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草莓果实采后NAD激酶活性与NAD(H)、NADP(H)含量及活性氧代谢的关系 被引量:17
1
作者 顾采琴 朱冬雪 李棋 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期352-357,共6页
【目的】研究草莓采后成熟衰老过程中NADK活性与NAD(H)、NADP(H)及活性氧代谢和膜氧化产物变化的关系,以探讨NADK在非跃变型果实成熟衰老过程中的作用,为调控果实的成熟衰老提供理论依据。【方法】将从果园采回的草莓果实贮藏于不同的... 【目的】研究草莓采后成熟衰老过程中NADK活性与NAD(H)、NADP(H)及活性氧代谢和膜氧化产物变化的关系,以探讨NADK在非跃变型果实成熟衰老过程中的作用,为调控果实的成熟衰老提供理论依据。【方法】将从果园采回的草莓果实贮藏于不同的温度下并进行每天取样,研究草莓果实在低温(4℃)、常温(20℃)贮藏期间成熟衰老过程中NAD激酶(NADK)活性及其底物NAD(H)、产物NADP(H)以及超氧阴离子O2.-过氧化氢(H2O2)、膜氧化产物丙二醛(MDA)含量的变化并分析NADK与上述指标的关系。【结果】草莓果实在低温(4℃)贮藏时,其NADK活性比常温(20℃)贮藏的高,NAD(H)含量则相应比常温贮藏的低,NADP(H)含量则高于常温下的;同时,在常温贮藏期间果实O2-.生成速率和H2O2含量、膜氧化产物MDA含量均比低温贮藏的高,暗示NADK可能通过影响NAD(H)、NADP(H)的含量及比例来调控O2-.生成速率和H2O2含量,从而调控果实的成熟衰老。【结论】非跃变型果实草莓采后成熟衰老过程中,保持较高的NADK活性有利于延缓果实的成熟衰老,降低NADK活性可导致NAD和NAD(H)含量的积累,进而加速电子传递,产生大量的活性氧O2.-和H2O2,从而促进膜过氧化作用和积累较多的MDA,最终导致果实衰老变质。 展开更多
关键词 草莓 成熟衰老 NAD激酶 NAD(h) nadp(h) 活性氧
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一种新的短链脱氢/还原酶家族新成员:NADP(H)-依赖的视黄醇脱氢酶基因的克隆和分析 被引量:1
2
作者 王桂玲 黄东阳 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第4期403-410,共8页
从牛的肝脏中快速抽提总RNA ,根据GenBank已发表NADP(H) 依赖的视黄醇脱氢酶基因 (NRDR)的cDNA序列 ,设计并合成特异引物 ,利用cDNA末端快速扩增 (RACE)方法和反转录 聚合酶链式反应 (RT PCR) ,得到牛肝内的NRDRcDNA的全长序列。经测... 从牛的肝脏中快速抽提总RNA ,根据GenBank已发表NADP(H) 依赖的视黄醇脱氢酶基因 (NRDR)的cDNA序列 ,设计并合成特异引物 ,利用cDNA末端快速扩增 (RACE)方法和反转录 聚合酶链式反应 (RT PCR) ,得到牛肝内的NRDRcDNA的全长序列。经测序证实 ,牛肝NRDR的全长cDNA序列为 12 6 6bp ,其开放读码框架在 2 4~ 80 6bp ,编码 2 6 0个氨基酸 (GenBank登录号 :AF4 874 5 4 )。根据NRDR基因推导出的氨基酸序列与人、鼠、兔有高度同源性 ,并含有SDR超家族成员的两个高度保守的模序 ,在其C 端含有过氧化物酶体的靶向序列为SHL。结果表明 ,牛的NRDR应属于过氧化物酶体内SDR超家族成员并在维甲酸合成的限速步骤起作用的酶 ,也为维甲酸合成的传统通路提供一个补充。 展开更多
关键词 nadp(h)-依赖的视黄醇脱氢酶基因(NRDR) 克隆 cDNA末端快速扩增(RACE) 序列分析 短链脱氢/还原酶(SDR)
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Homeostatic regulation of NAD(H)and NADP(H)in cells
3
作者 Luojun Chen Xiaoke Xing +2 位作者 Pingfeng Zhang Lulu Chen Huadong Pei 《Genes & Diseases》 SCIE CSCD 2024年第5期285-299,共15页
Nicotinamide adenine dinucleotide(NAD^(+))/reduced NAD^(+)(NADH)and nicotinamide adenine dinucleotide phosphate(NADP^(+))/reduced NADP^(+)(NADPH)are essential metabolites involved in multiple metabolic pathways and ce... Nicotinamide adenine dinucleotide(NAD^(+))/reduced NAD^(+)(NADH)and nicotinamide adenine dinucleotide phosphate(NADP^(+))/reduced NADP^(+)(NADPH)are essential metabolites involved in multiple metabolic pathways and cellular processes.NAD^(+)and NADH redox couple plays a vital role in catabolic redox reactions,while NADPH is crucial for cellular anabolism and