YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白F1在消化系统恶性肿瘤中的研究进展

消化系统恶性肿瘤是临床常见的恶性肿瘤,其发病原因尚未清楚。腺苷的N6位甲基化形成的N6-甲基腺苷(m6A)被认为是真核生物信使RNA(mRNA)、微小RNA(miRNA)及长链非编码RNA(lncRNA)最普遍、最丰富和最保守的内部转录修饰,在多种肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。含有YTH功能结构域的蛋白是m6A阅读器,YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白F1(YTHDF1)是其中一员,其最主要的功能是影响m6A修饰的基因翻译。本文对YTHDF1在消化系统恶性肿瘤中的研究进展进行综述。

信使RNA甲基化在肾脏病中研究进展

信使RNA(messenger RNA,mRNA)甲基化修饰近年来研究普遍,包括N6-甲基腺苷(m^(6)A)、N5-甲基胞苷(m^(5)C)和N1-甲基腺苷(m^(1)A)等多种修饰在内。mRNA甲基化修饰的动态可逆生物学过程包括“编码器(Writer)”“消码器(Eraser)”和“读码器(Reader)”的参与,甲基化修饰中出现异常,可导致多种疾病的发生、发展,其中包括急性肾损伤和慢性肾脏病等肾脏相关疾病。mRNA甲基化修饰逐渐成为诊断和监测人类肾脏疾病发生、发展的生物标志物。本文将对mRNA甲基化在各种人类肾脏疾病中的研究展开简要论述。

老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白表达变化及与预后的关系

目的 探讨N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)、E2F8转录因子8(E2F8)蛋白表达与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法 选取46例老年乳腺癌患者,术中取癌组织和癌旁组织,用免疫组化染色法检测组织中YTHDF1、E2F8蛋白表达。随访患者并记录随访期间肿瘤复发、转移及死亡时间。用Spearman秩相关分析乳腺癌组织YTHDF1与E2F8蛋白表达的相关性;Kaplan-Meier法分析YTHDF1、E2F8蛋白表达与患者无进展生存预后的关系;Cox回归分析老年乳腺癌患者无进展生存预后的影响因素。结果 乳腺癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P均<0.05),二者蛋白表达呈正相关(r=0.706,P<0.05)。TNM分期Ⅱ期、肿瘤最大径>2 cm、合并淋巴结转移老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白阳性表达率高于TNM分期Ⅰ期、肿瘤最大径≤2 cm、无淋巴结转移的癌组织(P均<0.05)。32例患者发生肿瘤进展,YTHDF1、E2F8蛋白表达阳性患者5年无进展生存率低于其蛋白表达阴性患者(P均<0.05)。TNM分期Ⅱ期、合并淋巴结转移、YTHDF1蛋白阳性表达、E2F8蛋白阳性表达是老年乳腺癌患者无进展生存预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论 老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白高表达,且与老年乳腺癌患者肿瘤TNM分期、肿瘤最大径、淋巴结转移有关,是患者无进展生存预后的独立危险因素。

大鼠亚慢性铝暴露N6-甲基腺苷甲基化和N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1分析

目的观察亚慢性铝暴露对大鼠海马组织N6-甲基腺苷(m^(6)A)甲基化水平及N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)表达的影响。方法24只SPF级雄性SD大鼠,随机分为对照组(生理盐水)和低(10μmoL/kg)、中(20μmoL/kg)、高(40μmoL/kg)剂量Al(mal)3组,每组6只,腹腔注射隔天染毒,持续90 d。染毒结束后,采用Morris水迷宫实验测试大鼠逃避潜伏期、目标象限停留时间和穿越平台次数,评估学习记忆能力;处死后,取脑组织称重计算脑体比,取海马组织采用酶联免疫吸附法测定m^(6)A甲基化水平,免疫印迹法测定YTHDF1蛋白相对表达量。结果染毒期间无大鼠死亡。染毒结束后,对照组和低、中、高剂量组大鼠脑体比分别为(0.46±0.06)%、(0.44±0.04)%、(0.49±0.06)%和(0.51±0.07)%,差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠逃避潜伏期的时间与组间不存在交互作用(P>0.05),大鼠逃避潜伏期随训练时间增加而缩短(P<0.05);与对照组、低剂量组比较,高剂量组第3~5天大鼠逃避潜伏期延长(均P<0.05)。与对照组比较,低、中、高剂量组大鼠目标象限停留时间缩短,高剂量组大鼠穿越平台次数减少(均P<0.05)。与对照组比较,中、高剂量组大鼠海马组织m^(6)A甲基化水平升高,YTHDF1蛋白相对表达量降低(均P<0.05)。结论亚慢性铝暴露可能通过升高m^(6)A甲基化水平、抑制YTHDF1蛋白表达导致学习记忆能力损害。

