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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株的毒力评价 被引量:1
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作者 李俊辉 张伟 +8 位作者 程兰玲 潘晓梅 唐慧芬 周涛 秦义杰 胡耀凯 刘强德 肖艳 贺笋 《中国动物保健》 2023年第6期113-115,共3页
为了评估当前优势流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like毒株的毒力,试验利用经猪肺泡巨噬细胞分离的5个NADC30-like毒株接种6~7周龄健康易感猪,以进行毒力评价(A-E组),并设立未攻毒阴性对照组(F组)。所有组攻毒后进行临床症... 为了评估当前优势流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like毒株的毒力,试验利用经猪肺泡巨噬细胞分离的5个NADC30-like毒株接种6~7周龄健康易感猪,以进行毒力评价(A-E组),并设立未攻毒阴性对照组(F组)。所有组攻毒后进行临床症状观察,并在第0、3、5、7、10、14和21天采集全血、咽拭子和肛拭子进行病毒载量检测。结果显示,除D组外其他攻毒组表现一过性体温升高,偶有到41℃,而D组在攻毒后第4~15天,该组试验猪平均体温均不低于40.5℃,体温显著高于其他攻毒组。病毒血症检测发现,除D组外,其他攻毒组在第3、5、7和10天均为核酸阳性,在第14天部分转为核酸阴性,但到第21天又转为阳性,而D组从攻毒到结束病毒血症始终为阳性。肛拭子和咽拭子病毒载量测定发现,除D组外,其他攻毒组在第3、5和7天均为核酸阳性,在第10、14和21天部分猪有时转为阴性,后又转为阳性;D组攻毒到结束肛拭子始终为阳性。从上述数据统计综合分析,结果表明D组所攻击的毒株毒力高于其他毒株,可引起3/5猪发病,且死亡一头,该毒株感染能产生PRRSV的典型临床症状,可初步用于NADC30-like疫苗的效力评价。 展开更多
关键词 nadc30-like 毒力评价 病毒血症 排毒
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福建NADC30-like PRRSV FJLY01株的全基因组分子特征分析 被引量:10
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作者 魏春华 刘建奎 +4 位作者 戴爱玲 龚丽贞 李晓华 黄思琼 杨小燕 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第3期51-60,67,共11页
【目的】了解福建省NADC30-like PRRSV FJLY01株的分子生物学特征和遗传演化规律,为PRRSV的防控提供参考。【方法】对采自福建省规模化猪场的疑似病料进行PRRSV分离鉴定,以NADC30PRRSV毒株基因序列为参考设计并合成9对引物,分别对分离... 【目的】了解福建省NADC30-like PRRSV FJLY01株的分子生物学特征和遗传演化规律,为PRRSV的防控提供参考。【方法】对采自福建省规模化猪场的疑似病料进行PRRSV分离鉴定,以NADC30PRRSV毒株基因序列为参考设计并合成9对引物,分别对分离株序列进行分段PCR扩增,经克隆测序后进行序列拼接,采用MEGA 6.0软件进行核苷酸及氨基酸同源性比对,并绘制其与其他35株毒株的系统遗传进化树。【结果】FJLY01株基因组全长为15 016bp(不包含polyA),包含10个开放阅读框,5′-UTR长190bp,3′-UTR长148bp,Nsp2基因缺失393bp。Nsp2蛋白存在类似PRRSV MN184和NADC30株的131个氨基酸的缺失。核苷酸比对结果表明,FJLY01株与VR-2332、MLV RespPRRS/Repro、CH-1a和BJ-4株核苷酸的同源性为85.2%~86.3%,与JXA1、HuN4等HP-PRRSV株核苷酸的同源性为83.7%~84.1%,与MN184A、MN184B株核苷酸的同源性为87.9%~88.2%,与NADC30株核苷酸的同源性最高,为97.1%。系统进化树分析表明,该毒株属于NADC30-like毒株,与JXA1、VR2332和CH-1a的亲缘关系较远。【结论】福建省存在NADC30-like毒株,应该加强PRRSV的监测。 展开更多
关键词 PRRSV 全基因组 nadc30-like 福建省
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新疆NADC30-like PRRSV的分离鉴定及遗传变异分析 被引量:2
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作者 赵洁雅 黄炯 +5 位作者 王沅 汪萍 参都哈西 古丽尼尕儿·艾尼 马文戈 夏俊 《天津农业科学》 CAS 2019年第12期44-47,55,共5页
为了探明研究新疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like病毒株XJTK的遗传变异特征,本试验分离病毒株后对该病毒的Nsp2和ORF5基因进行克隆和测序,其片段大小分别为648 bp和603 bp,其中Nsp2基因存在3处不连续共393个核苷酸的缺失... 为了探明研究新疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like病毒株XJTK的遗传变异特征,本试验分离病毒株后对该病毒的Nsp2和ORF5基因进行克隆和测序,其片段大小分别为648 bp和603 bp,其中Nsp2基因存在3处不连续共393个核苷酸的缺失,分别缺失333,57和3个核苷酸,完全符合NADC30-like毒株的基因特征;将病毒株XJTK与已知北美型PRRSV代表株VR2332,高致病性PRRSV国内代表株JXA1、TJ,美国分离株NADC30,及NADC30-like国内代表株HENAN-HEB、CHsx1401进行序列比对表明,XJTK株Nsp2和ORF5基因核苷酸序列与参考株同源率分别为36.4%~90.3%和83.7%~93.0%,进一步遗传进化分析表明,其与PRRSV毒株VR2332、JXA1和TJ株亲缘关系较远,与美国分离株NADC30及国内NADC30-like代表株CHsx1401和HENAN-HEB亲缘关系较近,同属于NADC30-like亚群,但仍属于相对独立的分支。本研究是新疆首次证实猪群中存在NADC30-like PRRSV,可为该地区猪繁殖与呼吸综合征的防制提供参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30-like 遗传变异分析
