细颈囊尾蚴四川和云南分离株线粒体nadl和coxl基因的序列测定与种系发育分析

用PCR方法扩增分离自我国四川和云南2省5地山羊和猪共24个细颈囊尾蚴标本的线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原酶第1亚基（nadl）基因部分序列（pnadl）和细胞色素c氧化酶第1亚基（coxl）基因全序列，分析其遗传变异，并用MEGA4．0程序NJ法和Bayesian3．1程序贝叶斯推理法绘制种系发育树，探讨不同地区来源的细颈囊尾蚴种群间的遗传相似性及其他带科带属绦虫的亲缘关系。测序结果显示，细颈囊尾蚴的pnadl序列长度为780bp，coxl基因全序列长度为1620bp。pnadl和coxl基因序列均存在一定的遗传变异，且pnadl序列的变异高于coxl基因序列。系统发育树显示，所有细颈囊尾蚴构成一个分支，可分为3个亚群，均未形成明显的地理分支或宿主分支。因此nadl基因是更适合于研究细颈囊尾蚴系统发生的遗传标记，同时两者在种内均相对保守，与其他带科绦虫种间差异较大，故均可用于细颈囊尾蚴的分子分类。

用户需求描述语言的扩充及需求分析描述语言的设计

文章首先对用户需求信息描述语言 (User' s Need Description Language,简称 UNDL )进行扩充 ,以提高对用户需求信息的描述能力 ,并阐述了该语言的使用方法 ;其次 ,设计出需求分析描述语言(Need Analysis Description Language,简称 NADL) ,对 UNDL语言构成的用户需求描述的文本进行词法检查和语法分析 ,并用 NADL来记录此翻译得到的中间文本。以此规范的形式表示用户需求分析的结果 。

弓首蛔虫和狮弓蛔虫线粒体nad1基因部分序列多态性研究

【目的】对弓首属犬弓首蛔虫、猫弓首蛔虫、马来西亚弓首蛔虫、牛弓首蛔虫和狮弓属狮弓蛔虫线粒体DNA(mtDNA)中烟酰胺脱氢酶亚基I(nad1)基因部分序列(pnad1)进行比较研究,分析它们之间的序列差异和种群遗传关系。【方法】先用同位素(γ33P)标记上下游引物,通过PCR方法扩增出单个虫体线粒体pnad1片段,然后采用单链构象多态性(SSCP)分析技术对pnad1片段进行多态性研究,最后挑选出代表性样品进行测序,并利用基因分析软件DNAStar(版本5.01)对序列进行分析比较。【结果】犬弓首蛔虫种内pnad1基因序列差异为0.3%～1.9%,与猫弓首蛔虫、马来亚弓首蛔虫、牛弓首蛔虫和狮弓蛔虫的种间序列差异分别为11.0%～14.1%、10.7%～12.4%、12.6%～13.7%和17.5%～18.2%。猫弓首蛔虫种内pnad1基因序列差异为2.8%,与马来西亚弓首蛔虫、牛弓首蛔虫和狮弓蛔虫的种间序列差异分别是12.0%～13.0%、15.1%和18.6%～21.2%。马来西亚弓首蛔虫种内pnad1基因序列差异为0～0.3%,与牛弓首蛔虫和狮弓蛔虫的种间序列差异分别是12.4%～12.8%和18.6%～19.0%。【结论】犬弓首蛔虫、猫弓首蛔虫和马来西亚弓首蛔虫不同地方虫株的pnad1序列都有一定差异(0～2.8%)。但种间pnad1的序列差异(10.7%～21.2%)明显高于种内的序列差异,说明nad1基因可以作为弓首蛔虫和狮弓蛔虫分子分类及种群遗传关系研究的遗传标记。

