NADH酶对电化学厌氧消化产甲烷代谢的影响

为了探究NADH酶对电化学厌氧消化产甲烷代谢的影响,文章以猪粪发酵后的厌氧活性污泥作为接种物,以葡萄糖为底物,用日产气量、气体含量、挥发性酸作为分析指标,研究NADH酶活性变化对EAD体系产甲烷代谢的影响。结果表明,NADH酶在EAD产甲烷途径中起到电子传递的作用,涉及产氢、甲酸发酵、丙酸发酵、丁酸发酵以及乙醇发酵等途径,从而影响EAD体系产甲烷量。

猪囊尾蚴线粒体NADH脱氢酶的基因克隆

目的 研究猪囊尾蚴线粒体 NADH脱氢酶亚单位 1基因的结构特点。 方法 提取猪囊尾蚴 m RNA,反转录合成 c DNA,构建 c DNA文库。用兔抗囊尾蚴抗血清筛选文库 ,得到阳性克隆 ,将其亚克隆到 p Bluescript SK质粒中测序 ,并与 Gen Bank中核苷酸序列进行同源性分析。 结果与结论 3次筛选得到 1个阳性克隆 ,其长度为 10 82bp。其中 1～ 5 78bp为开放阅读框 ,编码猪囊尾蚴线粒体 NADH脱氢酶亚单位 1的 192个氨基酸残基 ,5 79～ 10 82 bp为 t RNA- Asn、t RNA- Ile与 t RNA- Pro的基因编码区。

高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞NADH脱氢酶亚单位4、5表达的影响

目的 探讨高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC Ⅱ）还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）脱氢酶亚单位4、5表达的影响.方法 原代培养Sprague-Dawley（SD）胎鼠AEC Ⅱ,待其生长至接近汇合状态时随机分为高氧组和正常对照组,高氧组持续暴露于常压高浓度氧中（氧浓度〉90%.CO2浓度5%）,正常对照组仍置于5%CO2培养箱中,两组均继续分别培养6、12、24h;采用免疫细胞化学染色SP法检测NADH脱氢酶亚单位4（DN4）蛋白的表达.采取半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定ND4、NADH脱氢酶亚单位5（ND5）mRNA的表达.结果 （1）SP法结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达增强,12h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达减弱,但差异均无统计学意义（均P〉0.05）,24hAEC Ⅱ ND4蛋白的表达显著减弱（P〈0.05）;（2）RT-PCR检测结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA表达增强,差异均无统计学意义（均P〉0.05）.12、24h AECⅡ ND4、ND5 mRNA表达显著减弱（P〈0.05）.结论 持续高氧下调胎鼠AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA和AEC Ⅱ ND4蛋白的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程.

亚洲黑熊四川亚种线粒体NADH脱氢酶亚基5和亚基6基因的克隆与初步分析

[目的]克隆与分析亚洲黑熊四川亚种线粒体NADH的脱氢酶亚基5和亚基6基因(ND5和ND6)。[方法]根据已报道的部分熊科动物ND5和ND6基因序列的相关信息设计引物,运用PCR技术,首次从亚洲黑熊四川亚种的肌肉组织总DNA中成功克隆了ND5和ND6基因的编码序列,分析了其序列特征,并与已报道的9种熊科动物进行比较分析。[结果]该克隆片段包括ND5和ND6两个基因共2456bp,共编码781个氨基酸,与9种熊科动物的ND5和ND6具有很高的同源性;该克隆片段ND5和ND6的蛋白分子量分别为68.2621和19.0386kDa,等电点分别为9.19和4.25,与9种熊科动物的均十分接近。[结论]四川黑熊与9种熊科动物的ND5和ND6基因及其编码蛋白具有很高的相似性,在功能上具有一致性,尤其与东北黑熊在功能上具有高度一致性。

