沉默NAC-1基因对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤化疗敏感的影响

目的:探讨核转录因子NAC-1基因沉默对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤化疗敏感性的影响。方法:采用LV4-LUC-GFP慢病毒转染建立NAC-1基因沉默SKOV3/DDP细胞株,将细胞接种到免疫缺陷小鼠皮下,建立人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤模型,给予顺铂化疗,比较NAC-1基因沉默对SKOV3/DDP在裸鼠体内增殖的影响。取肿瘤组织进行转录组测序,利用Illumina平台进行转录组mRNA测序,筛选差异表达基因,并进行GO和KEGG功能注释和富集分析,揭示NAC-1基因影响移植瘤化疗敏感的可能分子机制。使用STRING数据库构建DEGs编码蛋白互作网络,筛选MCC算法、Degree算法、Closeness算法3种算法共有基因作为关键基因,使用Metascape网站在线分析这些共同基因的基因功能。结果:与对照组相比,抑制NAC-1基因后裸鼠皮下肿瘤体积变小,重量减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。转录组学分析显示,抑制NAC-1基因导致肿瘤组织中460个基因显著下调,568个基因显著上调。差异基因(DEGs)在多项GO富集类别中具有显著差异,如细胞代谢、有丝分裂、坏死、炎症、信号传递等。KEGG功能富集结果显示,NAC-1基因沉默可能影响了细胞因子-细胞因子受体相互作用、白细胞跨内皮迁移、神经活性配体-受体相互作用、细胞黏附分子、坏死、ECM受体相互作用、PI3K-Akt信号通路、NF-κB信号通路等。筛选获得的关键基因主要富集在白细胞介素的信号传导、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)通路、炎症反应等通路。结论:抑制NAC-1基因能提高人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP化疗敏感性,其可能通过多个信号通路影响肿瘤细胞的代谢、增殖、死亡、炎症反应等。

缺磷胁迫下番茄侧根形成与miR164及NAC1表达的关系

为了研究番茄幼苗在缺磷胁迫下根系形态发育与生长素、生长素信号转导途径中的转录因子NAC1,以及调控NAC1表达的上游miR164之间的关系。试验以5和500μmol/L磷浓度作为缺磷胁迫和对照,检测了外源生长素NAA(1-naphthalene acetic acid)及生长素抑制剂NPA(N-1-naphthylphthalamic acid)对侧根形成的影响;同时采用RT-PCR检测了NAC1和miR164在缺磷胁迫下的时序表达。结果表明,缺磷胁迫下侧根大量形成与生长素及其运输密切相关,在侧根迅速形成的24 h内,NAC1的表达在缺磷胁迫下增强;而其上游的miR164表达降低,从而揭示了缺磷胁迫下侧根形成与miR164调节NAC1表达之间的关系。

生物胁迫相关NAC1转录因子的生物信息学分析

植物NAC1转录因子在调控植物的抗生物胁迫反应中起着重要的作用。为探究生物逆境相关NAC1转录因子的功能,通过生物信息学的方法对8个生物逆境胁迫相关NAC1蛋白氨基酸序列一致性、氨基酸组成、理化性质、亲/疏水性、保守结构域、磷酸化位点、亚细胞定位、二级结构及三级结构等进行了预测和分析。结果表明,8个生物逆境胁迫相关NAC1蛋白N-端保守性较强,包括5个保守的亚结构域,共同组成NAC1结构域。C-端含有多个保守的氨基酸,具有转录激活功能。同时蛋白中含有多个丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和酪氨酸(Y)磷酸化位点。8个NAC1蛋白都为亲水性蛋白,大多定位于细胞核,个别定位于细胞质或叶绿体。二级结构则以α-螺旋和β-折叠为主。8个NAC1蛋白三维结构上的相似性暗示了功能上存在相似。本研究结果为进一步挖掘生物逆境相关NAC1转录因子的功能和改良植物抗生物逆境特性提供理论依据。