antioxidant responses.Maintaining NAD(H)and NADP(H)homeostasis is crucial for normal physiological activity and is tightly regulated through various mechanisms,such as biosynthesis,consumption,recycling,and conversion between NAD(H)and NADP(H).The conversions between NAD(H)and NADP(H)are controlled by NAD kinases(NADKs)and NADP(H)phosphatases[specifically,metazoan SpoT homolog-1(MESH1)and nocturnin(NOCT)].NADKs facilitate the synthesis of NADP^(+)from NAD^(+),while MESH1 and NOCT convert NADP(H)into NAD(H).In this review,we summarize the physiological roles of NAD(H)and NADP(H)and discuss the regulatory mechanisms governing NAD(H)and NADP(H)homeostasis in three key aspects:the transcriptional and posttranslational regulation of NADKs,the role of MESH1 and NOCT in maintaining NAD(H)and NADP(H)homeostasis,and the influence of the circadian clock on NAD(H)and NADP(H)homeostasis.In conclusion,NADKs,MESH1,and NOCT are integral to various cellular processes,regulating NAD(H)and NADP(H)homeostasis.Dysregulation of these enzymes results in various human diseases,such as cancers and metabolic disorders.Hence,strategies aiming to restore NAD(H)and NADP(H)homeostasis hold promise as novel therapeutic approaches for these diseases. 展开更多
关键词 MESh1 NAD(h) NADK nadp(h) Nocturnin
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正常肝和肝癌细胞中DHRS4L2基因选择性剪接亚型的克隆及其表达调控研究 被引量:1
4
作者 甘雪琼 宋旭红 +3 位作者 李蕊 张巧霞 杜牡丹 黄东阳 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2010年第5期329-334,共6页
目的:鉴定正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞Hep-G2中DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型,并探讨其表达调控机制。方法:应用RT-PCR,3′RACE和生物信息学方法发现并鉴定DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型;去甲基化药物5-aza-dC处理HL-7702和Hep-G2细... 目的:鉴定正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞Hep-G2中DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型,并探讨其表达调控机制。方法:应用RT-PCR,3′RACE和生物信息学方法发现并鉴定DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型;去甲基化药物5-aza-dC处理HL-7702和Hep-G2细胞,通过RT-PCR和real-time PCR方法检测DHRS4L2的表达情况。结果:发现了2个新的DHRS4L2剪接亚型DHRS4L2A和DHRS4L2A3,2个新亚型均出现了新的第1个外显子,命名为Ea,前者缺失外显子1,后者缺失外显子1和3;在正常肝细胞中去甲基化后含DHRS4L2外显子1的转录产物比处理前明显增加,在肝癌细胞中则比处理前减少。结论:获得2个新的DHRS4L2剪接亚型,并发现DHRS4L2的表达和甲基化调控相关,且甲基化的调控作用在正常肝与肝癌细胞之间存在差异,其机制尚待进一步探讨。 展开更多
关键词 辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶 表达调控 DhRS4L2基因 选择性剪接
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猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及酶活性测定 被引量:17
5