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我国NADC30-like毒株流行现状及猪繁殖与呼吸综合征防控策略再思考 被引量:3
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作者 郭振华 《中国猪业》 2017年第11期26-28,共3页
猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来,NADC30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围的流行。需要特别注意的是,本次PRRS疫情的大范围流行是在高强度... 猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来,NADC30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围的流行。需要特别注意的是,本次PRRS疫情的大范围流行是在高强度免疫弱毒疫苗的基础上发生的,这提醒有必要对PRRS的现行防控措施进行重新的梳理和反思。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30-like 防控措施
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like分离株致病力分析
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作者 李秀丽 王利丽 +3 位作者 江珊 池晶晶 李程 张莉 《天津农业科学》 CAS 2022年第S01期28-32,共5页
为探究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的流行情况,从天津市某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,扩增其Nsp2基因,核苷酸序列比对结果显示该病毒属NADC30分支,与TJnh1501株同源性最高,命名为TJ18114株,并对其感染细胞能力... 为探究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的流行情况,从天津市某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,扩增其Nsp2基因,核苷酸序列比对结果显示该病毒属NADC30分支,与TJnh1501株同源性最高,命名为TJ18114株,并对其感染细胞能力和对猪的致病力进行了研究。结果显示:该毒株能够在Marc145细胞上稳定增殖,引起明显的细胞病变,最佳收获时间为72 h(0.1MOI接种),TCID50为106.445·mL^(-1);用2×10^(5) TCID50·头-1的剂量经肌肉注射结合鼻腔喷雾方式接种45 d杜长大三元猪,猪只感染后24 h体温升高至40℃以上,血液中病毒载量达107.3copies·mL^(-1);感染后7 d PRRSV抗体阳转率100%;感染后15 d猪只消瘦、咳喘,剖检可见间质性肺炎,显微病理观察提示弥漫性肺泡萎缩、炎性浸润;PRRSV荧光定量PCR检测发现病猪的扁桃体、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和淋巴结中均含有较高的病毒。研究结果有助于进一步认识天津地区PRRSV流行毒株的体外增殖规律和临床致病特点,为PRRS的深入研究和防控提供依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30-like毒株 致病力
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PRRSV NADC30-like SYBR Green Ⅰ qPCR检测方法的建立与应用 被引量:4
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作者 项明源 廖倡宇 +5 位作者 江地科 张鹏飞 王印 罗燕 杨泽晓 姚学萍 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期80-85,共6页
为建立高效快速的PRRSV NADC30-Like毒株荧光定量PCR(SYBR Green real-time PCR)检测方法,根据NADC30毒株Nsp2基因保守序列设计特异性引物,通过优化确定最佳反应条件,并进行灵敏度、特异性、重复性实验以及临床样品的检测。结果显示,标... 为建立高效快速的PRRSV NADC30-Like毒株荧光定量PCR(SYBR Green real-time PCR)检测方法,根据NADC30毒株Nsp2基因保守序列设计特异性引物,通过优化确定最佳反应条件,并进行灵敏度、特异性、重复性实验以及临床样品的检测。结果显示,标准品在10~7 copies/μL到10~2 copies/μL浓度范围内具有良好的线性关系,最低检测浓度为2.25×10~1 copies/μL;该方法与HP-PRRSV、PCV、PEDV、TGEV、PRV、CSFV、PoRV无交叉反应,批内和批间的变异系数(CV)小于1.9%,在临床样品的检测中较普通PCR有更高的检出率。建立了PRRSV NADC30-Like毒株荧光定量PCR检测方法,具有敏感性高、特异性强、稳定性好、准确度高和检测快速等优点,可用于PRRSV NADC30-Like感染的早期诊断、样品的快速检测与定量分析。 展开更多
关键词 PRRSV nadc30-like 荧光定量PCR NSP2 定量分析
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猪蓝耳病类NADC30毒株的致病力及疫苗研究进展
7
作者 梁柏荣 伍思华 +1 位作者 王俊杰 何景钱 《广东饲料》 2023年第11期44-52,共9页