Nac-1在神经干/祖细胞自我更新维持中的作用

目的研究Nac-1在神经干/祖细胞(NSPCs)自我更新维持中的作用及其机制。方法以胚胎干细胞(ESCs)来源的NSPCs为细胞模型,利用RNA干扰法敲低Nac-1表达并通过定量RT-PCR和Western blot检测干扰效率;通过细胞计数和流式细胞技术,检测NSPCs的增殖和凋亡情况;并利用荧光素酶等实验检测Nac-1对c-Myc的转录调控作用。结果 Nac-1在NSPCs中高表达,分化后其mRNA水平下降了77%。与对照组相比,实验组(干扰组)NSPCs中Nac-1的mRNA水平显著下降,干扰效率分别是69%和66%。Nac-1敲低组的NSPCs增殖缓慢,凋亡增多,趋向于分化,c-Myc的mRNA水平降低46%和57%。荧光素酶分析显示,Nac-1敲低组中,c-Myc启动子的活性下降了24%和36%,提示Nac-1可以调节c-Myc基因的启动子活性。结论Nac-1促进NSPCs增殖并抑制其分化,是NSPCs自我更新维持所必需;Nac-1促自我更新的作用可能通过调控c-Myc的转录而实现。

NAC1、FOXQ1在不同级别卵巢浆液性癌组织中表达及其临床意义

目的通过检测伏隔核相关因子1(NAC1)、FOXQ1在卵巢浆液性癌中的表达情况,探讨NAC1、FOXQ1在卵巢浆液性癌发生、发展及侵袭中的可能作用和临床意义。方法选取卵巢浆液性癌标本80例,其中低级别浆液癌36例,高级别浆液性癌44例。选取同期卵巢肿瘤40例患者,其中20例为卵巢浆液性囊腺瘤,20例为卵巢交界性浆液性囊腺瘤;另取正常卵巢组织标本20例进行对照。采用免疫组化法检测NAC1、FOXQ1各组织中的表达情况,并分析其与病理分期、淋巴结转移及其患者预后生存率的关系。结果 NAC1在浆液性囊腺瘤、正常组织中无表达,在交界性囊腺瘤呈弱阳性,在低、高级别卵巢浆液性癌组织中表达率分别为44.4%、59.1%,差异有统计学意义(P<0.05);FOXQ1在恶性卵巢肿瘤、交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤、正常卵巢组织中均有表达,FOXQ1在高级别浆液性卵巢癌、低级别浆液性卵巢癌、交界性囊腺瘤、浆液性囊腺瘤、正常卵巢组织中的阳性表达分别呈逐渐降低趋势(P<0.05);NAC1、FOXQ1在高级别浆液性癌组织中不同病理分期阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),随病理分期增加阳性表达呈递增趋势;NAC1、FOXQ1在高级别浆液性癌阳性表达淋巴结转移情况大于低级别,差异有统计学意义(P<0.05);高级别卵巢浆液性癌中NAC1、FOXQ1阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05),而5年生存率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NAC1、FOXQ1在卵巢高级别浆液性癌中阳性表达最强,二者可能参与了卵巢高级别浆液性腺癌的发病过程,NAC1、FOXQ1过表达与高级别卵巢浆液性癌患者的生存率有关,可作为一个独立的卵巢癌不良预后指标。

人干细胞转录因子Nanog和BTB/POZ家族蛋白NAC1的相互作用

目的:研究人干细胞转录因子Nanog和BTB/POZ家族蛋白NAC1的相互作用,并初步确定作用区域。方法:应用免疫共沉淀、GSTpull-down实验验证人Nanog与NAC1的相互作用。结果:人Nanog与NAC1能够相互作用,且NAC1的BTB/POZ结构域对于二者相互作用是必需的。结论:人Nanog和NAC1在体内、外均能形成复合物,二者的相互作用对于人胚胎干细胞的自我更新及肿瘤的发生可能具有重要的作用。

