抑制NAD(P)H氧化酶表达和活性对大鼠糖尿病肾病的影响

【目的】 探讨NAD(P)H氧化酶在糖尿病肾病发病中的作用和防治方法?【方法】 链脲佐菌素(STZ)诱导的大鼠糖尿病模型随机分为糖尿病组NAD(P)H氧化酶抑制剂apocynin治疗组(0.2 g·kg-1·d-1)和血管紧张素转换酶抑制剂福辛普利治疗组(10 mg· kg-1· d-1),疗程8周?用RT-PCR检测肾NAD(P)H氧化酶亚基p22phox mRNA表达;组织病理学检查观察肾病变程度;测定血肌酐(Scr)?内生肌酐清除率(Ccr)?24 h尿蛋白排泄量?肾质量指数等?【结果】 糖尿病大鼠肾p22phox mRNA的表达较正常大鼠明显升高(P < 0.05), apocynin治疗不影响肾p22phox mRNA 的表达;福辛普利治疗4周,明显降低了肾p22phox mRNA表达(P < 0.05);apoc-ynin和福辛普利均显著降低了肾小球细胞外基质蛋白?Scr?尿蛋白和肾质量指数(P < 0.05),提高了Ccr(P < 0.05),但对血糖和血压均没有显著影响?【结论】 糖尿病大鼠肾组织中,NAD(P)H氧化酶的表达明显升高并参与了糖尿病肾病发病;抑制NAD(P)H氧化酶活性和表达的治疗措施可延缓糖尿病肾病的发生和发展?

NAD(P)H氧化酶在血管紧张素Ⅱ损伤人胰岛细胞功能中的作用

目的探讨分离纯化的人胰岛细胞是否表达NAD(P)H氧化酶亚基p22phox,通过体外实验了解该酶在血管紧张素Ⅱ损伤胰岛细胞功能中所起的作用。方法对分离纯化后的胰岛分别进行p22phox亚基和胰岛素免疫荧光检测;使用化学发光法检测不同浓度血管紧张素Ⅱ、AT1受体拮抗剂及NAD(P)H氧化酶抑制剂干预下胰岛细胞胰岛素分泌功能。结果免疫荧光标记胰岛p22phox亚基和胰岛素均呈强阳性;血管紧张素Ⅱ抑制高糖刺激下胰岛细胞胰岛素的分泌,使用AT1受体拮抗剂或者NAD(P)H氧化酶抑制剂能拮抗血管紧张素Ⅱ的抑制作用。结论分离纯化的人胰岛细胞表达NAD(P)H氧化酶;血管紧张素Ⅱ可能通过激活细胞表面NAD(P)H氧化酶使胰岛细胞发生氧化应激,从而损伤胰岛细胞的分泌功能。

芝麻素和维生素E通过调节内皮型一氧化氮合酶和NAD(P)H氧化酶4改善D-半乳糖和三氯化铝诱导的大鼠主动脉内皮功能障碍

目的观察芝麻素(Ses)和维生素E(Vit E)联用对D-半乳糖(D-gal)和三氯化铝(AlCl_(3))致大鼠主动脉内皮功能障碍的保护作用,并探讨其可能机制。方法大鼠ip给予D-ga(l180 mg·kg^(-1))+ig给予AlCl_(3)(15 mg·kg^(-1))连续84 d,建立大鼠主动脉内皮功能障碍模型。将模型大鼠随机分为模型组、模型+VitE10 mg·kg^(-1)组、模型+Ses 160 mg·kg^(-1)组和模型+Ses 160 mg·kg^(-1)+Vit E 10 mg·kg^(-1)组,同时设正常对照组。连续给药70 d后,尾袖法测量大鼠的收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和平均压(MBP)。戊巴比妥钠(30 mg·kg^(-1),ip)麻醉后,取胸主动脉制备2段3 mm动脉环,离体灌流法观察主动脉环对乙酰胆碱(ACh)和硝普钠的舒张反应。HE染色观察主动脉病理变化;化学比色法测定血清总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢(H_(2)O_(2))和一氧化氮(NO)含量;免疫组化法观察主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达。Western印迹法观察主动脉eNOS和NAD(P)H氧化酶4(NOX4)蛋白表达。结果与模型组比较,模型+Ses+Vit E组离体主动脉对ACh(1×10^(-7)~1×10^(-4)mol·L^(-1))的舒张反应显著升高(P<0.01);模型+Ses和模型+Vit E组的SBP、DBP和MBP降低(P<0.01)、血清T-AOC和NO含量升高(P<0.01)、H_(2)O_(2)含量降低(P<0.01)、主动脉eNOS表达增加(P<0.01)及NOX4表达减少(P<0.01)。与模型+Ses比较,模型+Ses+Vit E组SBP、DBP和MBP均降低(P<0.01或P<0.05)、NO含量升高(P<0.01)和H_(2)O_(2)含量降低(P<0.01)、主动脉eNOS蛋白表达增加(P<0.01),NOX4蛋白表达降低(P<0.05)。与模型+Vit E组比较,模型+Ses+Vit E组血清T-AOC和NO含量升高(P<0.01)、H_(2)O_(2)含量降低(P<0.01)、主动脉eNOS蛋白表达增加(P<0.01),NOX4表达降低(P<0.01)。结论联用Ses和Vit E通过上调eNOS和下调NOX4蛋白表达,改善D-gal和AlCl_(3)诱导的大鼠主动脉内皮功能障碍。