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS),俗称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引的一种猪繁殖和呼吸系统障碍的传染病。我国蓝耳... 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS),俗称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引的一种猪繁殖和呼吸系统障碍的传染病。我国蓝耳病主要流行虽仍以经典毒株、高致病性毒株为主,但NADC30-like、NADC34-like、QYYZ-like等毒株的流行呈现逐渐上升趋势。目前我国仍未针对NADC30-like(及NADC34-like)毒株推出具有免疫保护的商品化疫苗,且相关基础研究的报道仍较少,造成NADC30-like的田间流行较难防控;现就类NADC30毒株在全球范围内关于致病性、商品疫苗保护力、疫苗研发进展等方面的研究进展进行整理,为猪场防治类NADC30毒株提供基础数据和防控思路。 展开更多
关键词 猪蓝耳病 nadc30-like 致病力 攻毒保护 疫苗研发 研究进展
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猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株NADC30-like流行情况及防控措施
8
作者 贺仪 王瑜 +4 位作者 陈小洪 吴秀平 李容 邬旭龙 鲁志平 《兽医导刊》 2020年第11期8-9,共2页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)引起妊娠母猪、仔猪的一种繁殖障碍与呼吸系统疾病,是一种高度接触性的病毒性传染病,给我国乃至全世界的养猪业造成巨大的经济损失。临床上主要引起感染猪高热、厌食、呼吸困难,妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)引起妊娠母猪、仔猪的一种繁殖障碍与呼吸系统疾病,是一种高度接触性的病毒性传染病,给我国乃至全世界的养猪业造成巨大的经济损失。临床上主要引起感染猪高热、厌食、呼吸困难,妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊胎等。2013年以来NADC30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围流行,近年来PRRSV重组变异毒株越来越多,因此了解其防控措施,对进一步防控该病及保障我国生猪健康养殖,具有重要意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 变异毒株 nadc30-like 防治措施
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外来与新发动物疫病猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like变异流行情况及综合防控措施
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作者 王瑜 贺仪 +3 位作者 陈小洪 吴秀平 李容 邬旭龙 《猪业科学》 2020年第7期107-108,共2页
猪繁殖与呼吸综合征在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来NADC 30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围流行。近年来PRRSV重组变异毒株越来越多,因此了解其流行情况以及防... 猪繁殖与呼吸综合征在我国流行已20余年,但其病原变异的复杂程度在进一步加大,流行程度也并未明显减弱,特别是2013年以来NADC 30-like毒株的出现导致了PRRS再次大范围流行。近年来PRRSV重组变异毒株越来越多,因此了解其流行情况以及防护措施,对进一步防控该病及保障我国生猪健康养殖具有重要意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc 30-like 防控措施 流行特征
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我国猪繁殖与呼吸综合征NADC30-like毒株的流行情况及防控对策
10
作者 丁尊俄 《兽医导刊》 2020年第14期116-117,共2页
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是目前严重威胁养猪业发展的重要疫病之一,主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病。1987年美国首次报道该病以来,其毒株不断发生演变。2012年我国出现新的类NAD... 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是目前严重威胁养猪业发展的重要疫病之一,主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病。1987年美国首次报道该病以来,其毒株不断发生演变。2012年我国出现新的类NADC30毒株(NADC30-like毒株),该毒株可导致母猪流产及仔猪死淘率升高,给养猪业带来新的威胁,因此了解NADC30-like毒株在我国的流行情况及防控措施,对保障我国生猪健康养殖具有重要意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 nadc30-like毒株 防控措施
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猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株的新近流行 被引量:7
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作者 周磊 丁玉平 《中国猪业》 2017年第11期20-23,32,共5页