缺氧复氧后肾小管上皮细胞ICAM-1的表达及NAC对其干预研究

目的研究缺氧复氧后肾小管上皮细胞ICAM-1的表达及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其影响。方法选用人肾小管上皮细胞(HK2)建立缺氧复氧损伤模型,设正常对照组、单纯缺氧复氧组、不同浓度(1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L)NAC干预组。流式细胞术检测细胞内氧化应激水平,流式细胞术检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达、RT-PCR法测定细胞ICAM-1 mRNA表达。结果缺氧复氧后HK2细胞内氧化应激水平提高,细胞ICAM-1蛋白和mRNA表达上调,且随缺氧时间的延长,细胞内氧化应激水平逐渐升高,ICAM-1蛋白和mRNA表达逐渐增强;NAC呈剂量关系抑制细胞内氧化应激水平,同时呈剂量关系抑制ICAM-1蛋白和mRNA表达的上调。结论缺氧复氧诱导细胞内氧化应激的产生,诱导ICAM-1表达上调;NAC可以通过抑制细胞内氧化应激抑制ICAM-1的上调。

卵巢浆液性肿瘤组织中SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达及意义

目的探讨卵巢浆液性肿瘤组织中SIRT1、NAC1、Rap1蛋白的表达及其临床意义。方法选取卵巢浆液性肿瘤患者的肿瘤组织标本100份,选取同期收治的卵巢良性肿瘤患者的肿瘤组织标本100份作为对照。采用SP法检测2组肿瘤组织中SIRT1、NAC1、Rap1蛋白的阳性表达情况,并比较差异。分析卵巢浆液性肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达与临床病理特征的关系。结果卵巢浆液性肿瘤组织中SIRT1、NAC1、Rap1蛋白阳性表达率分别为65.00%、60.00%、55.00%,高于卵巢良性肿瘤组织的6.00%、20.00%、8.00%(P<0.05)。Ⅲ+Ⅳ期、中低分化、有淋巴结转移的患者肿瘤组织中SIRT1、NAC1、Rap1蛋白阳性表达率较高(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,临床分期是卵巢浆液性肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白阳性表达的独立影响因素。结论卵巢浆液性肿瘤组织中SIRT1、NAC1、Rap1蛋白存在过表达,且与临床分期密切相关,其可能参与卵巢浆液性肿瘤的进展。

NAC-1通过自噬介导卵巢癌细胞顺铂耐药的研究

目的:探讨NAC-1在自噬介导的卵巢癌细胞顺铂耐药中的作用。方法:Western blot及流式细胞术检测顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞(SKOV3/DDP)自噬及凋亡过程中,NAC-1蛋白的表达情况。采用siRNA下调NAC-1表达,检测其对SKOV3/DDP细胞自噬及凋亡的影响,并检测其对顺铂耐药性的影响。结果:顺铂处理SKOV3/DDP细胞后,细胞自噬及凋亡水平升高,NAC-1蛋白表达升高。siRNA下调NAC-1基因后,顺铂处理SKOV3/DDP细胞的自噬水平降低,凋亡升高,细胞顺铂耐药性降低。结论:NAC-1基因可能通过调节自噬参与卵巢癌细胞顺铂耐药,降低NAC-1基因表达有助于提高顺铂对卵巢癌细胞的杀伤作用。

大鼠脑出血周边组织ICAM-1的表达及NAC的干预作用

目的:研究大鼠脑出血周边组织细胞凋亡及ICAM-1(细胞粘附因子-1)的表达机制,探讨NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸)抗细胞凋亡作用和对ICAM-1表达的干预机制。方法:W istar大鼠105只,随机分为对照组,脑出血组,脑出血+NAC组,各分为出血6h,12h,24h,48h,3d,5d,7d七个时间点。采用立体定位注入自体未肝素化动脉血复制脑出血模型。采用免疫组化染色法检测脑组织ICAM-1的表达;利用原位末端标记法检测出血周边组织神经细胞的凋亡。结果:①脑出血后12h ICAM-1开始表达,72h达高峰。各组与对照组之间有显著差异(均P<0.05)。②大鼠脑出血周边组织6h出现凋亡细胞,12h上升显著,3d凋亡细胞达峰值,7d仍有凋亡细胞表达。③NAC干预后周边组织ICAM-1表达阳性细胞数及凋亡细胞数与脑出血组对应时间点比较显著下降(P<0.05)。结论:①细胞因子ICAM-1参与了脑出血周边组织炎性反应损伤。②脑出血周边组织存在着细胞凋亡病理生理过程。③NAC可抑制细胞因子ICAM-1表达,同时具有抗细胞凋亡作用,可改善脑出血预后。

