药根碱促进N2aAPP细胞线粒体自噬的初步证据

目的探讨药根碱作用于AD细胞模型后,其线粒体自噬的超微结构变化。方法以N2a细胞作为对照组,N2aAPP细胞作为实验组,采用不同浓度的(5μmol/L和10μmol/L)药根碱分别作用于N2aAPP细胞和N2a细胞,24 h后收集细胞,进行活性氧检测和透射电镜观察。结果 N2aAPP组活性氧量最高,多于N2a组,差异有统计学意义(P<0.01);加药根碱处理24 h后,N2aAPP+5μmol/L JAT组和N2aAPP+10μmol/L JAT组活性氧均有减少,与N2aAPP组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组N2a细胞组相比,N2aAPP细胞线粒体自噬的溶酶体与自噬小体较少,与N2aAPP细胞组相比,N2aAPP+5μmol/L JAT组和N2aAPP+10μmol/L JAT组的自噬溶酶体和自噬小体数量则相对增多。结论药根碱可能促进N2aAPP细胞的自噬溶酶体和自噬小体的增加,以促进线粒体自噬的降解。

HuD在N2aAPP细胞和APP/PS1转基因小鼠中的表达

目的研究RNA结合蛋白HuD在AD细胞和动物模型中的表达水平,探讨HuD与AD的关系;明确PI3K/AKT通路对神经细胞HuD表达的调控作用。方法免疫荧光检测HuD在C57BL/6小鼠脑组织中的表达水平;构建过表达APP的N2a APP细胞模型,Western blot检测HuD的表达情况;购买APP/PS1转基因小鼠,Western blot检测HuD在脑组织中的表达情况;应用LY294002处理3种神经细胞(N2a、SH-SY5Y和HT22),阻断PI3K/AKT通路,观察该通路对HuD的调控作用。结果 HuD在整个C57BL/6小鼠脑组织中均有表达,且在海马体的颗粒细胞尤为明显;在N2a APP细胞,HuD的表达水平明显低于对照组;APP/PS1转基因小鼠脑组织中的HuD水平也低于野生对照鼠;LY294002处理下调了HuD在神经细胞中的表达水平。结论 HuD在N2a APP细胞和APP/PS1转基因小鼠中均呈低表达;HuD在神经细胞中受PI3K/AKT通路的调控,为研究HuD与AD的关系及寻找新的AD诊断和治疗靶点提供了理论基础。