猪繁殖与呼吸综合征是严重危害养猪生产的病毒性传染病。自20世纪90年代中期在我国发生和流行以来,已经20余载。据田间流行优势毒株的不同,可大致分为三个阶段:经典毒株流行阶段(1995-2006年)、高致病性变异株流行阶段(2006-2013年)和... 猪繁殖与呼吸综合征是严重危害养猪生产的病毒性传染病。自20世纪90年代中期在我国发生和流行以来,已经20余载。据田间流行优势毒株的不同,可大致分为三个阶段:经典毒株流行阶段(1995-2006年)、高致病性变异株流行阶段(2006-2013年)和新近的类NADC30毒株流行阶段(2013年至今)。2013-2014年间与美国分离株NADC30亲缘性较高的一类PRRSV毒株开始在我国暴发流行,其具有与NADC30和MN184等谱系1(lineage 1)毒株相同的nsp2编码区缺失模式。致病性分析及疫苗保护试验结果表明,其致病性介于高致病性毒株与经典株之间,目前商用疫苗对其保护效果不佳。且类NADC30毒株易与其他PRRSV毒株发生重组,产生新的变异株。类NADC30毒株的广泛流行,以及相关重组毒株的叠现,进一步增加了PRRS疫病防控的难度。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) nadc30(nadc30-like) 分子流行病学 致病性与免疫保护 重组
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猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株FJZ03的致病性分析 被引量:1
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作者 刘建奎 范佳霖 +6 位作者 魏春华 李艳 刘佳悦 马露露 虞慧芸 戴爱玲 杨小燕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1241-1248,共8页
为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒新流行毒株——类NADC30毒株的生物学特性和致病特征,将类NADC30PRRSV FJZ03毒株和HP-PRRSV FJLYDX毒株分别接种30日龄PRRSV和PCV2阴性仔猪,观察、记录和对比各试验组感染猪的临床症状、体温变化、体外排... 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒新流行毒株——类NADC30毒株的生物学特性和致病特征,将类NADC30PRRSV FJZ03毒株和HP-PRRSV FJLYDX毒株分别接种30日龄PRRSV和PCV2阴性仔猪,观察、记录和对比各试验组感染猪的临床症状、体温变化、体外排毒情况、病毒血症及组织病变等情况。试验结果显示,FJZ03株能在猪体内快速复制,引起仔猪较高滴度的病毒血症,体温升高和体外排毒时间均早于高致病性毒株FJLYDX,并且引起严重的间质性肺炎和脾萎缩。细胞因子检测结果表明FJZ03组仔猪细胞因子的浓度都有不同程度的升高,与FJLYDX组相比最明显的是产生较高水平的TNF-α和IL^(-1)0。综上表明FJZ03对仔猪具有较强的致病性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30-like PRRSV 致病性
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Genomic similarity and antibody-dependent enhancement of immune serum potentially affect the protective efficacy of commercial MLV vaccines against NADC30-like PRRSV 被引量:1
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作者 Yang Li Lele Xu +11 位作者 Dian Jiao Zifang Zheng Zhihao Chen Yang Jing Zhiwei Li Zhiqian Maa Yingtong Feng Xuyang Guo Yumiao Wang Yuan He Haixue Zheng Shuqi Xiao 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2023年第5期813-826,共14页
Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)is one of the most significant diseases affecting the pig industry worldwide.The PRRSV mutation rate is the highest among the RNA viruses.To date,NADC30-like PRRSV an... Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)is one of the most significant diseases affecting the pig industry worldwide.The PRRSV mutation rate is the highest among the RNA viruses.To date,NADC30-like PRRSV and highly pathogenic PRRSV(HP-PRRSV)are the dominant epidemic strains in China;however,commercial vaccines do not always provide sufficient cross-protection,and the reasons for insufficient protection are unclear.This study isolated a wild-type NADC30-like PRRSV,SX-YL1806,from Shaanxi Province.Vaccination challenge experiments in piglets showed that commercial modified live virus(MLV)vaccines provided good protection against HP-PRRSV.However,it could not provide sufficient protection against the novel strain SXYL1806.To explore