NADPH氧化酶在TGF-β_1诱导大鼠小管上皮细胞表达炎症因子中的作用

【目的】观察转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肾小管上皮细胞单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响,并探讨NADPH氧化酶在其中的作用。【方法】以大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)为研究对象,采用TGF-β1(10ng/mL)刺激0h,2h,4h,8h,12h,24h分别收取RNA;刺激0h,12h,24h,48h,72h分别收取细胞上清液;部分实验中培养的细胞在刺激前用NADPH氧化酶抑制剂DPI(0.1,1,5,10μmol/L)预处理1h,然后含10ng的TGF-β1无血清DMEM/F12培养液分别培养12h(收集RNA)和24h(收集细胞上清液)。所有实验重复3次。细胞内活性氧(ROS)的产生采用激光共聚焦显微镜观察。NADPH氧化酶p22phox、gp91phox、p47phox和p67phox亚单位以及MCP-1和IL-6mRNA的表达采用RT-PCR检测。细胞上清液中MCP-1的含量采用ELISA检测。【结果】TGF-β1可显著上调NADPH氧化酶p67phox亚单位mRNA的表达,8h为对照的2.43倍(P<0.01),24h达3.59倍(P<0.01)。但对p22phox、gp91phox和p47phox亚单位mRNA表达无显著影响。TGF-β1可显著增加细胞内ROS产生,DPI预处理后ROS产生较TGF-β1刺激组降低了43.69%(P<0.05)。TGF-β1可显著上调MCP-1和IL-6mRNA及蛋白的表达。DPI预处理可明显逆转TGF-β1诱导的MCP-1和IL-6的上调表达。【结论】TGF-β1可促使细胞ROS产生增加。TGF-β1可能通过NADPH氧化酶依赖的ROS介导了大鼠肾小管上皮细胞MCP-1及IL-6的上调表达。

中国上海汉族人群NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与脑卒中相关性

目的:研究NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与脑卒中的相关性。方法 :收集118例脑出血患者、125例脑梗死患者和147例正常对照组,研究对象均来自上海地区汉族人群,3组在年龄、性别构成比、体质指数(BMI)等基线指标均没有明显差异,分别进行血糖、血脂等各项指标的测定,用聚合酶链反应、限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和基因测序方法比较其在不同人群中的基因突变频率。结果:脑出血组、脑梗死组CT+TT基因型(9.3%、9.6%)和T等位基因(4.7%、5.2%),均明显高于对照组(2.0%和1.0%,P<0.05),脑梗死组中发现1例TT基因型,出血组与正常对照组均未发现TT基因型,与基因测序结果一致。采用二分类Logistic回归分析p22phox亚基C242T基因多态性与脑出血的相关性(β=1.712,OR=5.537,95%CI:1.120～27.381,P=0.036),与脑梗死的相关性(β=1.432,OR=4.187,95%CI:0.934～18.774,P=0.061),表明C242T基因多态性可能是脑出血、脑梗死的危险因素。结论:NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T多态性与脑出血、脑梗死均有一定的相关性,可能是脑卒中的一个危险因素。但与高血压和饮酒等传统危险因素相比,C242T多态性对脑梗死的影响并不显著。

NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与脑梗死的关系

目的了解上海地区汉族脑梗死患者烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶[NAD(P)H氧化酶]p22phox亚基C242T基因多态性和等位基因频率的分布情况,探讨其多态性与脑梗死的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP),对176例脑梗死患者和131名健康老年人的C242T位点进行基因分型,计算等位基因的频率分布。结果脑梗死患者血清三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血糖浓度和血压与老年健康对照组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。脑梗死组与老年健康对照组的CC、CT、TT基因型频率分别为92.05%、7.95%、0与93.89%、5.34%、0.76%;C、T等位基因频率分别为96.02%、3.98%与96.56%、3.44%,2组间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 p22phox亚基C242T位点的单核苷酸多态性与脑梗死的发生可能无关。

下调NAD(P)H氧化酶4加重缺氧复氧心肌细胞损伤:线粒体SIRT3信号的关键作用

目的:明确内源性NAD(P)H氧化酶4(Nox4)在心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤中的作用并探讨其可能的机制。方法:以H9C2心肌细胞系为研究对象,建立H/R模型,将细胞分为对照组、NC-siRNA组、Nox4-siRNA组、H/R组、H/R+NC-siRNA组和H/R+Nox4-siRNA组。采用RNAi方法下调Nox4的表达,MTT比色法测定相对存活率、荧光素酶化学发光法测量ATP水平,MitoSOX荧光探针检测线粒体ROS,比色法测定NAD+/NADH的比值,Western blot法测定Nox4和SIRT3表达水平。结果:与对照组相比,H/R组H9C2心肌细胞中Nox4蛋白的水平明显增加(P<0.05),相对存活率、ATP的水平明显降低(P<0.05,P<0.01),而线粒体ROS生成明显增加(P<0.01),同时NAD+/NADH的比值明显增加、SIRT3表达量明显降低(P<0.05,P<0.01)。与H/R组相比,H/R+Nox4-siRNA组Nox4蛋白水平显著降低(P<0.05),相对存活率、ATP的水平进一步降低、线粒体ROS生成进一步增加(P<0.05),同时,NAD+/NADH的比值明显降低(P<0.01)、SIRT3蛋白水平进一步降低(P<0.05)。结论:下调Nox4可加重H/R诱导的心肌细胞损伤和氧化应激,抑制线粒体能量生成,其心肌细胞保护机制可能是通过上调NAD+/NADH的比值,增加SIRT3的表达而发挥作用。

非吞噬细胞NAD(P)H氧化酶生成的活性氧参与基因表达和信号转导

以前认为,NAD(P)H氧化酶仅存在于吞噬细胞,负责吞噬细胞呼吸爆发时产生活性氧(ROS)以杀灭微生物。现在发现正常非吞噬细胞也有NAD(P)H氧化酶,称之为类NAD(P)H氧化酶。该酶在生长因子和细胞因子的刺激下,介导非吞噬细胞产生胞内或胞外的ROS,通过此途径产生的ROS对细胞增殖、分化和血管形成和缺氧反应等生理过程至关重要。这些新的发现,有力地证明了ROS作为细胞“信号分子”和“基因表达开关”的积极作用,改变了过去只把ROS看作有害物的误解。

质膜NAD(P)H氧化酶参予金瓜炭疽(Colletotrichum lagerarium)细胞壁激发子诱导人参细胞产生激发反应(英文)

在人参(Panax ginseng C.A.Meyer)悬浮细胞质膜上测出了NAD(P)H氧化酶活性。这类NAD(P)H氧化酶活性可以被金瓜炭疽细胞壁激发子(Cle)诱导。Cle处理还能诱导人参悬浮细胞的氧进发、促进人参悬浮细胞的皂苷合成、提高苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活力、以及诱导查尔式酮酶(CHS)的累积和细胞壁上抗性相关蛋白基因脯氨酸富裕蛋白基因hrgp(Hydroxyprolin-rich glycoproleins)的表达。当用哺乳动物白细胞质膜NADPH氧化酶的特异性抑制剂二亚苯基碘(Diphenylene iodonium,DPI)与奎吖因(quinacrine)预处理人参悬浮细胞30 min 后,Cle诱导的H2O2释放与Cle激活的质膜NAD(P)H氧化酶活性被抑制,同时Cle诱导的PAL活性及CHS的积累下降,皂苷合成与hrgp的表达被抑制。由此推测:人参细胞质膜NAD(P)H氧化酶与哺乳动物白细胞质膜NADPH氧化酶有很大的相似性。在Cle激发人参悬浮细胞产生氧进发的过程中,NAD(P)H氧化酶活性被诱导从而导致H2O2的产生,H2O2作为第二信使,激活苯丙氨酸途径,诱发人参皂苷的合成及hrgp防御基因的表达。这一过程中还涉及到Ca2+内流,胞内Ca2+浓度的升高,蛋白磷酸化与去磷酸化。人参细胞质膜NAD(P)H氧化酶在人参细胞对Cle的反应过程中起一种介导作用。因此可能存在由Cle刺激,NAD(P)H氧化酶被诱导,H2O2释放,到人?

