人精胺/精眯N^1-乙酰基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备鼠抗人精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)单克隆抗体,分析该抗体的效价、抗原特异性及其在Western blot和免疫组织化学等分析技术中的可用性。方法在BL21(DE3)中原核表达带6×His标签的SSAT重组蛋白,并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。用SSAT重组蛋白免疫Balb/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗SSAT单克隆抗体,所得抗体的特异性及效价用ELISA、Western blot及免疫组织化学技术检测。结果成功建立了稳定分泌鼠抗人SSAT的单克隆抗体杂交瘤细胞株,该单克隆抗体可用于ELISA、Western blot、免疫组织化学、免疫荧光等分析技术。结论成功制备SSAT单克隆抗体,为SSAT相关的分子和病理研究奠定了基础。

SSAT2通过抑制HIF-1α表达增强肾癌Caki-1细胞化疗敏感性

目的探讨转染精脒/精胺N1乙酰基转移酶2(spermidine/spermine N1-acetyltransferase 2,SSAT2)在低氧条件下对肾癌Caki-1细胞增殖、凋亡和阿霉素敏感性的影响及机制。方法经X-treme GENE HP介导将真核表达质粒pcDNA3.1(D)/V5-His-SSAT2转入肾癌Caki-1细胞,细胞在1%氧浓度下培养,Western blot法检测SSAT2蛋白和低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡率、死亡率;MTT法检测细胞的增殖,以及不同浓度阿霉素对细胞的抑制率。结果 SSAT2成功转入肾癌Caki-1细胞,与空白细胞组及空载体组比较,转染SSAT2组HIF-1α蛋白表达明显下调(P<0.01),细胞增殖受到明显抑制(P<0.01),细胞凋亡率和死亡率均增加(P<0.05)。阿霉素浓度为2μg/ml时,转染组细胞抑制率可达(67.5±3.7)%,对空白细胞和空载体细胞的抑制率为(54.7±8.4)%、(56.8±7.7)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论转染SSAT2可以通过下调HIF-1α蛋白表达,减少肾癌细胞的增殖,增加肾癌Caki-1细胞的凋亡率、坏死率和对阿霉素的敏感性,针对SSAT2的基因治疗可能成为逆转肾癌耐药的方法之一。

铁死亡调控基因亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶1在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨铁死亡调控基因亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶1(SAT1)在脑胶质瘤患者中的表达趋势及临床意义。方法纳入中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA,http://www.cgga.org.cn/)及美国癌症基因组图谱计划(TCGA,http://www.cancergenome.nih.gov/)数据库中3批次共1720例(CGGA-325组、CGGA-693组及TCGA组分别为325、693、702例)脑胶质瘤患者的临床资料及其胶质瘤组织样本表达谱数据,分析SAT1基因的表达趋势及与患者病理、分子病理指标、预后等因素的相关关系。应用细胞模型研究SAT1基因在脑胶质瘤中的生物学功能。采用Kaplan-Meier生存曲线比较SAT1基因表达量不同的脑胶质瘤患者的生存差异;应用受试者工作特征(ROC)曲线评估SAT1对脑胶质瘤患者1年和3年总生存率的预测作用。结果在脑胶质瘤患者样本中,SAT1在异柠檬酸脱氢酶(IDH)野生型胶质母细胞瘤中表达水平最高,在IDH突变联合1p19q缺失的低级别胶质瘤中表达水平最低(CGGA-325组、CGGA-693组及TCGA组患者中,均P<0.001)。在世界卫生组织(WHO)Ⅲ级及Ⅳ级的患者中,SAT1高表达的患者预后更差(不同数据库、不同级别SAT1高表达及低表达患者的中位生存期分别为:CGGA325组WHOⅢ级患者,485 d和1321 d,P<0.05;CGGA-325组WHOⅣ级患者,286 d和493 d,P<0.05;CGGA-693组WHOⅢ级患者,836 d和2982 d,P<0.05;CGGA-693组WHOⅣ级患者,356 d和459 d,P<0.05;TCGA组WHOⅢ级患者,31.57个月和114个月,P<0.05;TCGA组WHOⅣ级患者,11.24个月和13.77个月,P<0.05)。CGGA-325组患者中,应用ROC曲线评估SAT1对患者1年和3年生存的预测能力,其曲线下面积(AUC)分别为0.725、0.793;在CGGA-693组数据中,其AUC分别为0.615、0.671;在TCGA组中,其AUC分别为0.791、0.808(均P<0.001);在细胞模型中,下调SAT1基因表达,可抑制胶质瘤细胞增殖率(两种细胞系作用24 h及48 h后,均P<0.05)。结论SAT1基因与脑胶质瘤患者级别、分子亚型、预后等显著相关,可能通过激活肿瘤细胞增殖发挥作用。