桃Ⅱ型NADH脱氢酶家族基因鉴定和表达分析

Ⅱ型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(TypeⅡNADH dehydrogenase)在所有已全基因组测序的植物中均存在,具有多种功能,尤其在大多数植物呼吸链中起重要作用。本研究对桃Ⅱ型NADH脱氢酶家族基因进行了鉴定,确定了桃Ⅱ型NADH脱氢酶基因家族成员数目、亚家族分类,并分别进行了克隆,同时分析了它的进化关系、在基因组骨架上分布、启动子区域、基因结构、不同组织表达水平及其编码的蛋白质结构。结果显示,桃Ⅱ型NADH脱氢酶基因家族共有6个成员,分布在3~6号染色体上,被分为3个亚家族:NDA、NDB、NDC。桃Ⅱ型NADH脱氢酶家族成员,脂肪族氨基酸指数范围是80.63~95.75,等电点预测结果表明Prupe.3G231400.1和Prupe.5G076700.1是酸性蛋白质,其余4个是碱性蛋白质;NDA和NDC亚家族成员二级结构均以无规则卷曲为主要构成元件,NDB亚家族成员二级结构均以α-螺旋为主要构成元件。Ⅱ型NADH脱氢酶家族基因在桃不同组织中的表达水平差异较大,5个基因在老叶中表达量相对较高,在成熟果肉中表达量低。这些结果为下一步进行Ⅱ型NADH脱氢酶基因功能验证奠定了重要基础。

益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型NADH脱氢酶亚基1和2表达的影响

目的:研究益气活血中药复方对CVB乳鼠心肌细胞感染模型NADH脱氢酶亚基1和2表达的影响,以期从基因水平揭示益气活血中药复方治疗CVB3心肌炎的作用机制,进一步证实益气活血中药复方是治疗CVB3病毒性心肌炎的有效方剂。方法:通过改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离大鼠心肌细胞病毒组和益气活血中药复方给药组差异表达的基因,并通过荧光RT-PCR对上述结果进行验证。结果:SSH结果显示中药组中NADH脱氢酶亚基1和NADH脱氢酶亚基2基因的表达均比病毒组中低,这一结果通过荧光RT-PCR得到验证。结论:益气活血法能够通过调节NADH脱氢酶亚基1和2的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的。

青岛文昌鱼NADH脱氢酶亚基I基因片段的克隆

NADH脱氢酶亚基I是细胞电子传递链的主要成员之一 .采用简并引物PCR方法获得青岛文昌鱼NADH脱氢酶亚基I基因片段 ,将其氨基酸序列与其他生物如佛罗里达文昌鱼 ,斑马鱼 ,爪蟾等无脊椎和脊椎动物NADH脱氢酶亚基I基因相应片段进行了同源性分析 ,均显示较高的同源性 .研究结果证实青岛文昌鱼作为脊索动物的代表之一 ,与脊椎动物有着较近的亲缘关系 。

中国汉族人泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白1基因多态性与氯氮平所致代谢综合征的关联研究

目的:探索中国汉族精神分裂症患者人泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白1(NDUFS1)基因多态性与长期服用氯氮平所致代谢综合征(MS)的关系。方法:收集388例长期服用氯氮平>2年的慢性精神分裂症患者临床资料及代谢指标;分为MS组(159例)和非MS组(299例);对NDUFS1基因rs13024804、rs1044120、rs6435330、rs4147713这4个位点进行多态性检测,并进行组间及性别间分析。结果:NDUFS1基因4个位点各等位基因及基因型分布两组间差异无统计学意义;性别分层后发现,两组女性患者中携带rs1044120 T等位基因(GT+TT vs GG,P=0.002,OR=0.25,95%CI:0.10~0.61)、rs6435330 T等位基因(GT+TT vs GG,P<0.001,OR=0.21,95%CI:0.09~0.50)及rs4147713 G等位基因(TG+GG vs TT P=0.002,OR=0.26,95%CI:0.11~0.61)者患MS的危险性下降。男性患者中rs1044120位点T等位基因携带者血浆高密度脂蛋白水平显著高于非携带者[(1.33±1.26)mmol/L vs(1.09±0.48)mmol/L,P=0.034];女性患者中rs6435330位点T等位基因携带者舒张压显著低于非携带者[(71.43±7.134)mmHg vs(74.47±6.419)mmHg,P=0.032]。结论:在中国汉族精神分裂症患者中,NDUFS1基因多态性与氯氮平相关的MS无关联,女性患者中NDUFS1基因多态性与氯氮平相关的MS存在关联。