高血压病患者NAD(P)H氧化酶P^(22phox)mRNA表达与抗活性氧单位、NO水平变化实验研究

目的探讨高血压病人血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA的表达水平,及其与高血压氧化应激时抗活性氧单位、一氧化氮(NO)水平变化间的关系。方法研究对象分为原发性高血压组(EH)和正常组(N)。通过密度梯度离心法获取血中吞噬细胞,采用Rt-PCR技术检测吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA的表达量,比色法检测血清中NO含量及抗活性氧单位水平。结果高血压组血吞噬细胞P22phoxmRNA较正常组高表达,高血压组血清NO含量、抗活性氧单位水平较正常组降低。统计学相关性分析两组人群血清NO含量、抗活性氧单位水平与相应的吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA表达量呈直线相关。结论高血压组血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA较正常组有显著的高表达,高血压患者血清NO含量、抗活性氧单位水平的变化与吞噬细胞NA(DP)H氧化酶P22phoxmRNA表达密切相关。

NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与缺血性脑血管病的关系

目的:探讨在中国人群中NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T多态性与缺血性脑血管病(ICVD)的相关性。方法:共收集了112例ICVD患者(TIA36例,脑梗死76例)和105例对照者,用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)的方法确定其基因型。结果:ICVD组和对照组的TC基因型频率分别为0.152和0.057,未发现有TT基因型。ICVD组的TC基因型频率显著高于对照组(P=0.024,OR2.95,95％CI 1.12-7.81)。ICVD亚组间的分析显示,TIA与对照组之间CT基因型频率无明显差异,而脑梗死与对照组则有显著差异。结论:NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T多态性可能是脑梗死的一个危险因素。

高血压病患者吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P^(22Phox)mRNA的表达水平

目的研究高血压病人及家系中血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA表达水平的变化。方法研究对象分为有高血压家族史的高血压组(FH)和正常组(FN),无高血压家族史的高血压组(NFH)和正常组(N)。通过密度梯度离心法获取血中吞噬细胞,采用RT-PCR技术检测吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA的表达量;比色法检测血清中抗活性氧单位水平。结果FH组(6.60±0.59)、NFH组(6.07±0.56)分别较FN组(4.99±0.29)、N组(4.13±0.51)P22phoxmRNA高表达(P<0.01);FH组较NFH组、FN组较N组P22phoxmRNA高表达(P<0.01)。高血压组血清抗活性氧单位水平较正常组降低。结论高血压组血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA较正常组有显著的高表达,且其表达可能受遗传因素的影响。

NAD(P) H氧化酶在心衰犬心肌组织中的表达

目的 观察扩张型心肌病心力衰竭 (dilatedcardiomyopathy chronicheartfailure ,DCM CHF)犬模型心肌中超氧化物来源之一的NAD (P)H氧化酶亚组分 p4 7phox的表达。方法 通过快速右心室起搏来建立扩张型心肌病心力衰竭 (DCM CHF)犬的模型 ,模型建立成功后 ,取犬心做病理检查 (大体观测及组织切片HE染色 )和免疫组化法检测p4 7phox的蛋白表达 ,并利用图像分析系统测量p4 7phox的蛋白阳性表达区域平均光密度值 ,进行定量分析。结果 模型犬除有充血性心力衰竭的症状、体征外 ,心脏大体标本观测示DCM CHF犬模型的心脏外形较正常对照犬增大 ,同时有左室腔扩大、室壁变薄 ;HE染色示DCM CHF犬模型心肌细胞肿胀 ,大小不一 ;免疫组化结果显示DCM CHF犬模型的心肌表达 p4 7phox蛋白平均光密度值为 0 36 72± 0 0 2 14 ,而对照组平均光密度值为 0 0 95 4± 0 0 344 ,示DCM CHF犬 p4 7phox蛋白表达显著增多 (P <0 0 1)。结论 DCM CHF犬模型的心肌中 p4 7phox蛋白表达较正常对照犬显著增加 ,提示NAD(P)H氧化酶可能参与心力衰竭的病理生理过程。