作者 赵华梅 潘秀珍 +3 位作者 王长军 郭恒彬 李先富 唐家琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期22-25,共4页
目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层... 目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层析纯化,获得融合蛋白GST-GDH,用凝血酶剪切去除GST,获得完整的GDH纯化蛋白后测定其酶活性。结果PCR法自猪链球菌菌株Habb基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守序列;体外构建筛选原核表达质粒pGEX4T-2-gdh,诱导重组体,表达的蛋白经PAGE初步测定其相对分子质量(Mr)约为71×103;用凝血酶酶切去除融合蛋白中的GST标签后得到的蛋白相对分子质量为45×103;GDH活性测定显示猪链球菌GDH利用α-酮戊二酸做底物,用NADPH做辅酶催化氨的同化和谷氨酸的合成。结论克隆并表达出猪链球菌GDH;猪链球菌GDH属于GDH蛋白家族I,是NADP(H)-特异性GDH。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 谷氨酸脱氢酶 GDh家族I nadp(h)一特异性GDh
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番茄果实采后NAD激酶活性与活性氧代谢的关系 被引量:4
6
作者 朱冬雪 顾采琴 +1 位作者 陶华 黄仁莲 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1431-1436,共6页
以番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)粉红期果实为试材,研究了采后果实在4℃和20℃下贮藏期间成熟衰老过程中NAD激酶(nicotinamide asenine dinucleotide kinase,NADK)活性及其底物NAD(H)、产物NADP(H)以及超氧阴离子O2.-生成速率、... 以番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)粉红期果实为试材,研究了采后果实在4℃和20℃下贮藏期间成熟衰老过程中NAD激酶(nicotinamide asenine dinucleotide kinase,NADK)活性及其底物NAD(H)、产物NADP(H)以及超氧阴离子O2.-生成速率、过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)含量的变化,并分析了其相互关系。结果表明,番茄果实在4℃贮藏时,NADK受到激活,贮藏前期活性比后期高;在20℃贮藏时,NADK除了在贮藏后期出现一个高峰外,整个贮藏期活性比4℃的低;NAD(H)含量的变化趋势与NADK活性的变化趋势相反。4℃贮藏的NADP(H)含量高于20℃下贮藏的,贮藏前期高于贮藏后期;同时,在4℃贮藏期间果实O2.-生成速率、H2O2含量、膜氧化产物MDA含量以及番茄红素含量均比20℃贮藏的低,说明低温在延缓果实衰老的同时激活了NADK活性,NADK可能通过影响NAD(H)、NADP(H)的含量及比例来调控O2.-生成速率和H2O2含量,从而调控番茄果实的成熟衰老。 展开更多
关键词 番茄 成熟衰老 NAD激酶 NAD(h) nadp(h) 活性氧
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即时浸酸显著提高滞育性家蚕卵辅酶Ⅰ和Ⅱ含量 被引量:7
7
作者 姚金美 万华星 +1 位作者 司马杨虎 赵林川 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期24-28,共5页
即时浸酸在阻止家蚕Bombyx mori卵滞育发动的同时,提高了其呼吸耗氧量,抑制了山梨醇积累。本研究利用HPLC法测定了家蚕滞育卵和5min即时浸酸滞育性卵中辅酶Ⅰ和Ⅱ含量。结果表明:产下后24-72h,家蚕滞育卵中NAD,NADH,NADP和NADPH含量分... 即时浸酸在阻止家蚕Bombyx mori卵滞育发动的同时,提高了其呼吸耗氧量,抑制了山梨醇积累。本研究利用HPLC法测定了家蚕滞育卵和5min即时浸酸滞育性卵中辅酶Ⅰ和Ⅱ含量。结果表明:产下后24-72h,家蚕滞育卵中NAD,NADH,NADP和NADPH含量分别下降了30%,37%,50%和4%;而即时浸酸滞育性卵中分别增加了77%,46%,142%和241%。不过,即时浸酸并未显著改变滞育性家蚕卵中NADH/NAD和NADPH/NADP比值。据此推测,即时浸酸提高滞育性家蚕卵辅酶Ⅰ含量与其呼吸耗氧量增加有关;即时浸酸显著提高辅酶Ⅱ含量与山梨醇积累抑制无关,而主要与生物合成加强有关。 展开更多
关键词 家蚕 滞育 滞育卵 即时浸酸 辅酶Ⅰ 辅酶Ⅱ
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一种人神经母细胞瘤辅酶II-依赖性视黄醇脱氢酶cDNA的克隆及特征分析 被引量:5
8
作者 李一凡 刘戈飞 +2 位作者 宋旭红 杜昆 黄东阳 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2005年第6期321-326,共6页