the reasons for this phenomenon,we compared the genomic homology between the MLV strain and HP-PRRSV or NADC30-like PRRSV and found that the MLV strain had a lower genome similarity with NADC30-like PRRSV.Serum neutralization assay showed that MLV-immune serum slightly promoted the homologous HP-PRRSV replication and significantly promoted the heterologous NADC30-like PRRSV strain replication in vitro,suggesting that antibody-dependent enhancement(ADE)might also play a role in decreasing MLV protective efficacy.These findings expand our understanding of the potential factors affecting the protective effect of PRRSV MLV vaccines against the NADC30-like strains. 展开更多
关键词 nadc30-like PRRSV Modified live virus(MLV)vaccines Genomic similarity Antibody dependent enhancement(ADE) Cross protection
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表达高致病性和NADC30样PRRSV毒株GP5蛋白的重组伪狂犬病病毒的构建
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作者 王林青 侯承尧 +4 位作者 马晓 刘颖 刘芳 金钺 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1587-1593,共7页
参考猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株HENAN-XINX基因组序列(GenBank登录号:KF611905)中GP5基因,合成1对特异性引物,BamHⅠ和HindⅢ分别引入到其5′端,RT-PCR扩增NADC30样PRRSV(NADC30-like PRRSV)毒株GP5基因。将扩增片段插入到真核表... 参考猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株HENAN-XINX基因组序列(GenBank登录号:KF611905)中GP5基因,合成1对特异性引物,BamHⅠ和HindⅢ分别引入到其5′端,RT-PCR扩增NADC30样PRRSV(NADC30-like PRRSV)毒株GP5基因。将扩增片段插入到真核表达质粒pBApo-EF1α_Pur_DNA的BamHⅠ和HindⅢ位点,然后扩增含GP5/NA的表达盒,将其导入含高致病性PRRSV(HP-PRRSV)GP5基因的伪狂犬病病毒(PRV)转移质粒pG-GP5/HP-EGFP中,构建重组质粒pG-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP。用脂质体转染法将PRV变异株3基因缺失株rPRV-gE-/gI-/TK-基因组与pG-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP质粒共转染ST细胞,得到携带有HP-PRRSV和NADC30-like PRRSV的GP5基因和绿色荧光蛋白标记基因的重组PRV株rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP。该重组病毒与CRISPR/Cas9-EGFP敲除质粒共转染ST细胞,经4轮病毒空斑纯化得到了无绿色荧光标签的重组病毒rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30株。经PCR和RT-PCR证实成功构建重组病毒rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30。 展开更多
关键词 nadc30-like PRRSV HP-PRRSV GP5基因 重组PRV
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猪繁殖与呼吸综合征类NADC30 PRRSV荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
15
作者 魏春华 卢贵平 +6 位作者 徐叶 刘辰 杨圆 何乐 戴爱玲 杨小燕 刘建奎 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1366-1372,共7页
为快速检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-2)并从中鉴别诊断NADC30-like PRRSV,根据PRRSV-2的ORF6基因及类NADC30的2个靶点Nsp9和ORF5基因片段分别设计3对特异性引物和探针,建立了一种三重荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,Ct值... 为快速检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-2)并从中鉴别诊断NADC30-like PRRSV,根据PRRSV-2的ORF6基因及类NADC30的2个靶点Nsp9和ORF5基因片段分别设计3对特异性引物和探针,建立了一种三重荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,Ct值与标准品在1×10^(9)-1×10^(1)拷贝/μL范围内存在良好的线性关系,R2均>0.990,最低检测浓度为10拷贝/μL;该方法特异性强,与其他基因亚型的PRRSV和其他主要猪源病毒无交叉反应;重复性分析结果显示,组内、组间变异系数均小于1%,呈现出良好重复性。应用建立的三重荧光定量RT-PCR检测方法对116份NADC30-like PRRSV样品进行检测,符合率为98.28%,对458份临床样品进行检测,2对引物单独使用时对NADC30-like PRRSV的检出率分别为36.03%(165/458)和32.3%(148/458),而2对引物同时使用时,NADC30-like PRRSV的检出率明显提高,为44.5%(204/458)。因此,本研究建立的三重荧光定量RT-PCR检测方法可用于PRRSV-2检测,可快速区分出NADC30-like PRRSV,可为PRRSV的防控提供技术支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 TaqMan荧光定量RT-PCR nadc30-like PRRSV 鉴别检测