人体混合感染巨片吸虫和巨片吸虫与肝片吸虫的中间型

目的通过线粒体nad1和细胞核ITS1序列,对从云南省玉溪地区一女性片形吸虫病患者体内取出的2条片形吸虫成虫进行虫种鉴定,获知寄生于人体的片形吸虫种类.方法片形吸虫标本保存于75%乙醇溶液,提取全基因组DNA,PCR扩增线粒体基因NADH脱氢酶亚基1(nad1)和细胞核r DNA的第一内转录间隔区(ITS1)序列,正反引物双向测序.所测序列与Gen Bank中Fasciola属相关同源序列组成DNA数据集,进行ITS1单倍型分析和构建nad1的NJ系统发育树.结果测得片形吸虫标本的ITS1和nad1序列长度分别是422 bp和542bp.2条片形吸虫标本的nad1序列完全一致,属于F.gigantica(Fg型).但是ITS1单倍型不一致,标本YXGD01在该基因中属于F.gigantica(Fg型),标本YXGD02属于F.hepatica(Fh型).基于nad1 DNA数据集构建的NJ系统发育树,明显分为F.gigantica和F.hepatica 2个类群.结论基于线粒体nad1和细胞核ITS1序列,从云南省玉溪地区一片形吸虫病患者体内取出的2条片形吸虫属于不同类型,标本YXGD01鉴定为F.gigantica,标本YXGD02可能是F.gigantica与F.hepatica杂交生成的中间型个体,但需要更多的实验证据.

湖南省泡状带绦虫线粒体nad1基因的序列测定及分析

以从我国湖南长沙和湘西犬小肠中采集的2条泡状带绦虫作为研究对象,用引物JB11及JB12扩增泡状带绦虫的pnad1片段,应用ClustalX 1.81程序对序列进行比对,同时利用DNAstar5.0中的Megalign程序进行同源性分析。结果显示来自湖南长沙和湘西的2条泡状带绦虫的pnad1序列均为391bp。研究结果为泡状带绦虫进一步的分类、鉴定和遗传变异研究奠定了基础。

水稻线粒体nad1基因超表达载体的构建和遗传转化

[目的]克隆线粒体相关基因nad1,获得转nad1的转基因水稻植株。[方法]采用TRIzol法提取水稻幼苗总RNA,以反转录的cD-NA为模板,扩增得到nad1;将nad1接到线粒体信号肽Rf1b的5’(Rf1b5’),装载到pCAMBIA1305.1双元表达载体,采用农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行遗传转化。[结果]克隆的目的基因nad1大小为978bp,成功构建了携带线粒体信号肽的nad1植物表达载体,并获得了转nad1基因的阳性植株。[结论]为探讨水稻中过表达nad1对水稻生长的影响奠定了基础。

基于线粒体cox1和nad1基因对青海牦牛种系发育关系的研究

本研究选取4头青海牦牛作为研究对象,用2对引物扩增青海牦牛的线粒体细胞色素c氧化酶第1亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位1基因(nad1)部分序列(pnad1),并用pcox1和pnad1序列重构青海牦牛与其他牛的进化关系。对测定获得序列应用ClustalX 1.81程序进行比对,然后用Phylip 3.67程序MP法,并用Puzzle 5.2程序构建最大似然树。结果表明,所获得的4头牦牛样品pcox1和pnad1基因序列分别为823和837bp,种系发育分析表明,青海牦牛样品与GenBank已知的牦牛位于同一分支,与其他牛所属分支相隔较远。

河北保定地区羊多头蚴和犬多头带绦虫的调查与鉴定

为了解河北省山羊多头蚴和犬多头带绦虫的感染情况,本研究对河北省涞源县、阜平县和易县的山羊和犬进行绦蚴虫感染情况调查,并通过PCR技术对多头蚴与多头带绦虫分离株线粒体pnad1基因部分序列进行扩增与分析,确定多头蚴和多头带绦虫之间的种系发育关系。结果显示,调查区域山羊多头蚴与犬多头带绦虫感染率分别为2.38%和15.33%,通过DNAStar软件分析,所获得多头蚴和多头带绦虫分离株分别与四川多头带绦虫分离株的相似性分别为98.9%~99.5%和99.5%~99.8%,确定羊多头蚴为犬多头带绦虫的幼虫。