背景与目的:检测神经母细胞瘤中新的辅酶II_依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)_dependen tretinold ehydrogenase/reductase,NRDR]选择性剪接亚型。材料与方法:我们用NRDR特异引物,从人神经母细胞瘤细胞系SK_N_SH和SK_SY_5YcDNA中分别经... 背景与目的:检测神经母细胞瘤中新的辅酶II_依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)_dependen tretinold ehydrogenase/reductase,NRDR]选择性剪接亚型。材料与方法:我们用NRDR特异引物,从人神经母细胞瘤细胞系SK_N_SH和SK_SY_5YcDNA中分别经PCR扩增出635bp和429bpDNA片段,测序证实635bp片段是NRDR,而429bp片段是选择性剪接新亚型。再用快速cDNA末端扩增(Rapidamplification of cDN Aends,RACE)方法得到429bp片段cDNA全长序列。用绿色荧光蛋白与新亚型的融合蛋白做亚细胞定位。结果:得到新亚型全长并命名为humanNRDRA2(hum NRDRA2)(AY616182)。已知NRDR有8个外显子,而新亚型hum NRDRA2由选择性剪接造成了第4和第6外显子丢失,从第5外显子开始读码框架前移1bp,导致随后的编码区框码漂移(frameshift),同时蛋白翻译终止信号提前出现,产生仅有188个氨基酸的蛋白,其中第137氨基酸以后的序列相对于NRDR完全发生改变,同时C_末端的过氧化物酶体定位信号_SRL丢失,却在160~176氨基酸处出现了一个细胞核定位信号。我们在ESTs库中未找到与其相同的剪接形式,提示它可能是神经母细胞瘤特有的一种NRDR剪接亚型。用GFP_NRDRA2融合蛋白做该蛋白的亚细胞定位,发现发绿色荧光的细胞均已悬浮,但悬浮状态不佳,而作为对照的NRDR另一亚型则能定位成功,提示NRDRA2蛋白可能具有一定的细胞毒性。结论:人神经母细胞瘤NRDRA2选择性剪接亚型羧基端框移突变并有核定位序列;该蛋白可能是一种细胞毒性蛋白。 展开更多
关键词 nadp(h)-依赖的视黄醇脱氢酶 选择性剪接 框移突变
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸:醌氧化还原酶1基因多态性与认知功能减退和老年性痴呆的关系 被引量:3
9
作者 万华瑛 陈彪 +1 位作者 杨静芳 董秀敏 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期285-288,共4页
目的分析烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸:醌氧化还原酶1穴NQO1雪基因多态性与认知功能减退和阿尔茨海默病穴AD雪发病的关系。方法经多聚酶链反应扩增后,用变性高效液相色谱和DNA自动测序等方法,分析来自流调人群的110例简易精神状态量表穴MMS... 目的分析烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸:醌氧化还原酶1穴NQO1雪基因多态性与认知功能减退和阿尔茨海默病穴AD雪发病的关系。方法经多聚酶链反应扩增后,用变性高效液相色谱和DNA自动测序等方法,分析来自流调人群的110例简易精神状态量表穴MMSE雪评分正常者熏21例评分低于正常但非AD者,以及65例AD患者C609T多态性位点分布频率的差异。结果MMSE评分正常组与低于正常组NQO1基因C609T位点基因型分布差异有显著性穴P<0.05雪,携带T/T或C/T基因型者患认知功能减退的危险性增高(OR=2.8熏95%CI0.96~8.18,P=0.024)。T等位基因频率在AD组(53%)显著高于对照组(38%)(OR=1.87熏95%CI1.20~2.90熏P=0.005),T/T和C/T基因型在AD组(83%)和对照组(60%)之间差异亦有显著性(OR=3.27,95%CI1.54~6.94熏P=0.001)。结论NQO1基因C609T多态位点可能是认知功能减退和散发性AD的一个共同危险因素。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 NQ01基因 基因多态性
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牛肝辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢酶cDNA的克隆及组织表达 被引量:3
10
作者 王桂玲 黄东阳 +1 位作者 刘戈飞 杜晶 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期811-815,共5页
NADP(H) dependent retinol dehydrogenase/reductase (NRDR) was an important retinoic acid synthase, which was first purified from rabbit liver in 1997. In order to study the function of the NRDR gene,the full length cDN... NADP(H) dependent retinol dehydrogenase/reductase (NRDR) was an important retinoic acid synthase, which was first purified from rabbit liver in 1997. In order to study the function of the NRDR gene,the full length cDNA of bovine NRDR was cloned. According to the conserved sequences of human, mouse