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甘肃NADC30-like PRRSV的分离及其基因组特性分析 被引量:4
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作者 张婧 孙普 +4 位作者 韩镇 张海霞 田启会 刘在新 卢曾军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1096-1105,共10页
为了解甘肃省部分PRRSV流行株的分子生物学特征和遗传演化规律,对来自甘肃武威一猪场的疑似PRRS感染病料通过细胞培养进行PRRSV分离。该病料细胞培养物可以引起Marc-145细胞发生明显的细胞病变,PRRSV特异性引物RT-PCR扩增结果显示该病... 为了解甘肃省部分PRRSV流行株的分子生物学特征和遗传演化规律,对来自甘肃武威一猪场的疑似PRRS感染病料通过细胞培养进行PRRSV分离。该病料细胞培养物可以引起Marc-145细胞发生明显的细胞病变,PRRSV特异性引物RT-PCR扩增结果显示该病料组织为PRRSV阳性,IFA实验显示接种分离病毒株的Marc-145细胞可以与PRRSV N蛋白抗体反应,出现特异性荧光,将其命名为GSWW2018。设计引物对该毒株全基因组进行分段扩增,克隆测序后拼接得到全长序列。采用DNAstar软件分析其与48个参考毒株核苷酸及氨基酸的同源性,使用MEGA7.0软件绘制系统遗传进化树,并利用Simplot软件分析其重组事件。结果显示GSWW2018全长14 997 bp,其Nsp2蛋白存在与NADC30相似的"111+1+19"的131个氨基酸的不连续的缺失。Nsp2基因和ORF5基因系统进化树分析结果表明其属于类NADC30亚群。重组结果表明GSWW2018可能由HP-PRRSV与NADC30重组而来。本研究表明甘肃省已出现类NADC30毒株,需要进一步加强监测。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30-like 基因组特性
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NADC30-like猪繁殖与呼吸综合征病毒样颗粒的制备与鉴定 被引量:2
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作者 陶一墨 解长占 +2 位作者 王鹏 金宁一 鲁会军 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期5287-5297,共11页
【背景】猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)可以造成怀孕母猪的繁殖障碍及仔猪的呼吸系统疾病,近年来,NADC30-like谱系PRRSV已成为国内的优势流行毒株。【目的】研制针对NADC30-like... 【背景】猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)可以造成怀孕母猪的繁殖障碍及仔猪的呼吸系统疾病,近年来,NADC30-like谱系PRRSV已成为国内的优势流行毒株。【目的】研制针对NADC30-like谱系PRRSV的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗。【方法】将PRRSV NADC30-like毒株编码GP5蛋白开放阅读框5(open reading frame 5,ORF5)、ORF6(编码M蛋白)分别连接至pFastBacTMDual载体P10和PH启动子下游多克隆位点,获得穿梭质粒pFB-30-ORF5及pFB-30-ORF6,酶切鉴定后,将ORF6基因插入到穿梭质粒pFB-30-ORF5 PH启动子下游,构建穿梭质粒pFB-30-ORF5-OPF6。将上述3种穿梭质粒分别转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选及PCR鉴定重组杆粒。再将获得的重组杆粒转染至SF9昆虫细胞,发现细胞病变后收获病毒液,继续盲传3代,在透射电镜下观察是否有病毒样颗粒。用第3代病毒液感染SF9细胞后,分别用GP5蛋白、His-tag、Flag-tag单克隆抗体作为一抗,通过免疫电镜、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)、Western blotting鉴定重组蛋白。【结果】成功构建了3种穿梭质粒pFB-30-ORF5、pFB-30-ORF6和pFB-30-ORF5-OPF6,酶切鉴定正确。通过蓝白斑筛选及PCR验证后获得重组杆粒,分别命名为Bacmind-30-ORF5、Bacmind-30-ORF6和Bacmind-30-ORF5-ORF6。重组杆粒感染SF9细胞120 h时出现明显的细胞病变,收获病毒液后,在透射电子显微镜可观察到大小为50 nm左右呈现球形结构的VLPs。免疫电镜可以观察到胶体金颗粒结合在VLPs周围;IFA结果显示实验组均出现了明显绿色的特异性荧光灶;Western blotting结果表明,3种VLPs均出现特异性条带,并与预期大小一致。【结论】制备了3种NADC30-like谱系PRRSV的病毒样颗粒,为针对PRRSV新谱系流行株疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 nadc30-like猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV) 病毒样颗粒 重组杆状病毒