大鼠脑出血周边组织TNF-α、ICAM-1的表达及NAC对其变化的影响

目的:研究大鼠脑出血周边组织细胞凋亡及TNF-α、ICAM-1(细胞粘附因子-1)的表达机制,探讨NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸)抗细胞凋亡作用和对TNF-α、ICAM-1表达的干预机制。方法:W istar大鼠105只,随机分为对照组,脑出血组,脑出血+NAC组,各分为(出血6h,12h,24h,48h,3d,5d,7d)七个时间点。采用立体定位注入自体未肝素化动脉血复制脑出血模型。采用免疫组化染色法检测脑组织ICAM-1的表达;利用原位末端标记法检测出血周边组织神经细胞的凋亡。结果:①脑出血后6h血肿周边组织TNF-α开始表达,48h达高峰,12h ICAM-1开始表达,72h达高峰。各组与对照组之间有显著差异(均P<0.05)。②大鼠脑出血周边组织6h出现凋亡细胞,12h上升显著,3d凋亡细胞达峰值,7d仍有凋亡细胞表达。③NAC干预后周边组织TNF-α、ICAM-1表达阳性细胞数及凋亡细胞数与脑出血组对应时间点比较显著下降(P<0.05)。结论:①细胞因子TNF-α、ICAM-1参与了脑出血周边组织炎性反应损伤。②脑出血周边组织存在着细胞凋亡病理生理过程。③NAC可抑制细胞因子TNF-α、ICAM-1表达,同时具有抗细胞凋亡作用,可改善脑出血预后。

NaC1胁迫对甜瓜幼苗相关生理指标的影响

以NaC1作为盐胁迫处理,采用水培方式,研究盐胁迫对甜瓜幼苗生长和相关生理特性的影响。本试验处理分别为T1表示对照,T2表示NaC1胁迫处理浓度为50 mmol/L、T3表示NaC1胁迫处理浓度为100 mmol/L、T4表示NaC1胁迫处理浓度为150 mmol/L、T5表示NaC1胁迫处理浓度为200 mmol/L,分析NaC1胁迫对甜瓜幼苗生长、光合速率及抗氧化酶活性等相关生理生化指标的影响。结果显示:随着NaC1胁迫浓度的增加,抑制了甜瓜幼苗的生长;降低了光合色素含量和叶片光合速率;SOD活性、CAT活性、脯氨酸含量、GSH含量和GSH/GSSG比值呈现先增加后降低的趋势,但是POD活性、H2O2含量、GSSG含量和GSH+GSSG含量呈现逐渐增加的趋势。结果表明,在NaC1胁迫下,甜瓜幼苗通过调节自身的反应缓解NaC1胁迫的危害,但随着盐胁迫浓度的增加,甜瓜幼苗产生了不可逆的伤害。

大鼠随意型皮瓣中TNF-α和ICAM-1的表达及NAC的保护作用

目的 :检测大鼠随意型皮瓣组织中TNF α(肿瘤坏死因子 )和ICAM 1(细胞间粘附分子 1)的表达变化 ,并观察抗氧化剂N 乙酰半胱氨酸 (N acetylcysteine,NAC)对任意型皮瓣的保护作用。方法 :采用Wistar大鼠 ,随机分为两组 ,在其背部形成 7cm× 2cm任意型皮瓣 ,对照组术后即刻腹膜下注射生理盐水 ,实验组术后即刻腹膜下注射NAC ,通过图像分析技术分别检测两组皮瓣成活率 ;并取皮瓣组织作组织学检查 ;用免疫组织化学方法检测TNF α的表达和ICAM 1的表达。结果 :实验组皮瓣成活率明显高于对照组 ;组织学检查发现 ,实验组皮瓣组织结构的破坏较对照组轻 ,炎症细胞浸润数量较对照组少 ;实验组皮瓣组织中TNF α和ICAM 1的表达显著低于对照组。结论 :NAC可以提高大鼠背部任意型皮瓣成活率 ,其机制可能与下调TNF α和ICAM 1等炎症相关因子的表达水平有关。