and rabbit NRDR cDNA, a pair of primers was designed to amplify a 294 bp DNA fragment of bovine liver NRDR, and then the full length of NRDR cDNA (AF487454) was cloned by using 3′ RACE and 5′ RACE. All the cloned NRDR proteins consist of 260 amino acid residues and showed high identity among them. The tri peptide of human, mouse and rabbit NRDR C end was SRL and that of bovine NRDR C end was SHL, but both were considered to be peroxisomal target signal 1 (PTS1). RT PCR demonstrated that NRDR gene was expressed in liver, heart, lung, kidney, stomach and intestine, and was not found in pancreas, muscle, artery and skin. The full length bovine NRDR cDNA has been successfully cloned and the sequence was analyzed. It provided a reliable foundation to investigate the biological function of this protein. 展开更多
关键词 牛肝辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢酶 克隆 组织表达 CDNA
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人宫颈癌细胞辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接新亚型的表达及多克隆抗体制备 被引量:1
11
作者 宋旭红 梁斌 +3 位作者 刘戈飞 谢健平 李蕊 黄东阳 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期983-986,共4页
目的制备宫颈鳞癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)选择性剪接新亚型NRDRB1多克隆抗体,为NRDRB1的功能研究奠定基础。方法扩增NRDRB1开放阅读框,重组入Gateway原核表达系统pDEST14,并在大肠杆菌BL21-AI中诱导表达,制备NRDRB1... 目的制备宫颈鳞癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)选择性剪接新亚型NRDRB1多克隆抗体,为NRDRB1的功能研究奠定基础。方法扩增NRDRB1开放阅读框,重组入Gateway原核表达系统pDEST14,并在大肠杆菌BL21-AI中诱导表达,制备NRDRB1包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的NRDRB1重组蛋白作为免疫原,经肩胛骨下注射免疫新西兰白兔。斑点杂交测定抗血清效价,HiTrapProteinG柱纯化兔IgG,免疫印迹和免疫组织化学鉴定抗体特异性。结果NRDRB1在大肠杆菌BL21-AI中高效表达,回收的NRDRB1蛋白溶液浓度为0.42mg/ml。所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清。血清效价为l∶2000,对NRDRB1蛋白的检测极限是6.4ng。纯化后的NRDRB1抗体具有较高的免疫活性和特异性。结论NRDRB1原核表达载体的构建、蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备为今后研究该蛋白的功能奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶B1 基因表达 宫颈肿瘤
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兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达、纯化及活性鉴定 被引量:3
12
作者 谢健平 刘戈飞 +5 位作者 宋旭红 杜昆 李蕊 梁斌 张巧霞 黄东阳 《汕头大学医学院学报》 2007年第1期10-14,共5页
目的:用原核蛋白表达系统对兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)进行功能性表达,并对其活性进行鉴定。方法:从兔肝中克隆出NRDR全长序列,运用Gateway表达系统将其编码区序列构建到表达载体(pDEST 17)上,再转化到大肠杆菌(E.coli)(BL2... 目的:用原核蛋白表达系统对兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)进行功能性表达,并对其活性进行鉴定。方法:从兔肝中克隆出NRDR全长序列,运用Gateway表达系统将其编码区序列构建到表达载体(pDEST 17)上,再转化到大肠杆菌(E.coli)(BL21-AI)中表达出兔NRDR蛋白并鉴定其表达形式;取工程菌裂解上清通过金属离子亲和层析纯化出目的蛋白,再运用反相高效液相色谱法(HPLC)测定该酶的Km值和Vmax值。结果:构建出含兔NRDR编码区(768 bp)的表达克隆,转化到BL21-AI中表达出氨基端含6×His标签的重组兔NRDR蛋白,诱导表达4 h后目的蛋白可占总蛋白量的41.4%;经一步亲和层析得到的兔NRDR纯度为97.2%,比活性提高了64倍;经HPLC测定,该酶对视黄醛的Km值为(4.55±0.33)μmol/L,Vmax为(0.307±0.065)μmol/(min.mg)。结论:应用pDEST 17可在BL21-AI中对兔肝NRDR进行高效的功能性表达。 展开更多