低表达NADH脱氢酶[辅酶Q]铁硫蛋白4对乳鼠心肌细胞线粒体功能的影响

目的探讨低表达NADH脱氢酶[辅酶Q]铁硫蛋白4(NDUFS4)蛋白对乳鼠心肌细胞线粒体功能的影响。方法通过原代培养30只乳鼠心肌细胞,将培养出的心肌细胞80盘简单随机分为siRNA处理组和对照组,每组40盘细胞。siRNA处理组:在乳鼠心肌细胞上转染NDUFS4 siRNA;对照组:在乳鼠心肌细胞上转染无义siRNA。继续培养48 h后,比较两组细胞在NDUFS4蛋白的表达、线粒体膜电位、细胞活性氧簇(ROS)水平、线粒体钙离子摄取能力和线粒体呼吸控制率上的差异。结果乳鼠心肌细胞NDUFS4蛋白表达处理组较对照组下调73.58%(P<0.001),线粒体的膜电位处理组较对照组下降20.49%(P<0.05),同时ROS水平处理组较对照组上升32.11%(P<0.001)。乳鼠心肌细胞线粒体钙离子摄取能力处理组较对照组降低33.33%(P<0.001),细胞最大呼吸速率处理组较对照组下降29.18%(P<0.05)。结论 NDUFS4在乳鼠心肌细胞线粒体中维持膜电位、ROS的生成、MPTP的开放和能量供应等过程中发挥着重要的功能。

小飞鼠NADH脱氢酶亚基1基因(ND1)的生物信息学分析

NADH脱氢酶亚基1(ND1)是线粒体膜呼吸链NADH脱氢酶(复合物Ⅰ)的核心亚基,其作用是将电子从NADH转移到呼吸链,为研究小飞鼠(Pteromys volans)ND1基因的功能,利用生物信息学方法对ND1的理化性质、亲水/疏水性、二级结构、三级结构、跨膜结构、蛋白质修饰位点及同源性等进行了分析和预测。结果表明,ND1基因共编码318个氨基酸,是稳定亲水蛋白,蛋白质二级结构主要为α-螺旋和无规则卷曲,其次为延伸链;与其他18种动物的ND1氨基酸序列进行对比,发现小飞鼠与黑白飞鼠(Hylopetes alboniger)亲缘关系较近。

大肠杆菌苹果酸有氧发酵溢出机制的解析及其应用

L苹果酸是一种重要的四碳二羧酸,以可再生生物质为原料,通过微生物发酵高效制备L苹果酸具有重要意义。本研究首先考察了氮限制条件、温度和pH对有氧条件下L苹果酸合成的影响,结果表明氮限制条件是苹果酸大量积累的重要条件,最适的温度为35℃,最优pH为6.8。进一步分析辅因子水平及呼吸链相关基因的转录水平变化后发现,苹果酸的溢出可能是由于电子呼吸链效率下降,导致NADH的氧化不足,NAD+供给不足最终无法催化苹果酸进一步转化为草酰乙酸。通过敲除大肠杆菌中呼吸链NADH脱氢酶Ⅱ编码基因ndh,可降低电子呼吸链效率。最终重组菌E.coli AFP111(Δndh)在氮源充足条件下,丁二酸也能被大量代谢并以苹果酸为主要产物,收率达到0.65 g/g。本研究成果将为通过呼吸链改造提高中间代谢产物的积累提供理论支持和借鉴。