乳腺癌组织中YTHDF1、USP28的表达及临床意义

目的探讨乳腺癌组织中YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)、泛素特异性蛋白酶28(USP28)的表达及意义。方法选取乳腺癌患者103例,应用实时荧光定量PCR法及免疫组化法检测癌组织和癌旁正常组织中YTHDF1、USP28 mRNA和蛋白表达。Spearman秩相关分析法分析YTHDF1、USP28蛋白表达的相关性。比较不同临床病理特征患者癌组织中YTHDF1、USP28蛋白阳性表达率差异。Kaplan-Meier生存分析(Log-Rank检验)法分析YTHDF1、USP28蛋白表达与患者临床预后的关系。单因素及多因素Cox回归分析影响乳腺癌患者临床预后的因素。结果乳腺癌组织中YTHDF1、USP28 mRNA及蛋白表达均高于癌旁正常组织(P均<0.05)。乳腺癌组织中YTHDF1蛋白表达与USP28蛋白表达呈正相关(r=0.613,P<0.05)。不同TNM分期、分化程度癌组织中YTHDF1、USP28蛋白阳性表达率比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。YTHDF1阳性表达及阴性表达者3年总体生存率分别为77.14%(54/70)、90.91%(30/33),差异有统计学意义(P<0.05)。USP28阳性表达及阴性表达者3年总体生存率分别为76.71%(56/73)、90.91%(28/30),差异有统计学意义(P<0.05)。YTHDF1阳性表达、USP28阳性表达、TNM分期Ⅲ期、低分化程度是影响乳腺癌患者临床预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论乳腺癌组织中YTHDF1、USP28表达升高,二者与TNM分期、分化程度有关,是影响乳腺癌患者临床预后的独立危险因素。

RNA修饰及其在肺癌发生发展中的作用和作用机制研究进展

RNA修饰是表观遗传修饰的一种,可通过降低mRNA的稳定性或表达,编码抑癌基因以降低其抑癌作用,并增强促癌转录体的稳定性和表达,在调节生物过程和肿瘤病理方面发挥重要作用。目前研究较多的RNA修饰包括N6-甲基腺苷(m6A)修饰、N1-甲基腺苷(m1A)修饰、5-甲基胞嘧啶(m5C)修饰、7-甲基鸟苷(m7G)修饰、假尿苷(psi)修饰、腺苷-肌苷转换(A-I)修饰和2′-O-甲基化(2′-O-Me)修饰等。RNA修饰可以通过METTL3、METTL14、METTL16等甲基转移酶,FTO、ALKBH5等去甲基化酶,YTHDF1、YTHDF2、YTHDF3等甲基结合蛋白,分别进行催化、擦除和识别,精确调控甲基化过程,在肿瘤细胞增殖、转移、侵袭、凋亡、自噬以及肿瘤耐药中发挥重要作用,参与肺癌的发生发展。

TRMT61A在肝癌细胞中的功能及其机制研究

目的·探究N1-甲基腺苷(N1-methyladenosine,m1A)甲基转移酶催化亚基(tRNA methyltransferase 61 Homolog A,TRMT61A)对肝癌细胞功能的影响及其潜在机制。方法·通过生物信息学软件分析TCGA数据库中TRMT61A在肝细胞肝癌患者样本中的表达情况并绘制相关生存曲线。通过CRISPR-Cas9技术构建稳定敲低TRMT61A表达的肝癌细胞系Huh7细胞和HepG2细胞,通过蛋白质印记法(Western blotting)检测对照组和敲低组细胞TRMT61A蛋白水平;通过斑点印迹实验检测2组细胞总RNA的m1A修饰水平。利用CCK-8法和平板克隆形成实验检测2组细胞增殖能力。使用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色和流式细胞术检测细胞周期;通过Western blotting检测细胞周期相关蛋白表达水平。使用Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况;通过Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果·经生物信息学软件分析,TCGA数据库中TRMT61A在肝癌患者癌组织中高表达,通过绘制生存曲线发现TRMT61A与肝癌患者的预后呈负相关。在肝癌细胞系Huh7和HepG2中稳定敲低TRMT61A后,细胞中TRMT61A蛋白水平下降,总RNA的m1A修饰水平下降。CCK-8实验结果显示在Huh7和HepG2细胞中稳定敲低TRMT61A后细胞增殖明显受到抑制;平板克隆实验结果显示在Huh7和HepG2细胞中稳定敲低TRMT61A后,克隆形成数目显著降低。TRMT61A敲低的Huh7和HepG2细胞出现G0/G1期细胞周期阻滞,细胞中P21蛋白水平显著上升,cyclin D1蛋白水平下降。此外,细胞凋亡检测结果显示敲低TRMT61A后Huh7和HepG2细胞凋亡率上升,而细胞剪切活化caspase3蛋白水平也明显上升。结论·敲低TRMT61A可抑制肝癌细胞增殖,并诱导其发生凋亡。