青海天峻地区人和羊源细粒棘球蚴流行株基因分型及基因多态性研究

目的解析青海天峻地区人和绵羊细粒棘球蚴流行株的基因型及基因多态性。方法根据Gen Bank公布的细粒棘球绦虫线粒体基因组序列,分别针对cox1和nad1基因设计特异性引物,对16份绵羊源和2份人源细粒棘球蚴分离株样品进行PCR扩增、测序及cox1和nad1基因核苷酸序列多态性和单倍型分析。结果 18株细粒棘球蚴分离株均属于G1型。其中cox1基因单倍型共有9种,变异位点16个,单倍型序列之间碱基差异0~5个,变异率达0.31%;nad1基因单倍型共有7种,涉及变异位点共15个,单倍型序列之间碱基差异1~8个,变异率达0.89%。结论青海天峻地区人和绵羊细粒棘球蚴流行株为G1型,其cox1基因多态性较nad1基因多态性丰富;cox1基因用于细粒棘球蚴分离株间核苷酸多态性分析的分辨率较高。

湖南省华支睾吸虫线粒体cox1和nad1基因的克隆及进化分析

为了研究湖南省华支睾吸虫分离株线粒体细胞色素c氧化酶第Ⅰ亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位Ⅰ基因(nad1)部分序列(pnad1)的遗传变异情况,并用pcox1和pnad1序列构建华支睾吸虫与其他吸虫的种群遗传进化树。应用聚合酶链反应扩增华支睾吸虫虫株的pcox1和pnad1,应用ClustalX 1.81程序对序列进行比对,然后用Phylip3.67程序中的MP法和MEGA4.0程序NJ法绘制种系发育树,并用Puzzle5.2程序构建最大似然树。结果显示,所获得的pcox1和pnad1序列长度分别为1 100bp和790bp,种系发育进化表分析表明,25个华支睾吸虫分离株位于同一分枝。证实华支睾吸虫pcox1和pnad1序列种内相对保守,种间差异较大,故可作为种间遗传变异研究的标记,从而为华支睾吸虫的分类鉴定以及进一步的分子流行病学调查和群体遗传研究奠定基础。

基于线粒体nad1和nad4基因对四川省多头带绦虫种群遗传多样性的分析

为探讨多头带绦虫的种群遗传多样性，应用PCR方法扩增20株分离自四川省攀枝花市、雅安市、成都市的山羊脑部和肌间的多头蚴的线粒体nadl基因和nad4基因的部分序列，并进行分析。序列分析结果显示，20株多头蚴的pnadl基因和pnad4基因序列分别有2个和8个变异位点，长度分别为753bp和801bp，变异率分别为0～0．3％和0～0．8％，检测出3个和6个单倍型，总的单倍型多样性分别为0．574±0．055和0．742±0．074，核苷酸多样性分别为0．00082±0．00053和0．00288±0．001，平均遗传距离分别为0．002和0．003。构建的种系发育树显示，四川分离株与已知多头带绦虫位于同一分支，且与分布的地理区域、寄生部位没有直接的相关性。结果表明，四川多头带绦虫的遗传多样性水平低，其中nadl基因的遗传多样性水平低于nad4基因的遗传多样性。

细粒棘球绦虫G3基因型(水牛株)的研究进展

论述了细粒棘球绦虫G3基因型(水牛株)的分子遗传标记特征及变异情况、宿主范围、地理分布、流行病学意义,分析了G3基因型研究中存在的挑战,预测了G3基因型的未来研究方向,旨在给从事该领域研究的学者提供丰富的分子流行病学信息,为棘球蚴病分子流行病学调查和防治策略的制定提供理论依据和技术指导。