黑色素瘤B16细胞通过释放外泌体诱导naïve CD4^(+) T细胞分化为Treg

目的检测小鼠黑色素瘤细胞B16通过释放外泌体诱导naïve CD4^(+)T细胞分化为调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的能力。方法通过试剂盒和超速离心获得B16培养上清中的外泌体,用透射电镜观察外泌体形态,Western blot检测外泌体标记性蛋白的表达水平,通过Transwell共培养验证外泌体或B16细胞对naïve CD4^(+)T细胞诱导分化的能力,流式细胞术检测小鼠脾脏、肿瘤内Th17、Treg细胞的频率,qPCR检测T细胞亚群特异性转录因子、炎症因子的mRNA水平。结果B16细胞外泌体的直径为30~100 nm,呈圆形碟状结构,外泌体高表达Tsg101、HSP60和Alix,低表达GAPDH;在体外,B16细胞外泌体可直接诱导naïve CD4^(+)T细胞分化成Treg,但不能诱导其分化为Th17;小鼠在体实验证实,B16细胞外泌体能够诱导Treg细胞并聚集于小鼠脾脏中,同时能够增加B16瘤体内Treg细胞的数量,并活化使其表达更高水平的IL-10、TGF-β和Foxp3。结论B16细胞外泌体通过诱导naïve CD4^(+)T细胞分化为Treg,并将其募集至肿瘤组织,从而维持肿瘤的免疫抑制微环境。

丹参酮ⅡA抑制人肝癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的 研究丹参酮ⅡA对人肝癌细胞系BEL 740 2的生长抑制及凋亡诱导作用。方法 0～ 10 μg/ml丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞 72h后 ,用MTT比色法观察其细胞毒性 ,荧光显微镜、透射电镜检测细胞凋亡 ;流式细胞术 (Flowcy tometry ,FCM )定量检测 5 μg/ml丹参酮作用不同时间后的细胞凋亡率。 结果 丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制肝癌细胞的生长 ,其IC50 值为 6.2 8μg/ml。 1～ 10 μg/ml丹参酮ⅡA作用 72h后 ,肝癌细胞表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂、细胞出芽以及凋亡小体形成等凋亡特征性的形态学改变。流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰 ,5 μg/ml浓度作用12、2 4、3 6、48、72h后的细胞凋亡率分别为 ( 2 .3 2± 0 .16) %、( 3 .0 1± 0 .3 5 ) %、( 3 .87± 0 .43 ) %、( 6.73± 0 .5 8) %和 ( 2 0 .85±1 74) % ,与对照组 ( 1.0 7± 0 .13 ) %比较均有显著性差异。结论 在体外丹参酮ⅡA能诱导人肝癌细胞系BEL 740 2凋亡 。

肾上腺髓质微血管构筑

本文以树脂铸型扫描电镜法,观察大鼠和小鼠肾上腺髓质的微血管构筑,并特别注意髓质血管和皮质血管的相互关系;此外切片观察测量了肾上腺髓质两种嗜铬细胞的分布。肾上腺皮质集合小静脉发出侧支,分布于髓质,构成了门静脉循环特点。小鼠的肾上腺髓质,主要由这种侧支供应;而大鼠的髓质,还有多支髓质动脉供应。从血管铸型上表现出的明显局部环形缩窄推测,肾上腺髓质血液循环有若干括约装置控制。大、小鼠两种嗜铬细胞在肾上腺髓质内的分布不同,大鼠的呈随机分布;小鼠的NA细胞多靠近皮质,而A细胞多远离皮质。

Roles of NHE-1 in the proliferation and apoptosis of pulmonary artery smooth muscle cells in rats

Objective To evaluate the roles of Na +/H + exchanger-1 (NHE-1)in the proliferation and apoptosis of pulmonary artery smooth muscle cells in rats. Methods Twenty Wistar rats were randomized into control group and 3-week hypoxic group. Intracellular pH (pHi) of the smooth muscle was determined with fluorescence measurement of the pH-sensitive dye BCECF-AM, and the expression of NHE-1 mRNA was detected by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Primary culture of pulmonary artery smooth muscle cells in vitro was performed. In situ cell death detection kit (TUNEL) was used for studying the effect of specific NHE-1 inhibitor-dimethyl amiloride (DMA) on the apoptosis of muscle cells which had intracellular acidification. Results pHi value and NHE-1 mRNA expression of pulmonary artery smooth muscle cells were significantly higher in the hypoxic group than in the control group (P【0.01, P【0.001). DMA elevated the apoptotic ratio remarkably. The effect was enhanced when DMA concentration increased and the time prolonged.Conclusions With the function of adjusting pHi, NHE-1 may play an important role in the proliferation and apoptosis of pulmonary artery smooth muscle cells.

全氟辛烷磺酸盐通过线粒体途径诱导N9细胞凋亡

目的以小胶质细胞株(N9)作为靶细胞,观察全氟辛烷磺酸盐(PFOS)通过线粒体途径诱发N9细胞凋亡效应。方法设定5、10、50、100、200μmol/L PFOS染毒组及对照组。PFOS染毒24 h后流式细胞术分析凋亡细胞率,罗丹明123检测线粒体膜电位,荧光定量PCR检测染毒24 h后凋亡相关基因p53、Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9表达。结果与对照组(2.24%)比较,50、100、200μmol/L PFOS组细胞凋亡率(分别为20.81%、33.26%、48.72%)均增加(P<0.05);PFOS染毒降低了线粒体膜电位,200μmol/L组细胞出现明显核周小斑点状荧光;此外,随剂量增加,PFOS染毒组p53、Bax、caspase-3和caspase-9基因表达水平呈上升趋势,Bcl-2表达水平呈下降趋势,但未见浓度依赖性。结论 PFOS暴露可破坏神经小胶质细胞自稳态,破坏线粒体,影响凋亡相关基因表达,诱导神经细胞凋亡。

有家族史的高血压病人细胞膜离子转运改变及其意义

据《中华内科杂志》1999年10月38卷第10期报道 第三军医大学大坪医院心内科谭建聪等。