关键词 辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶 表达 纯化 类视黄醇代谢
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宫颈癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶及其选择性剪接亚型真核表达载体的构建和表达 被引量:2
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作者 宋旭红 李蕊 +3 位作者 刘戈飞 梁斌 谢建平 黄东阳 《汕头大学医学院学报》 2008年第2期71-73,75,共4页
目的:构建宫颈癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)及选择性剪接亚型NRDRB1真核表达载体,并转染HeLa细胞表达融合蛋白和native蛋白。方法:分别以pDONR-NRDR、pDONR-NRDRB1载体为模板,用PCR方法扩增两端带有酶切位点的NRDR及NRD... 目的:构建宫颈癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)及选择性剪接亚型NRDRB1真核表达载体,并转染HeLa细胞表达融合蛋白和native蛋白。方法:分别以pDONR-NRDR、pDONR-NRDRB1载体为模板,用PCR方法扩增两端带有酶切位点的NRDR及NRDRB1编码区序列,酶切后连接到pCDNA3、pCMV-Myc真核表达载体上,经酶切、测序鉴定后,转染HeLa细胞16 h,Western blot检测蛋白表达情况,蛋白质谱分析鉴定表达蛋白。结果:成功构建NRDR、NRDRB1真核表达载体,转染HeLa细胞后,可表达带有Myc标签的蛋白和不带标签的native蛋白;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为NRDR和NRDRB1。结论:获得了在真核细胞中表达的NRDR、NRDRB1蛋白,为进一步研究其功能提供了实验材料。 展开更多
关键词 辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶 选择性剪接 宫颈癌 真核表达
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血清氧化-还原态的监测及其与细胞损伤的关系 被引量:3
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作者 乔小蓉 张静 +2 位作者 郑海霞 王浩毅 王树人 《四川生理科学杂志》 2004年第1期16-21,共6页
目的 :探讨如何评价体内的氧化还原状态及细胞的氧化还原态改变对细胞增殖、凋亡、损伤等的影响。方法 :测定正常人血清的NADPH/NADP+ 和GSH/GSSG比值 ,以了解该两项指标对机体氧化还原态的监测能力。并在培养的内皮细胞中加入各种浓度... 目的 :探讨如何评价体内的氧化还原状态及细胞的氧化还原态改变对细胞增殖、凋亡、损伤等的影响。方法 :测定正常人血清的NADPH/NADP+ 和GSH/GSSG比值 ,以了解该两项指标对机体氧化还原态的监测能力。并在培养的内皮细胞中加入各种浓度的氧化剂过氧化氢 (H2 O2 )和 /或还原剂N 乙酰 L 半胱氨酸(NAC) ,观察NADPH/NADP+ 和GSH/GSSG比值的变化与细胞活力及损伤之间的关系。以LDH释放率 ,细胞培养液中脂质过氧化物 (LPO)的浓度 ,细胞增殖活性、细胞凋亡率 ,观察细胞的增殖、损伤及其与氧化 还原态变化的关系。结果 :①在培养的内皮细胞中加入H2 O2 后 ,GSH/GSSG和NADPH/NADP+ 比值明显降低 ,细胞氧化还原状态偏向氧化应激方向 ,细胞出现氧化应激损伤 ;脂质过氧化物 (LPO)生成增多 ;LDH释放率增加 ;细胞增殖活力下降 ;凋亡率增高。氧化应激性损伤程度与GSH/GSSG和NADPH/NADP+ 比值呈负相关 ( p <0 .0 5 )。②在各浓度H2 O2 组中加入 0 .5mmol·L 1NAC ,GSH/GSSG和NADPH/NADP+ 比值恢复至接近对照组 ,上述氧化应激性损害也受到了不同程度的抑制 ,并在一定范围内呈量效关系。③单独加入NAC ,在高浓度NAC1mmol·L 1M和 2mmol·L 1时 ,GSH/GSSG和NADPH/NADP+ 比值明显升高 (VSControl,p <0 .0 1 ) 。 展开更多
关键词 氧化-还原 GSh/GSSG 细胞损伤 N-乙酰-L-半胱氨酸 氧化还原状态 Gsh/GSSG GSh/GSSG 脂质过氧化物 nadph 细胞增殖活性 氧化应激损伤 细胞增殖活力 内皮细胞 h2O2 细胞培养液 细胞凋亡率 应激性损害 监测能力 过氧化氢
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兔肝辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶在大肠杆菌中的表达及其对维生素K3的还原作用和产物的鉴定
