N_3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶(TFU)对人肝癌细胞生长抑制作用及代谢检测

目的:考察TFU通过缓慢释放5-FU抑制人肝癌细胞生长,分析TFU代谢转化特点。方法:以96孔板接种人肝癌细胞SMMC-7721,加入不同剂量TFU,每隔24 h取培养板,取细胞培养液,以HPLC法检测TFU和5-FU水平,并以MTT法测肿瘤细胞生存率。培养板加入肝微粒体酶,重复上述检测HPLC方法和MTT实验,比较加入肝微粒体酶前后培养液中TFU和5-FU水平,分析TFU通过缓慢释放5-FU抑制人肝癌细胞生长。结果:TFU对人肝癌细胞SMMC-7721抑制作用弱,加入肝微粒体酶后抑制作用增强。HPLC检测上清液中 TFU和 5-FU水平发现,TFU可能通过肝微粒体酶的介导作用,缓慢释放出 5-FU并维持较长时间药物水平,这种代谢释放特点与TFU对肿瘤细胞生长抑制率有密切相关性。结论:TFU可能在肝微粒体酶介导下,通过缓慢水解方式释放出5-FU,维持对肝癌细胞较长时间的抑制生长作用。

N_3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶通过凋亡作用抑制人胃癌细胞生长

目的N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶(N3-O-toluyl-flu-orouracil,TFU)是N1-乙酰基-N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶的降解产物和5-氟脲嘧啶(5-FU)前体物,本研究观察TFU体内外对人胃癌细胞生长抑制活性及作用特点。方法体外实验,以MTT法测定TFU对人胃癌细胞SGC-7901和MKN-45生长抑制作用,并与肝微粒体酶存在条件下的结果比较。在肝微粒体酶存在时,将人胃癌细胞与低剂量TFU孵育10h,以吖啶橙/溴乙锭染色(AO/EB)观察肿瘤细胞形态;分别以琼脂糖凝胶电泳法和流式细胞仪分析肿瘤细胞DNA断裂特点;Western blot法检测肿瘤细胞Bcl-2和Bax蛋白表达。体内实验,以裸鼠移植人胃癌细胞并灌胃给药观察TFU对肿瘤细胞生长抑制作用。取肿瘤组织切片,以TUNEL(ter-minal deoxynucleoid transferase nick-end labeling)染色法,观察肿瘤细胞核染色比例,计算凋亡率。结果TFU对胃癌细胞生长抑制作用较弱,而在肝微粒体酶存在时能够明显提高TFU对胃癌细胞生长的抑制率。TFU对裸鼠移植人胃癌细胞生长抑制作用较强,对动物体重抑制作用弱。进一步实验,在肝微粒体酶存在下,低剂量TFU能够诱导肿瘤细胞凋亡。吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色后,胃癌细胞呈现剂量依赖性凋亡形态改变。细胞染色体DNA断裂呈现Ladder现象和亚二倍体(sub-G1)凋亡峰。TFU上调胃癌细胞Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白水平。TUNEL法检测裸鼠移植人胃癌细胞凋亡,TFU能够提高胃癌细胞核TUNEL染色水平。结论TFU对人胃癌细胞生长具有抑制作用,该作用可能与肝微粒体酶缓慢水解释放出低水平5-FU有关,低水平5-FU可能通过调节Bcl-2和Bax表达活性诱导胃癌细胞凋亡。

N_3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶(TFU)对小鼠移植性肿瘤生长抑制作用及代谢检测

目的：N3-邻甲苯甲酰基-氟尿嘧啶（N3-o-toluyl-fluorouracil,TFU）是N1-乙酰基、N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶（ATFU,阿托氟啶）降解的次级化合物和5-氟脲嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）的前体化合物。本研究观察了TFU对S180小鼠肉瘤的生长抑制作用,利用高效液相色谱（HPLC）法对TFU的代谢进行了检测。方法：以昆明系小鼠腋部皮下接种S180小鼠肉瘤细胞株,接种后的小鼠以不同剂量TFU每天灌胃,连续10~14d。末次给药48h后,处死动物,用本研究所建立的HPLC方法对TFU的代谢进行了检测,测定了血浆和不同组织（肝、肺、瘤）中TFU和5-FU的浓度。结果：分别以50,100和200mg.kg-1剂量的TFU,对小鼠连续灌胃10~14d后,TFU对S180小鼠肉瘤的抑制作用分别达到38.99%,51.83%和60.68%,肿瘤细胞生长表现为剂量依赖性。HPLC法检测结果显示,末次给药48h后,在肝中仍可检测到较高浓度的5-FU,这说明TFU主要蓄积在肝中,在酶的作用下缓慢代谢。其次分布在瘤组织中,在肺组织和血浆中的浓度最低。结果显示TFU的代谢产物可以优先作用于肿瘤细胞,其代谢产物5-FU的分布特点也说明了TFU较高的抗肿瘤活性和较低的机体损害。结论：研究结果显示TFU是5-FU前体药物中具有进一步研究价值的抗癌药物。

托氟啶脂质体的研究

目的研究托氟啶脂质体的制备方法并考察其在小鼠体内的生物利用度。方法采用薄膜分散-乳匀法制备托氟啶脂质体,用均匀设计法优化托氟啶脂质体的处方和制备工艺;考察脂质体形态、粒径、粒径分布、Zeta电位、包封率、稳定性及体外释药等特性,对脂质体进行质量评价。将托氟啶脂质体分别进行小鼠灌胃和静脉注射给药,眼底静脉丛取血,HPLC测定血药浓度,用DAS(1.0)软件计算药动学参数。结果所制得的脂质体形态圆整,大小均匀;平均粒径400 nm,多分散性指数0.448,Zeta电位-6.4 mV,平均包封率86.9%;脂质体的体外释药符合双相动力学数学模型。小鼠口服脂质体相对于口服托氟啶(TFu)混悬液的生物利用度为199%,小鼠静脉注射脂质体相对于注射TFu溶液的生物利用度为115%。结论采用薄膜分散-乳匀法制备TFu脂质体,工艺简单,包封率较高,且稳定性良好;托氟啶脂质体经小鼠口服给药提高了药物的生物利用度,注射脂质体与注射TFu乙醇-水溶液生物等效。

壳聚糖修饰托氟啶纳米脂质体的体外释放试验研究

目的对壳聚糖修饰的托氟啶纳米脂质体的体外释放行为进行研究。方法以托氟啶溶液为对照,采用动态膜透析法考察壳聚糖修饰托氟啶纳米脂质体(TFu-SLNs)在磷酸盐缓冲液(pH=7.4)、人工胃液(pH=1.2)、肠液(pH=6.8)以及人工胃液转肠液中的体外释药情况并测定其方法回收率。结果托氟啶溶液在磷酸缓冲液、人工胃液、人工肠液释放均符合一级速率方程,方程分别为A=37602C+160.48(r=0.9999)、A=39488C+1915.3(r=0.9998)、A=38790C-194.11(r=0.9993)。在人工胃液中壳聚糖修饰TFu-SLNs符合Ritger-Peppas方程,lnQ=0.3984lnt+3.1352(r=0.9796);在人工肠液及人工胃液转肠液中中壳聚糖修饰TFu-SLNs均符合Weibull方程,方程分别为lnQ=0.3852lnt-1.32586(r=0.9645)、lnQ=0.4126lnt-1.2702(r=0.9746)。结论壳聚糖修饰的TFu-SLNs可缓慢释放药物,且其释放药物的机制以药物扩散为主。