miR-519e-5p/SAT1轴介导铁死亡信号通路调节子宫内膜异位症的发生发展

目的探讨微小RNA-519e-5p(miR-519e-5p)靶向调节精胺N1-乙酰基转移酶1(SAT1)对子宫内膜异位症(EMS)的影响。方法收集2023年1—6月在上海健康医学院附属周浦医院住院治疗的卵巢子宫内膜异位症患者的异位内膜组织,检测miR-519e-5p、SAT1蛋白表达;从异位病变组织分离细胞,将细胞分为Control组、anti-miR-NC组、anti-miR-519e-5p组、anti-miR-519e-5p+NC组、anti-miR-519e-5p+sh-SAT1组,分别检测萤光素酶活性、细胞活性、活细胞数和死细胞数、Fe^(2+)、ROS、GSH和MDA;普鲁士蓝染色观察铁颗粒分布情况;RT-qPCR检测miR-519e-5p、SAT1 mRNA表达;Western blot检测SAT1、GPX4、SLC7A11、MUC1、ACSL4蛋白表达。结果与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜异位症患者异位内膜组织中miR-519e-5p显著增加,SAT1表达显著降低(P<0.05);萤光素酶报告基因检测结果显示,miR-519e-5p与SAT1存在靶向关系;抑制miR-519e-5p后,细胞活性、GSH、GPX4、SLC7A11、MUC1显著降低,Fe平均光密度值、Fe^(2+)、MDA、ROS、ACSL4显著增加(P<0.05);沉默SAT1并抑制miR-519e-5p表达,细胞活性、GSH、GPX4、SLC7A11、MUC1显著增加,Fe平均光密度值、Fe^(2+)、MDA、ROS、ACSL4显著降低(P<0.05)。结论miR-519e-5p在子宫内膜异位症中上调表达,抑制miR-519e-5p表达可激活铁死亡信号通路,抑制子宫内膜异位症的发生。

p53/SAT1/ALOX15铁死亡通路蛋白与特发性炎性肌病的相关性

目的通过免疫组化法分别检测实验性自身免疫性肌炎(EAM)小鼠模型肌肉组织中p53、精脒/精胺N1-乙酰基转移酶1(SAT1)、花生四烯酸-15-脂加氧酶(ALOX15)蛋白的表达,探讨特发性炎性肌病(IIM)的发病机制与p53/SAT1/ALOX15铁死亡通路蛋白的相关性。方法随机将13只BALB/c小鼠分为EAM模型组(n=7)、对照组(n=6),通过粗略提取的豚鼠骨骼肌匀浆与完全弗氏佐剂混匀后皮下注射建立EAM小鼠模型,在末次免疫处理后1周,通过对小鼠临床表现的观察和体重、四肢的肌力、血清肌酸激酶水平、骨骼肌HE染色结果的测定等综合方法评定是否造模成功。通过免疫组化法分别检测EAM小鼠及对照组小鼠肌肉组织中p53、SAT1、ALOX15蛋白表达水平。结果经综合方法判定,EAM组小鼠6只造模成功(1只死亡)。EAM模型组小鼠肌肉组织中p53、SAT1、ALOX15三种蛋白的阳性表达率及免疫组化表达评分均高于对照组(P<0.05,P<0.01)。Pearson相关分析结果显示,p53分别与SAT1、ALOX15呈正相关(r=0.976,P=0.001;r=0.963,P=0.002),SAT1与ALOX15呈正相关(r=0.951,P=0.004)。结论p53/SAT1/ALOX15铁死亡通路蛋白可能参与了特发性炎性肌病的发病。

红果槲寄生的化学成分研究

目的研究红果槲寄生Viscum coloratum f.rubroauranticacum的化学成分。方法采用溶剂提取和多种色谱方法分离纯化,根据化合物的理化常数和波谱数据鉴定其结构。结果分离并鉴定了11个化合物,分别为齐墩果酸(1)、7,3′,4′-三甲基槲皮素(2)、浙贝素(3)、古柯二醇(4)、丁香脂素(5)、胡萝卜苷(6)、N,N-二甲基甲酰胺(7)、β-谷甾醇(8)、N-桂皮酰基丁二胺(9)、N1-桂皮酰基亚精胺(10)、肉桂酸(11)。结论化合物10为新化合物,化合物3、7、9为首次从槲寄生属植物中分离得到。

薏米多酚对HepG2细胞中抗氧化酶活性的影响

薏米含有丰富的酚类物质,且具有良好的抗氧化活性。采用大孔树脂、葡聚糖凝胶分离纯化薏米多酚,高效液相色谱法分析其具体成分;利用福林酚法测定每个组分的多酚含量;培养HepG2细胞,通过试剂盒检测细胞中T-AOC、MDA含量以及SOD、CAT和GPx活性的变化,分析薏米多酚纯化物对抗氧化酶的影响。研究表明,薏米中含有丰富的酚类物质,最主要的是N1,N5-双(对香豆酰)亚精胺、对香豆酸、阿魏酸及芦丁4种物质,存在于组分三、组分四中;4种化合物均具有较强的抗氧化性,能够提高HepG2细胞中T-AOC含量以及SOD、CAT和GPx的活性,降低MDA的含量,增强细胞的抗氧化能力。总体来看,N1,N5-双(对香豆酰)亚精胺相较于对香豆酸、阿魏酸和芦丁,具备更好的抗氧化能力。