线粒体NADH1基因和微卫星标记在棘球绦虫感染检测中的应用

(目的)利用线粒体NADH脱氢酶亚基1基因(NADH1)和微卫星标记进行棘球绦虫感染的基因型和遗传多样性分析。(方法)对不同地区牛、羊肝/肺包囊(8份)、野生鼠肝包囊(4份)和狐狸肠道寄生棘球绦虫成虫(2份)共14个样本提取DNA后,分别用棘球绦虫线粒体NADH1基因和微卫星标记进行检测。(结果)PCR扩增分别得到大小约为510 bp的NADH1核苷酸片段和200~300 bp不等的微卫星标记片段,产物的长度与引物设计的预期产物长度一致;序列比对发现不同地区、不同宿主来源的样品序列存在碱基的颠/转换和碱基缺失现象;测序发现8份牛、羊肝/肺包囊样本均为细粒棘球蚴G1基因型感染,4份野生鼠肝包囊均为多房棘球蚴感染,2份狐狸肠道寄生棘球绦虫样本为多房棘球绦虫感染。(结论)线粒体NADH1基因和微卫星标记均适用于棘球绦虫种间和种内的鉴别、分类及系统进化分析研究。

日本血吸虫线粒体nad4基因部分序列的多态性研究

采用PCR技术及DNA序列分析技术对采自湖南省4个不同地区的日本血吸虫的线粒体NADH脱氢酶基因亚基Ⅳ(nad4)部分片段(pnad4)进行克隆及序列分析,获得480bp的pnad4序列。与GenBank上的日本血吸虫相应基因序列进行比对,发现pnad4序列有一定的种内差异(0.4%～1.3%)。

五味子纳米微粒水提液对衰老小鼠脑线粒体能量代谢的影响

目的探讨五味子水提液及纳米微粒水提液对衰老模型小鼠脑细胞线粒体能量代谢的影响。方法以D-半乳糖建立人工致衰小鼠,观察五味子及其纳米微粒水提液对脑线粒体锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、NADH脱氢酶及H+-ATP酶活性、丙二醛(MDA)含量的影响。结果衰老小鼠脑线粒体Mn-SOD、NADH脱氢酶和H+-ATP酶的活性均降低,MDA含量升高;五味子及其纳米微粒水提液可升高Mn-SOD、NADH脱氢酶和H+-ATP酶的活性(P<0.05,P<0.01),降低MDA含量(P<0.01)。结论五味子及其纳米微粒水提液可延缓衰老小鼠脑线粒体能量代谢的改变,保护脑线粒体。

Leber遗传性视神经病变基因治疗中ND4基因腺相关病毒的构建及检测

目的构建人ND4基因腺相关病毒,为Leber遗传性视神经病变(leber hereditary optic neuropathy,LHON)的基因治疗做准备。方法人工合成人的正常ND4基因,构建rAAV2/2-ND4重组腺相关病毒,进行纯化与浓缩后,用特异扩增ND4基因的引物进行PCR鉴定,用地高辛标记的H1探针点杂交方法检测病毒液中rAAV2/2-ND4的物理滴度。结果构建的rAAV2/2-ND4重组腺相关病毒能够特异地扩增出ND4目的基因条带,基因组测定物理滴度为400×109vg·mL-1,证明该重组腺病毒携带目的基因。结论本实验成功地构建了人ND4基因腺相关病毒,作为一种先进的载体系统,为今后Leber遗传性视神经病变患者的基因治疗奠定了基础。

多头带绦虫甘肃分离株线粒体NADH脱氢酶亚基Ⅰ基因片段差异分析

应用线粒体DNA中的NADH脱氢酶亚基Ⅰ（ND1）基因作为分子标记,对我国甘肃省景泰和平凉地区10个绵羊源脑多头蚴进行分析,构建系统进化树,分析其种内变异。结果表明,所有多头带绦虫（T.multiceps）分离株均成功扩增出约0.5 kb的ND1基因片段。序列分析显示,去除引物序列后多头带绦虫的ND1基因片段长为488bp,可以分为9类,共有22个核苷酸变异位点,变异率为0.20%~2.66%。基于ND1序列的系统进化树表明所有T.multiceps分离株构成1个分支,可分为3个亚群,国内分离株分别处在不同的亚群中。国内分离株中除了与已知的遗传变异型Tm1（AY669089/Tm-JT081204/Tm-JT090331）和Tm3（DQ077820/Tm-JT080526）相同外,还存在新的遗传变异型（Tm-JT081008/Tm-JT090603/Tm-JT090115-2）,独立为一支,与其他分离株亲缘关系较远;表明ND1基因片段适合作为研究T.multiceps分离株种内变异的分子标记。