YTHDF1对HBV蛋白表达和HBsAg和HBeAg抗原分泌的作用

目的:探讨YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)对乙型肝炎病毒(HBV)蛋白表达和抗原分泌的影响。方法:分别以pCD3/Flag-KBE和pSilencer2.1-U6 neo为载体,构建过表达和敲降YTHDF1质粒。在Huh7细胞中过表达HBV蛋白质粒的同时表达pshR-YTHDF1和对照质粒,通过Western印迹检测YTHDF1对HBV蛋白表达的影响。在HepG2.2.15细胞中过表达和敲降YTHDF1,在Huh7细胞中同时过表达pHBV1.3质粒,通过ELISA检测YTHDF1对HBsAg、HBeAg抗原分泌的影响。结果:与正常肝细胞相比,YTHDF1在肝癌细胞Huh7(t=17.4)、HepG2.2.15细胞中(t=39.6)高表达。成功构建过表达和敲降YTHDF1质粒并验证其有效。敲降YTHDF1抑制HBV基因组编码的HBc蛋白(t=9.5)、HBs蛋白(t=5.2)、preS1蛋白(t=25.7)、preS2蛋白(t=9.0)、HBx蛋白(t=19.7)、HBV DNA Pol蛋白(t=23.0)表达,差异均有统计学意义(均P<0.05)。过表达YTHDF1促进HBsAg(Huh7细胞t_(48 h)=5.5,t_(72 h)=5.0;HepG2.2.15细胞t_(48 h)=5.3,t_(72 h)=27.4)、HBeAg抗原(Huh7细胞t_(48 h)=5.7,t_(72 h)=6.3;HepG2.2.15细胞t_(48 h)=29.0,t_(72 h)=6.6)的分泌,而敲降YTHDF1抑制HBsAg(Huh7细胞t_(48 h)=16.0,t_(72 h)=7.9;HepG2.2.15细胞t_(48 h)=22.3,t_(72 h)=7.0)、HBeAg抗原(Huh7细胞t_(48 h)=9.0,t_(72 h)=14.3;HepG2.2.15细胞t_(48 h)=8.1,t_(72 h)=6.6)的分泌(均P<0.05)。结论:YTHDF1可能具有增加HBV蛋白表达及促进HBsAg和HBeAg抗原分泌的作用。

YTHDF1对肺腺癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的研究YTH结构域N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)对肺腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法本研究为实验研究。选择2022年4月至12月期间于河北医科大学第一医院胸外科进行手术治疗的6例肺腺癌患者为研究对象,收集手术过程中切除的肺腺癌组织和癌旁正常肺组织。通过检索TCGA数据库和GEO数据库分析YTHDF1 mRNA在肺腺癌组织和正常肺组织中的表达水平,免疫组织化学染色对6例肺腺癌患者的肺腺癌组织及其配对的癌旁正常肺组织中YTHDF1的细胞定位进行检测。应用shRNA转染构建敲低YTHDF1的肺腺癌细胞株NCI-H1975,通过实时定量反转录PCR和蛋白质印迹法验证YTHDF1的敲低效率。采用CCK-8实验和Transwell迁移实验明确敲低YTHDF1对肺腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果TCGA数据库和GEO数据库提示YTHDF1 mRNA在肺腺癌组织中的表达水平均高于正常肺组织[(6.36±0.54)比(5.71±0.31)、(9.83±0.26)比(9.69±0.07)],差异均有统计学意义(均P<0.01),YTHDF1主要表达于细胞质。YTHDF1 mRNA、YTHDF1在敲低组的表达水平均低于对照组[(0.46±0.08)比(1.03±0.07)、(0.48±0.09)比(0.86±0.53)],差异均有统计学意义(均P<0.001),本研究成功构建了敲低YTHDF1的肺腺癌细胞株。CCK-8实验表明,培养48 h、72 h和96 h后,敲低组的增殖能力均低于对照组[(0.22±0.01)比(0.24±0.01)、(0.26±0.01)比(0.32±0.01)、(0.32±0.01)比(0.43±0.01),均P<0.05]。Transwell迁移实验表明,敲低组迁移的肺腺癌细胞数量低于对照组[(299.33±25.50)个比(504.67±36.12)个,P=0.001]。结论敲低YTHDF1可以抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移能力。