AFB_(1)对犬肝细胞的毒性作用及NAC的保护效应

[目的]以犬原代肝细胞为模型,研究黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))对肝细胞的毒性作用以及N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对细胞损伤的保护效应.[方法]选取1~2月龄幼犬,取肝细胞培养至对数生长期,分别用0(对照),0.05,0.25,1.25,6.25,31.25μg/mL AFB_(1)和6.25μg/mL AFB_(1)+64 mmol/L NAC处理36 h后,观察细胞形态结构,检测肝功能相关指标、氧化与抗氧化功能指标及细胞凋亡相关基因cleaved-caspase-3和cleaved-caspase-9 mRNA表达量.[结果]显微观察发现,与对照组相比,0.05~6.25μg/mL AFB_(1)处理组的细胞数量减少,细胞失去饱满性,细胞凋亡、坏死情况明显;6.25μg/mL AFB_(1)+64 mmol/L NAC处理组的细胞饱满且活性良好,细胞数目增加,结构完整.与对照组相比,1.25~31.25μg/mL AFB_(1)处理组的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性均显著上升(P<0.05);0.05~31.25μg/mL AFB_(1)处理组的碱性磷酸酶(ALP)活性显著升高(P<0.05);1.25~31.25μg/mL AFB_(1)处理组的γ-谷氨酰转移酶(γ-GGT)活性显著降低(P<0.05),0.05~0.25μg/mL AFB_(1)处理组的γ-GGT活性显著增加(P<0.05);31.25μg/mL AFB_(1)处理组的白蛋白(ALB)质量浓度显著降低(P<0.05).与对照组相比,0.05~0.25μg/mL AFB_(1)处理组的8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和丙二醇(MDA)含量显著增加(P<0.05);1.25~31.25μg/mL AFB_(1)处理组的H2O2质量浓度显著增加(P<0.05).与对照组相比,0.05~31.25μg/mL AFB_(1)处理组的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性无显著变化;0.25~31.25μg/mL AFB_(1)处理组的过氧化氢酶(CAT)活性显著降低(P<0.05).与6.25μg/mL AFB_(1)处理组相比,6.25μg/mL AFB_(1)+64 mmol/L NAC处理组的AST、ALP、r-GGT活性以及ALB、8-OHdG、MDA、H2O2水平显著降低(P<0.05),CAT和GSH-Px活性显著升高(P<0.05).6.25μg/mL AFB_(1)处理细胞的凋亡率为12%,极显著高于对照组和6.25μg/mL AFB_(1)+64 mmol/L NAC处理组.与对照组相比,0.05~6.25μg/mL AFB_(1)处理组的cleaved-caspase-3和cleaved-caspase-9 mRNA的表达量极显著增加(P<0.01);与6.25μg/mL AFB_(1)组相比,6.25μg/mL AFB_(1)+64 mmol/L NAC处理组的cleaved-caspase-3和cleaved-caspase-9 mRNA表达量均极显著降低(P<0.01).[结论]AFB_(1)能够抑制犬原代肝细胞活性,引起细胞形态、肝功能指标及细胞氧化与抗氧化功能异常,加快细胞凋亡;NAC能够显著提高抗氧化酶活性,降低AFB_(1)所致肝细胞的损伤和凋亡水平,对肝细胞具有一定的保护性.

