨基酸(aa)长度为癌中心株(T)∶T∶1-172aa、癌旁株(NT)∶1-172aa及C191(HC... 目的构建基因1b型丙型肝炎病毒(HCV)不同准种株截短片段核心蛋白(CP)绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白表达质粒。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增获得等长度片段的CP基因:氨基酸(aa)长度为癌中心株(T)∶T∶1-172aa、癌旁株(NT)∶1-172aa及C191(HCV-J6)∶1-172aa,扩增产物用NheI及EcoRI双酶切后将其插入到真核表达质粒pEGFP-N1中,转染不同细胞系,用荧光显微镜及流式细胞仪观察GFP的表达。结果PCR扩增、序列分析验证,T、NT及C191截短片段CP基因均成功克隆到pEGFP-N1中,在转染HepG2、chang-liver48h后,用荧光显微镜及流式细胞仪均观察到GFP的表达。结论构建基因1b型HCV不同准种株截短片段CP的真核表达质粒获得成功,可用于不同准种株CP的功能研究。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 PEGFP-n1
下载PDF
人PSF真核表达载体构建及其在CHO细胞中的表达
15
作者 易卉玲 许晓利 +2 位作者 叶雁杰 柳威 舒细记 《贵州大学学报(自然科学版)》 2012年第3期26-29,共4页
目的是构建人PSF基因真核表达载体pEGFP-N1-PSF,并在检测其在CHO细胞株中的表达情况。应用DNA重组技术和PCR方法从人宫颈癌Hela细胞中扩增PSF基因,插入pEGFP-N1真核表达载体,构建重组质粒pEGFP-N1-PSF并测序鉴定。将pEGFP-N1-PSF瞬时转... 目的是构建人PSF基因真核表达载体pEGFP-N1-PSF,并在检测其在CHO细胞株中的表达情况。应用DNA重组技术和PCR方法从人宫颈癌Hela细胞中扩增PSF基因,插入pEGFP-N1真核表达载体,构建重组质粒pEGFP-N1-PSF并测序鉴定。将pEGFP-N1-PSF瞬时转染CHO细胞,通过Western blot和RT-PCR方法检测PSF的表达,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。结果 CHO细胞转染pEGFP-N1-PSF真核表达载体后,RT-PCR和Western blot实验发现,在RNA和蛋白水平有PSF的表达,在荧光显微镜下可以观察到融合蛋白EGFP/PSF的表达。成功构建pEGFP-N1-PSF真核表达载体,证实其在CHO细胞中可以表达。 展开更多
关键词 人PSF蛋白 PEGFP-n1 真核表达载体 融合蛋白
下载PDF
人精胺/精眯N^1-乙酰基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定
16
作者 李春红 杨建林 +2 位作者 韩钰 蔡富强 王艳林 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1088-1091,1098,共5页
目的制备鼠抗人精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)单克隆抗体,分析该抗体的效价、抗原特异性及其在Western blot和免疫组织化学等分析技术中的可用性。方法在BL21(DE3)中原核表达带6×His标签的SSAT重组蛋白,并用Ni-NTA树脂亲和层析... 目的制备鼠抗人精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)单克隆抗体,分析该抗体的效价、抗原特异性及其在Western blot和免疫组织化学等分析技术中的可用性。方法在BL21(DE3)中原核表达带6×His标签的SSAT重组蛋白,并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。用SSAT重组蛋白免疫Balb/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗SSAT单克隆抗体,所得抗体的特异性及效价用ELISA、Western blot及免疫组织化学技术检测。结果成功建立了稳定分泌鼠抗人SSAT的单克隆抗体杂交瘤细胞株,该单克隆抗体可用于ELISA、Western blot、免疫组织化学、免疫荧光等分析技术。结论成功制备SSAT单克隆抗体,为SSAT相关的分子和病理研究奠定了基础。 展开更多
关键词 精胺/精眯n1-乙酰基转移酶 重组蛋白 单克隆抗体
下载PDF
Structure modeling and spatial epitope analysis for HA protein of the novel H1N1 influenza virus 被引量:2
17
作者 WU Di XU TianLei +29 位作者 SUN Jing DAI JianXin DING GuoHui HE YunGang ZHOU ZhengFeng XIONG Hui DONG Hui JIN WeiRong BIAN Chao JIN Li WANG HongYan WANG XiaoNing YANG Zhong ZHONG Yang WANG Hao CHE XiaoYan HUANG Zhong LAN Ke SUN Bing WU Fan YUAN ZhenAn ZHANG Xi ZHOU XiaoNong ZHOU JiaHai MA ZhiYong TONG GuangZhi GUO YaJun ZHAO GuoPing LI YiXue CAO ZhiWei 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2009年第13期2171-2173,共3页
