厌氧条件下土壤反硝化气体(N_2、N_2O、NO)和CO_2排放——氦环境培养—气体同步直接测定法的应用初探

反硝化过程是维系闭合氮循环所必需的氮素形态转化环节。土壤反硝化过程速率及产物比的直接测定是研究氮循环过程机理的基础,但却是一个难题。为解决此难题,德国卡尔斯鲁厄技术研究所与中国科学院大气物理研究所最近合作新建了一套通过氦环境培养—气体同步直接测定土壤反硝化气体——氮气(N2)、氧化亚氮(N2O)、一氧化氮(NO)和二氧化碳(CO2)排放的系统和与之配套的三阶段培养方法。为检验该新建系统和配套方法测定土壤反硝化过程的准确性和可靠性,以华北地区广泛分布的盐碱地农田土壤(采自山西运城)为研究对象开展实验室培养试验,在初始可溶性有机碳(DOC)供应比较充足约300mgCkg-1干土(d.s.)的条件下,测试了不同初始土壤硝态氮含量水平(10、100mgNkg-1d.s.左右,分别表示为10N和100N)的反硝化气体和CO2排放过程。结果显示:100N的反硝化速率(定义为N2、N2O和NO排放速率之和)显著高于10N处理(统计检验显著水平p<0.01);两个处理的反硝化产物均以N2为主(质量比分别占77%和75%),产物的NO/N2O摩尔比分别为1.2和1.5,N2O/N2摩尔比均为0.19;土壤反硝化气体动态排放速率及相关指标的测定结果表明,培养土壤中消失的硝态氮被回收81%～87%,培养前后的氮平衡率达92%～95%。因此,该新建方法测定土壤反硝化速率和产物比的结果具有很好的可靠性,为定量研究土壤反硝化过程提供了有效的直接测定手段。研究中检测到的土壤反硝化产物NO/N2O摩尔比大于1,不同于以往用液体培养基纯培养反硝化细菌得出的NO/N2O摩尔比远小于1的结论。这意味着,不能用NO/N2O摩尔比小于1与否来推断土壤排放的N2O和NO是主要来源于反硝化作用还是硝化作用。

液相色谱-三重四级杆质谱联用法检测人类辅助生殖技术用液中N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺含量

目的:建立采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液中N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺指标成分的方法,分析不同用途培养液中N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺的含量。方法:采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用法,使用SUPELCO Discovery HS F5-3色谱柱(150 mm×2.1 mm,3μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.35 mL·min^(-1),柱温40℃;质谱采用电喷雾离子源,负离子模式扫描,扫描方式为多反应监测。结果与结论:N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺在1.276~12.76μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好;平均加样回收率在100.5%~103.0%,相对标准偏差小于1.98%。说明采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液灵敏、快速、准确、专属性强,可为体外生殖培养液的质量标准研究提供依据。

模板法多孔炭的制备及CH_4/N_2/CO_2吸附分离

以糠醇为碳源,模板法两次浸渍制备多孔炭,采用XRD、SEM、FTIR、N_2吸附-脱附等方法对其进行表征,利用磁悬浮天平测量了CH_4,N_2,CO_2的吸附等温线,并对吸附等温数据进行Langmuir拟合,由Henry常数预测多孔炭对混合体系的平衡选择性。表征结果显示,多孔炭孔分布较窄,具有丰富的孔结构,在一定程度上复制了分子筛的孔道结构,且表面呈现一定的极性,有利于CH_4,N_2,CO_2的吸附和分离。实验结果表明,CH_4,N_2,CO_2的平衡吸附量大小的顺序为:CO_2>CH_4>N_2,Langmuir模型拟合相关系数均大于0.993,拟合效果较好,可用Langmuir理论解释气体在多孔炭孔结构及表面的吸附行为,制备的多孔炭适用于烟道气中CO_2的吸附与分离及煤层气等非常规天然气的提纯,但对垃圾填埋气的分离效果不显著。

玉米-小麦轮作系统中氮肥反硝化损失与N_2O排放量

应用乙炔抑制-原状土柱培养法研究了玉米-小麦轮作周年中氮肥的反硝化损失和N2O排放量。结果表明,氮肥产生的N2O为1.77～2.82kgN·hm-2,占施氮量的0.49%～0.76%;反硝化损失量为3～3.18kgN·hm-2,占施肥量的0.81%～0.86%。玉米与小麦生长期间的氮肥反硝化损失率很相近,分别为0.7%～0.99%和0.77%～0.88%。反硝化作用和N2O排放与土壤含水量密切相关,有机肥与氮肥混施增加N2O排放量。反硝化不是该旱作系统氮肥损失的主要途径,但施用氮肥大大增加了N2O的排放,对环境造成一定的影响。

天然污染兽医样品中沙门氏菌鉴定的快速培养法的评价

著者以传统方法和他们创造的快速培养法比较如下。1 传统方法 毙体组织先行选择性增菌。1份样品:10份亚硒酸盐胱氨酸肉汤,在37℃孵育48h后,以10μl铂环划线于2只煌绿琼脂平板上,在37℃孵育24h,挑不发酵乳糖的菌落经用血清学及生化试验证实的。2 环境来源