Image potential states mediated STM imaging of cobalt phthalocyanine on NaCl/Cu(100)

The adsorption and electronic properties of isolated cobalt phthalocyanine （CoPc） molecule on an ultrathin layer of NaC1 have been investigated. High-resolution STM images give a detailed picture of the lowest unoccupied molecular orbital （LUMO） of an isolated CoPc. It is shown that the NaC1 ultrathin layer efficiently decouples the interaction of the molecules from the underneath metal substrate, which makes it an ideal substrate for studying the properties of single molecules. Moreover, strong dependence of the appearance of the molecules on the sample bias in the region of relatively high bias （〉 3.1 V） is ascribed to the image potential states （IPSs） of NaCI/Cu（100）, which may provide us with a possible method to fabricate quantum storage devices.

NaC1胁迫对不同倍性西瓜幼苗叶片叶绿素含量的影响

为探讨NaCl胁迫对不同倍性西瓜幼苗叶绿素含量的影响，用浓度为0、100、200、300、400mmol·L^-1的NaCl处理西瓜幼苗，95％（中）乙醇提取叶片中的叶绿素，比较NaCl胁迫下不同倍性西瓜幼苗叶绿素含量的变化。结果表明，在低盐浓度下，西瓜幼苗叶片中的叶绿素含量随胁迫时间增加的变化较小。

NaCl和Na_2CO_3对枸杞的胁迫效应

对5个月苗龄的枸杞幼苗用0.3%～0.9%的中性盐NaCl和碱性盐Na2CO3处理,以观察枸杞幼苗对盐碱的耐受程度。结果表明:枸杞耐Na2CO3的最高浓度为0.3%,而耐NaCl的最高浓度为0.9%。在两种盐胁迫下,相对生长率、O2-·、H2O2、MDA含量以及质膜透性的变化趋势基本相似。但是,在Na2CO3胁迫下,相对生长率明显下降,O2-·、H2O2、MDA含量上升加剧,质膜透性也明显增加。叶绿素和可溶性蛋白含量明显下降;可溶性糖和淀粉含量出现明显下降趋势。而在NaCl胁迫下,叶片可溶性糖含量出现先降后升的趋势,根中的淀粉含量也出现缓慢上升的趋势,并且二者差异显著(P<0.05),由此说明枸杞对盐的耐受力高于碱。

缺磷条件下白羽扇豆排根发育与生长素及miR164的关系

以缺磷条件下白羽扇豆为材料,观察了外源生长素NAA和生长素运输的抑制剂NPA对白羽扇豆排根形成及其活性的影响,同时运用基因芯片与RT-PCR的方法分析了生长素信号转导途径中转录因子NAC1以及调控NAC1表达的上游microRNA164(miR164)在不同发育阶段排根中的表达变化,以探讨白羽扇豆在缺磷时排根形成与发育的调控机制。结果表明,缺磷胁迫下排根大量形成与生长素及其运输有关,排根NAC1的表达在初生阶段上调,成熟后下调,并受其上游的miR164的负调控,而排根衰老后则上述基因的表达都减弱。研究发现,在缺磷诱导的排根发生至发育成熟过程中,miR164、NAC1、生长素与排根发育之间很可能组成了一个级联系统,从而控制排根的发生与发育。

11份芦笋种质材料耐盐性评价

为了给滨海盐碱地发展芦笋产业以及芦笋耐盐品种的选育提供参考,设置了0%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%6个NaCl盐度水平,对11份芦笋种质材料种子的发芽率和幼苗的生育指数进行了测定和分析。结果表明,芦笋不同品种耐盐能力差异明显,从种子发芽情况看,NJ956、06-9耐盐能力最强,在0.5%盐浓度下仍能正常发芽,其次为NJ982、‘阿波罗’,能耐0.4%的盐浓度,‘冠军’和06-6能耐0.2%~0.3%的盐浓度;从幼苗生长情况看,‘硕丰’耐盐能力最强,其次为06-9、NJ982、‘阿波罗’、NJ956、NJ978和‘冠军’。综合种子发芽和幼苗生长情况,06-9、NJ982‘、阿波罗’、NJ956、NJ978‘、冠军’和‘硕丰’能耐0.3%或更高浓度的NaCl胁迫,可以作为耐盐品种种质材料。