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作者 肖李锋 刘戈飞 +4 位作者 宋旭红 谢健平 张巧霞 李蕊 黄东阳 《汕头大学医学院学报》 2008年第1期15-19,共5页
目的:检测兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶(NDRR)对维生素K3的催化活性并对该酶还原K3所生成的产物进行鉴定。方法:构建含6×His标签的兔NDRR的表达菌株,诱导表达并超声裂解后,通过Ni2+亲和层析纯化得到重组兔NDRR。在相对去氧隔绝空气... 目的:检测兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶(NDRR)对维生素K3的催化活性并对该酶还原K3所生成的产物进行鉴定。方法:构建含6×His标签的兔NDRR的表达菌株,诱导表达并超声裂解后,通过Ni2+亲和层析纯化得到重组兔NDRR。在相对去氧隔绝空气反应体系以及存在高浓度十二烷基磺酸钠的反应条件下,利用高效液相色谱(HPLC)对兔NDRR还原K3的催化活性进行酶动力学研究。利用化学合成,HPLC及荧光光谱扫描对其还原产物进行鉴定。结果:诱导表达后的细菌裂解上清液经一步亲和层析后得到单一酶蛋白,其对K3的比活性分别是原空白菌裂解上清液和经诱导表达后的菌裂解上清液的比活性的18.6和7.3倍。经过HPLC测定,兔NDRR对K3的Km值为30.7,Vmax0.046μmoL/(min.mg)。利用四氢硼酸钠与K3化学合成的产物进行HPLC分析,其保留时间与酶反应所产生的产物峰保留时间一致,而且反应后短时间内能利用荧光光谱扫描得到K4相应的光谱图。结论:兔NDRR对K3存在还原活性,并生成K4。 展开更多
关键词 兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶 维生素K3 维生素K4 高效液相色谱
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兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的制备
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作者 谢健平 刘戈飞 +3 位作者 宋旭红 李蕊 梁斌 杜昆 《汕头大学医学院学报》 2009年第1期26-28,共3页
目的:制备兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法:应用原核表达的兔NRDR免疫豚鼠,制备豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体,并以Western blot法分析抗体特异性。结果:免疫豚鼠获得了高效价抗血清,效价为1∶2 000时检测极限为160 n... 目的:制备兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法:应用原核表达的兔NRDR免疫豚鼠,制备豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体,并以Western blot法分析抗体特异性。结果:免疫豚鼠获得了高效价抗血清,效价为1∶2 000时检测极限为160 ng蛋白,与NRDR蛋白能特异性结合。结论:获得的多克隆抗体应用于Western blot中检测兔NRDR效果良好,为NRDR的进一步研究打下基础。 展开更多
关键词 辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶 多克隆抗体
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人睾丸细胞中一种新的辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶mRNA剪接变体
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作者 常晓兰 冯广友 《汕头大学医学院学报》 2012年第2期79-81,共3页
目的:研究辅酶II依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)在生殖细胞中的剪接亚型,并对表达蛋白进行预测分析。方法:用快速cDNA末端扩增法从人睾丸细胞株(Hs 181.Tes)中克隆NRDR全长cDNA序列;对获得的序列进行生物信息学分析,通过查找开放阅读框... 目的:研究辅酶II依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)在生殖细胞中的剪接亚型,并对表达蛋白进行预测分析。方法:用快速cDNA末端扩增法从人睾丸细胞株(Hs 181.Tes)中克隆NRDR全长cDNA序列;对获得的序列进行生物信息学分析,通过查找开放阅读框架(ORF),预测并分析剪接新亚型的蛋白质序列和功能:从Hs 181.Tes中克隆了一种新的全长1 164bp的cDNA片段,序列分析表明其属于NRDR缺失4、5外显子的截短剪接体,其ORF可编码237个氨基酸,拥有短链醇脱氢酶家族的保守模序和过氧化物体定位信号。结论:NRDR在不同细胞的基因转录表达调控具有选择性差异,进而表达不同蛋白,构成SDR家族,该新亚型可能参与生殖系统相关酶类的代谢,控制生殖细胞增殖分化。 展开更多
关键词 辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶 人睾丸细胞株hs 181.Tes 选择性剪接