In recent months,a novel influenza virus H1N1 broke out around the world.With bioinformatics technology,the 3D structure of HA protein was obtained,and the epitope residues were predicted with the method developed in ... In recent months,a novel influenza virus H1N1 broke out around the world.With bioinformatics technology,the 3D structure of HA protein was obtained,and the epitope residues were predicted with the method developed in our group for this novel flu virus.58 amino acids were identified as potential epitope residues,the majority of which clustered at the surface of the globular head of HA protein.Although it is located at the similar position,the epitope of HA protein for the novel H1N1 flu virus has obvious differences in the electrostatic potential compared to that of HA proteins from previous flu viruses. 展开更多
关键词 禽流感病毒 抗原表位 A蛋白 结构建模 和空间 生物信息学技术 三维结构 残留物
原文传递
大鼠寡霉素敏感相关蛋白的克隆及真核表达载体的构建 被引量:1
18
作者 张建红 刘艳霞 +2 位作者 王宝利 范海鸣 吴艳娜 《天津医科大学学报》 2007年第4期479-481,488,共4页
目的:克隆大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)的基因并构建pEGFP-N1真核表达载体。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从大鼠脑组织中扩增出OSCP基因,将其插入到pTA2克隆载体中,测序鉴定后亚克隆至pEGFP-N1真核表达载体并进行酶切、测序... 目的:克隆大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)的基因并构建pEGFP-N1真核表达载体。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从大鼠脑组织中扩增出OSCP基因,将其插入到pTA2克隆载体中,测序鉴定后亚克隆至pEGFP-N1真核表达载体并进行酶切、测序鉴定。结果:PCR扩增出约为700 bp的基因片段;重组克隆载体pTA2-OSCP经测序鉴定证明pTA2载体中插入了目的基因片段;重组表达载体pEGFP-N1-OSCP经酶切、测序鉴定证明其构建成功。结论:OSCP基因克隆和真核表达载体构建成功,这为下一步开展该基因的重组蛋白表达及功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 寡霉素敏感相关蛋白 克隆 pEGFP—n1真核表达载体 大鼠
下载PDF
高迁移率族警报素的表达在非小细胞肺癌患者预后中的意义
19
作者 刘婷 赵华 +2 位作者 魏枫 王扬 任秀宝 《天津医药》 CAS 北大核心 2018年第9期937-941,共5页
目的探讨高迁移率蛋白B1和N1(HMGN1和HMGB1)与非小细胞肺癌(NSCLC)临床病理特征及预后的相关性。方法采用免疫组织化学染色(IHC)方法检测91例NSCLC患者的肿瘤组织石蜡标本胞浆中HMGB1和HMGN1的表达情况,计算阳性表达率。分析HMGB1和HMGN... 目的探讨高迁移率蛋白B1和N1(HMGN1和HMGB1)与非小细胞肺癌(NSCLC)临床病理特征及预后的相关性。方法采用免疫组织化学染色(IHC)方法检测91例NSCLC患者的肿瘤组织石蜡标本胞浆中HMGB1和HMGN1的表达情况,计算阳性表达率。分析HMGB1和HMGN1的表达与临床病理特征相关性。利用Kaplan-Meier法分析HMGB1和HMGN1与预后的关系。结果 91例患者中HMGB1和HMGN1细胞胞浆的阳性表达率分别为40%(36/91)和31%(28/91),两者表达水平呈正相关(rs=0.319,P<0.001)。晚期NSCLC(Ⅲ~Ⅳ期)的HMGN1阳性表达率高于早期NSCLC(Ⅰ~Ⅱ期)患者(P<0.05)。有淋巴结转移者HMGN1的阳性表达率高于无淋巴结转移者(P<0.05);HMGN1高表达的NSCLC患者预后稍劣于低表达者,但差异无统计学意义。结论 HMGN1可能成为一种预测非小细胞肺癌预后的生物标志物。 展开更多
关键词 非小细胞肺 肿瘤分期 预后 高迁移率蛋白B1 高迁移率蛋白n1 标志物
下载PDF
变异链球菌LuxS基因表达载体的构建
20
作者 马丽芳 倪龙兴 +2 位作者 童忠春 候波 杨帆 《口腔医学》 CAS 2008年第4期202-204,共3页
目的构建可用于变异链球菌表达系统的含LuxS基因的原核表达载体。方法应用聚合酶链反应(PCR)方法分别从变异链球菌的DNA、载体pEGFP-N1中扩增出LuxS基因的启动子(pLuxS)和绿色荧光蛋白(gfp)基因片段,经回收、纯化后,利用分子克隆技术分... 目的构建可用于变异链球菌表达系统的含LuxS基因的原核表达载体。方法应用聚合酶链反应(PCR)方法分别从变异链球菌的DNA、载体pEGFP-N1中扩增出LuxS基因的启动子(pLuxS)和绿色荧光蛋白(gfp)基因片段,经回收、纯化后,利用分子克隆技术分别克隆入载体pUC19中。结果通过对重组质粒pUC19-pLuxS-gfp的酶切图谱和DNA序列测定分析证实插入片段序列正确。结论成功构建出原核表达重组质粒pUC 19-pLuxS-gfp为下一步的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 变异链球菌 LuxS基因启动子(pLuxS) 绿色荧光蛋白(gfp) pUC19 pEGFP-n1质粒
下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部