血管紧张素Ⅱ对高血压病NAD(P)H氧化酶P^(22phox)mRNA表达影响的初探

目的研究高血压病人血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phox mRNA的表达及其与血管紧张素(AT-Ⅱ)的相关性。方法研究对象分为原发性高血压组(EH)和正常组(N)。通过密度梯度离心法获取血中吞噬细胞,采用Rt-PCR技术检测吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phox mRNA的表达量,放免法测定血浆AT-Ⅱ水平。结果高血压组血吞噬细胞P22phox mRNA较正常组高表达,血浆AT-Ⅱ水平的测定结果显示高血压组较正常组升高(P<0.01),两组人群血浆AT-Ⅱ含量与相应的吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phox mRNA表达量呈显著正相关。结论高血压组血吞噬细胞NAD(P) H氧化酶P22phox mRNA较正常组有显著的高表达,推测吞噬细胞NAD(P)H氧化酶的活性可能受血浆AT-Ⅱ的调节。

吞噬细胞NAD(P)H氧化酶p^(22Phox)mRNA表达与高血压病氧化应激的关系

目的旨在探讨高血压病人及家系中血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA的表达及其与高血压病氧化应激时抗活性氧单位、一氧化氮(NO)水平变化间的关系。方法研究对象分为有高血压家族史的高血压组(FH) 和正常组(FN),无高血压家族史的高血压组(NFH)和正常组(N)。通过密度梯度离心法获取血中吞噬细胞,采用Rt-PCR技术检测吞噬细胞NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA的表达量;比色法检测血清中NO含量及抗活性氧单位水平。结果FH组、NFH组分别较FN组、N组P22phoxmRNA高表达(P<0.01),FH组较NFH组、及FN组较N 组p22phoxmRNA高表达。组间有显著性差异(P<0.01)。高血压组血清NO含量、抗活性氧单位水平较正常组降低。统计学相关性分析4组人群血清NO含量、抗活性氧单位水平与相应的吞噬细胞NAD(P)H氧化酶p22phoxmRNA表达量呈直线相关。结论高血压组血吞噬细胞NAD(P)H氧化酶p22phoxmRNA较正常组有显著的高表达,且其表达可能受遗传因素的影响;高血压患者血清NO含量、抗活性氧单位水平的变化与吞噬细胞NAD(P)H氧化酶p22phoxmRNA表达密切相关。

NAD(P)H氧化酶及其在高血压血管损害中的作用

血管活性氧簇 (ROS)尤其是超氧阴离子 (·O2 )的增加 ,在高血压引起的血管功能和结构改变中起重要作用。NAD(P)H氧化酶是血管产生·O2 的主要酶 ,并参与了这一损伤机制。

超重和肥胖者的血管内皮NAD(P)H氧化酶-p47^(phox)表达增加并有内皮氧化应激的证据

背景：肥胖可改变一些分子的血管内皮细胞蛋白表达（VECPE），从而影响对动脉粥样硬化的易感性。方法和结果：研究对象为无其他临床疾病、肥胖程度不同的108例男女性受试者（体重指数18．4～36．7kg／m^2；总体脂肪5．8～55．0kg；腰围63．0～122．9em），用定量免疫荧光法检测其血管内皮细胞。所有3种肥胖状况的表达方式均与氧化酶亚单位NAD（P）H氧化酶-p47[部分相关系数（rpart）=0．22～0．24，所有P〈0．05]和抗氧化酶过氧化氢酶（rpart=0．71～0．75，所有P〈0．001）的VECPE呈正相关。

苏云金芽孢杆菌NAD(P)H:醌氧化还原酶基因的克隆和敲除载体的构建

以苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki)8010为研究材料,通过PCR技术获得Bt 8010菌株NAD(P)H:醌氧化还原酶基因上下游2个片段,以含有卡那霉素抗性基因的pDG780质粒为中间载体,通过酶切、连接和PCR,构建含待敲除NAD(P)H:醌氧化还原酶基因上下游片段、卡那霉素抗性基因的重组质粒pRN5101DKU,为后续Bt8010菌株NAD(P)H:醌氧化还原酶基因的敲除做准备.