高氧暴露早产大鼠肺组织线粒体蛋白质组学初步研究以及ND4动态表达

目的初步分析高氧暴露下早产大鼠肺组织线粒体蛋白质表达谱的改变,并对还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位4(ND4)的动态表达进行研究。方法建立高氧暴露早产大鼠动物模型,采用双向电泳检测线粒体蛋白质差异性表达,运用RT-PCR和Western blot方法分别检测ND4mRNA及其蛋白表达。结果与空气组比较,高氧暴露4d导致46种肺组织线粒体蛋白质出现差异性表达;高氧暴露1、4和7d,早产大鼠肺组织ND4mRNA和蛋白表达均较空气对照组显著降低(均P<0.01),10d时,差异则无显著性意义(P>0.05)。结论高氧暴露导致肺细胞线粒体(包括呼吸链)功能状态改变可能是促使肺损伤发生发展的重要因素。

阿拉山口口岸地区多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶亚基1基因序列分析

目的分析阿拉山口口岸多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶亚基1(ND1)基因序列。方法使用ND1基因Cest引物对2014年捕获鼠类进行多房棘球蚴初筛,对阳性样品扩增ND1基因全长序列,利用Blast分析序列同源性、Mega 6.0软件构建分子遗传进化树,使用DNAStar软件分析其跨膜结构、信号肽、B细胞抗原表位等。结果阿拉山口口岸1.57%的野鼠感染多房棘球蚴,其线粒体ND1基因全长894 bp,编码297个氨基酸,与日本的多房棘球蚴AB018440和AB720065同源性最高,为100%。结论阿拉山口口岸地区野鼠存在多房棘球蚴感染,其序列信息为该地区多房棘球蚴的科学监控提供依据。

双歧杆菌的耐氧机制

双歧杆菌对氧气敏感,这主要是由于双歧杆菌缺少有效的活性氧清除机制,导致活性氧在细胞内积累,对细胞形成毒害作用。但是最近研究发现,不同双歧杆菌对氧存在敏感性差异,甚至发现了一些耐氧性极高的双歧杆菌。通过对不同耐氧性的双歧杆菌进行比较研究发现:NADH氧化酶和/或NADH过氧化物酶活力是导致双歧杆菌耐氧性差异的主导因素,NADH氧化酶的类型也影响着双歧杆菌的耐氧性;另外环丙烷脂肪酸的含量也与双歧杆菌耐氧性差异有关。目前对双歧杆菌耐氧机制的研究仍主要集中在细胞水平上,在分子水平上的研究还有待进一步开展。

喜鹊和山斑鸠体内棘口科吸虫的种类鉴定

为鉴定喜鹊和山斑鸠体内棘口吸虫种类,本文采用形态学结合分子生物学方法对其进行了种类鉴定。分子生物学结果显示,来源于喜鹊和山斑鸠虫体的线粒体NADH脱氢酶1(ND1)基因同源性为99%,在构建的系统发育树中,两种鸟的虫体ND1序列归类在同一分支,与其亲缘关系最近的是强壮棘口吸虫(Echinostoma robustum)和弗氏棘口吸虫(E.friedi)。形态学观测结果显示,来自同一种鸟的虫体具有相似的形态结构,而两种鸟之间的虫体形态存在一定差异;通过比较所获得虫体与强壮棘口吸虫、弗氏棘口吸虫之间的形态特征,发现这两种鸟体内检出的棘口吸虫均与弗氏棘口吸虫的的形态特征更为相符。结合分子生物学和形态学鉴定的结果,确定感染喜鹊和山斑鸠的棘口科吸虫均为弗氏棘口吸虫,这是弗氏棘口吸虫在国内的首次报道,喜鹊和山斑鸠应为弗氏棘口吸虫的新宿主。