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猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及应用
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作者 陈雷 《福建畜牧兽医》 2023年第4期27-30,共4页
为解决当前猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株类型复杂、各毒株之间交叉免疫保护不佳的现状,本研究针对NSP2基因保守区域设计1对特异性引物,通过条件优化,建立一种能够快速区分经典株、高致病性毒株和NADC30-like毒株的检测方法。该方法与CSFV... 为解决当前猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株类型复杂、各毒株之间交叉免疫保护不佳的现状,本研究针对NSP2基因保守区域设计1对特异性引物,通过条件优化,建立一种能够快速区分经典株、高致病性毒株和NADC30-like毒株的检测方法。该方法与CSFV、PCV2、PRV、PEDV、TGEV无交叉反应。对不同毒株类型进行检测,结果显示该方法特异性强,能够将经典株、高致病性猪蓝耳病毒株和类NADC30株进行快速区分,为猪群快速区分PRRSV感染类型及疫苗的选择、使用提供科学防控依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 经典毒株 高致病性毒株 nadc30-like毒株
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2014年~2019年PRRSV主要流行毒株在我国的变化 被引量:41
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作者 张洪亮 张文立 +14 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 相丽润 冷超粮 李真 刘春晓 汤艳东 陈家锃 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期512-516,共5页
为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株n... 为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株nsp2基因和122株全基因组序列。遗传演化分析显示,2014年~2019年共检测到6种基因亚型的PRRSV,分别是I型PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like PRRSV、NADC34-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV和RespPRRS MLV-like PRRSV。经统计分析显示,2016年以前除检测到1株NADC30-like PRRSV外,其余全部是HP-PRRSV;2016年后HP-PRRSV检出比率逐渐降低,NADC30-like PRRSV检出比率逐渐升高,且2016年后已超过HP-PRRSV,成为我国主要的流行株。QYYZ-like PRRSV的检出数量增多,其广泛流行于我国的华南地区。其它类型的PRRSV检出比率较低,呈现散发或局部流行。此外,近年来,PRRSV的细胞嗜性已经发生明显变化,绝大多数的病毒株无法在体外分离培养。因此,我国养殖企业针对PRRSV流行株的变化应及时调整防控策略,同时加大对PRRSV生物学特性变化机制的研究。本研究对了解我国PRRSV的流行状况及防控具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 PRRSV nadc30-like PRRSV 主要流行毒株 细胞嗜性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株RT-PCR鉴别诊断方法的建立 被引量:2
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作者 孟令宅 张哲 +3 位作者 刘陈针玉 赵卓 刘涛 袁万哲 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期98-103,共6页
根据GenBank登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)、经典型猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)、与NADC 30-like猪繁殖与呼吸综合征病毒(NADC 30-like PRRSV)Nsp2基因的核苷酸序列,设计了1对用于扩增3种不同毒株的RT-PCR引物,... 根据GenBank登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)、经典型猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)、与NADC 30-like猪繁殖与呼吸综合征病毒(NADC 30-like PRRSV)Nsp2基因的核苷酸序列,设计了1对用于扩增3种不同毒株的RT-PCR引物,建立了HP-PRRSV、C-PRRSV、NADC 30-like PRRSV等3种毒株RT-PCR鉴别诊断的方法,该方法可扩增出1072bp(C-PRRSV),985bp(HP-PRRSV)与682bp(NADC 30-like PRRSV)的特异性片段,而对猪瘟病毒,伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型检测均为阴性。敏感性试验结果表明,对HP-PRRSV,C-PRRSV、NADC 30-like PRRSV的最低核酸检出量分别为385,269,402pg,对来自临床的39份组织样品进行检测,检测阳性率为51%。该方法可用于3种不同PRRSV毒株临床快速检测与流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 高致病性 经典型 nadc 30-like 鉴别
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