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人辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶在新疆汉族妇女宫颈病变中的表达及意义
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作者 邓田园 张莉 +5 位作者 张鑫 王玉兰 刘帆 丁建花 王瑞 周瑾 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第14期2294-2297,共4页
目的:探讨人辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶在新疆汉族妇女宫颈病变中的表达及临床意义,为新疆地区宫颈癌高危人群的识别、预防及诊断提供依据。方法:依据病理诊断结果,将80例新疆地区汉族妇女宫颈组织标本分为4组,正常及慢性炎症组20例... 目的:探讨人辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶在新疆汉族妇女宫颈病变中的表达及临床意义,为新疆地区宫颈癌高危人群的识别、预防及诊断提供依据。方法:依据病理诊断结果,将80例新疆地区汉族妇女宫颈组织标本分为4组,正常及慢性炎症组20例、CINⅠ组20例、CINⅡ-Ⅲ组20例、宫颈鳞癌组20例,采用免疫组化SP法检测不同级别宫颈病变中DHRS4基因的表达。结果:DHRS4基因在正常及慢性炎症组、CINⅠ组、CINⅡ-Ⅲ组、宫颈鳞癌组标本中阳性表达有统计学意义(P<0.05),分别进行组间比较,正常宫颈及慢性炎症组与宫颈CINⅠ组有统计学差异(P<0.05),正常宫颈及慢性炎症组与宫颈CINⅡ-Ⅲ组有统计学差异(P<0.05),正常宫颈及慢性炎症组与宫颈癌组有统计学差异(P<0.05),宫颈CINⅠ组与宫颈癌组无统计学差异(P>0.05),CINⅡ-Ⅲ组与宫颈癌组无统计学差异(P>0.05)。结论:DHRS4基因在人体宫颈鳞癌组织中高表达,且随着宫颈病变的进展表达阳性率逐渐升高,可能与宫颈疾病及其癌变的发生有关。 展开更多
关键词 宫颈鳞癌 宫颈病变 人辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶 DhRS4基因 免疫组化
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人肝癌细胞辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接新亚型的鉴定和分析
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作者 钱程 刘婷 +2 位作者 闫银侠 宋旭红 黄东阳 《汕头大学医学院学报》 2010年第3期138-141,共4页
目的:鉴定人肝癌细胞HepG2中辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)的选择性剪接新亚型DHRS4L1A1,并检测其在不同细胞中的表达情况。方法:采用快速cDNA末端扩增方法,从HepG2中克隆选择性剪接亚型的cDNA序列;通过查找开放阅读框架,预测... 目的:鉴定人肝癌细胞HepG2中辅酶Ⅱ-依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)的选择性剪接新亚型DHRS4L1A1,并检测其在不同细胞中的表达情况。方法:采用快速cDNA末端扩增方法,从HepG2中克隆选择性剪接亚型的cDNA序列;通过查找开放阅读框架,预测并分析剪接新亚型的蛋白质序列和功能;用半定量RT-PCR法检测8种不同细胞株中新剪接亚型的相对表达量。结果:DHRS4L1A1全长1 117 bp,为NRDR选择性剪接新亚型;该亚型在卵巢癌细胞SKOV3中的表达量显著高于其他细胞。结论:DHRS4L1A1表达的蛋白属于SDR家族,该亚型可能参与生殖系统相关酶类的代谢。 展开更多
关键词 nadp(h)-依赖性视黄醇脱氢/还原酶 选择性剪接 hEPG2细胞
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人辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶在宫颈癌中的研究进展
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作者 邓田园 周瑾 张艺峰 《海南医学》 CAS 2017年第15期2502-2504,共3页
视黄酸(rRA)是维生素A的活性代谢产物,在胚胎发育和细胞的生长及分化过程中发挥重要作用。视黄酸相关物质与肿瘤细胞的分化、增殖或凋亡等密切相关。作为视黄酸代谢酶的一种,人辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)被证实了其剪接的异... 视黄酸(rRA)是维生素A的活性代谢产物,在胚胎发育和细胞的生长及分化过程中发挥重要作用。视黄酸相关物质与肿瘤细胞的分化、增殖或凋亡等密切相关。作为视黄酸代谢酶的一种,人辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)被证实了其剪接的异常及蛋白酶活性变化和宫颈鳞状细胞癌的发生和发展密切相关。本文,我们将详述NRDR的研究现状和未来前景。 展开更多
关键词 维甲酸 人辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶 宫颈癌
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