新生小鼠视神经少突胶质细胞系定向分化培养及鉴定

目的探索P2期小鼠视神经少突胶质细胞的分化规律。方法经颅开眶法获取P2期小鼠管内段视神经2mm,组织块法培养,振荡法分离纯化,化学限定性培养基定向分化培养纯化,免疫细胞化学方法鉴定,流式细胞仪检测纯度。结果混合胶质细胞原代培养7d时细胞分层,少突胶质细胞前体细胞(O-2A)分散于星形细胞层上,分离后的O2A祖细胞抗神经节苷脂GD3阳性;无血清甲状腺素限定性培养基定向培养2周后O-2A祖细胞分化为MBP阳性成熟的少突胶质细胞细胞。结论组织块法培养、振荡法分离纯化P2期小鼠视神经少突胶质细胞前体细胞,纯度高。O-2A祖细胞可分化为成熟少突胶质细胞。

NS-398对骨肉瘤细胞的作用及其对Survivin表达的影响

目的:观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对人骨肉瘤细胞系MG-63的凋亡的影响及其对survivin基因表达的影响。方法:体外培养骨肉瘤细胞系MG-63,应用MTT法研究不同浓度NS-398对骨肉瘤细胞系MG-63的凋亡诱导作用,流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡率的变化,RT-PCR法分析NS-398对骨肉瘤细胞系MG-63中sur-vivin基因表达的影响。结果:NS-398可诱导骨肉瘤细胞系MG-63发生凋亡,并具有剂量依赖性,在NS-398浓度为200μmol/L时,对细胞生长有明显的抑制作用。流式细胞仪检测显示NS-398引起MG-63细胞凋亡率增加。RT-PCR分析显示经NS-398作用后的骨肉瘤细胞系MG-63表达survivin较用药前明显下降。结论:NS-398对骨肉瘤细胞系MG-63有杀伤作用,其作用可能通过抑制survivin的表达,促进肿瘤细胞的凋亡而实现。

检测食品中沙门氏菌的快速方法

目前检测食品中沙门氏菌的标准培养方法是费时的,至少需要3—4天才能获得推测性结果,还需要2—3天以生化试验确诊。因此在食品制造及完成细菌学测试之间有明显延误。甚至一些情况下筛选沙门氏菌只不过是回顾性的。澳大利亚N.H.M.R.C食品微生物学委员会其任务是提出微生物学标准,既考虑对公共卫生的威胁。

BRL-CM小鼠胚胎干细胞及体外诱导的研究

目的 探讨以Buffalo大鼠肝细胞培养上清 (BRL -CM )替代含LIF培养液体外培养小鼠胚胎干细胞(ESC)的可行性 ;无血清体外诱导ESC为神经前体细胞 (NPC)。方法 以BRL -CM维持ESC生长并抑制其分化 ,用含LIF的培养液作为对照 ,硝基四氮唑蓝 /5-溴 -4氯 -3 -吲哚基磷酸 (NBT/BCIP)显色检测碱性磷酸酶。采用N2选择性无血清培养法获取NPC ,免疫组化法检测巢蛋白 (Nestin)鉴定。结果 BRL -CM与含LIP的培养液一样能维持ESC未分化状态 ,无血清培养基诱导ESC后获得细胞的 86%为NPC。结论 BRL -CM可替代LIF用于ESC培养 ,且经济、简便。采用N2 选择性培养基可获得较高纯度的NPC。

多种肿瘤干细胞标志物在食管鳞癌 Eca109细胞球细胞中的表达

目的观察肿瘤干细胞标志物P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog在食管鳞癌Eca109细胞系富集的细胞球细胞中的表达。探讨食管鳞癌的肿瘤干细胞标记物。方法采用无血清成球培养法,富集培养细胞球细胞,观察其增殖过程。培养5d获得小细胞球继续培养至14d获得又大又圆的悬浮生长的细胞球,收集第14天的细胞球,一部分用于实验,一部分予以传代。应用免疫荧光技术检测细胞球细胞中P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog的表达和定位。结果 P75NTR、Oct-4荧光定位于细胞球细胞的细胞核上,贴壁的Eca109为细胞核和细胞质表达,但是Oct-4荧光强度比P75NTR弱;Lin28在细胞球细胞上为细胞核表达,贴壁的Eca109上为细胞核和细胞质表达;Nanog和Sox-2在食管鳞癌Eca109细胞球细胞和贴壁的Eca109上均为细胞质表达。结论 P75NTR、Oct-4、Lin28核表达阳性的细胞球可能为食管癌干细胞。

用毛细管PCR检测粪样中的FPLV和CPV

本文报道了一种可以检测和鉴别粪样中犬细小病毒(CPV)和猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)的毛细管PCR。PCR引物对可以选择性地检测两种病毒保守区VP1/VP2基因的核苷序列。其依据是FPLV和CPV衣壳蛋白基因的核苷序列不同。PCR法的敏感性比培养法和HA法高10~2—10~4倍。

山梨酸对C2C12细胞增殖、IGF-1分泌以及相关基因表达的影响

山梨酸是一种含共轭不饱和键的直链脂肪酸。本实验室的前期研究表明,山梨酸能够提高断奶仔猪的生长性能以及血液中类胰岛素生长因子-1(IGF-1)的含量。为进一步揭示山梨酸的促生长机制,本试验选用小鼠骨骼肌成肌细胞(C2C12)为研究对象,通过培养基中添加不同浓度的山梨酸(0、0.1、1、10和100μM)处理C2C12细胞,采用MTT法检测细胞增殖。