甜菜NADH-NR基因的克隆和序列分析

利用同源序列克隆方法从标准偏高糖型甜菜品种甜研7号(Ty7)中获得氮素诱导NADH-NR基因片段,通过RACE技术克隆NADH-NR基因全长序列。该基因ORF长度2 718 bp,编码905个氨基酸,包括147 bp的5'UTR和382 bp的3'UTR,GenBank上的注册号为EU163265,基因编码蛋白的等电点为6.12,推测分子量大小为102 kD,C端(778-891 aa)有一个跨膜区域。基因编码多肽含有3个氧化还原功能区:钼辅因子功能区(eukary NR Moco,93-478aa),Fe-血红素结合区(Cyt-b5,535-608 aa),FAD结合区(FAD binding 6,653-760 aa)。在甜研7号NR下游的氨基酸残基中含有NADH-NR特有的CGPPP-M基序,说明该蛋白以NADH为电子供体。通过比对,甜研7号的NADH-NR基因与菠菜NADH-NR基因同源性最高,为86.18%。经Southern杂交检验,甜研7号中NADH-NR基因以低拷贝数存在。经基因组克隆分析,甜研7号NADH-NR含有3个内含子,4个外显子。