RNAi沉默整合素连接激酶基因表达对膀胱癌细胞BIU-87增殖的影响

为了研究整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因沉默对膀胱癌BIU-87细胞系增殖产生的影响,应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,合成了4条针对ILK的miRNA干扰载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-ILK-miR(miR-1、miR-2、miR-3、miR-4)作为实验组,另设1条为阴性对照组,分别转染膀胱癌BIU-87细胞系.经杀稻瘟菌素持续压力筛选和有限稀释法培养获得稳定转染细胞株.采用RT-PCR和Western-blot检测各组对ILK基因的抑制作用,实验组miRNA对BIU-87细胞ILK mRNA和蛋白的表达均有明显的抑制作用,以miR-3组抑制效应最强.通过流式细胞术检测发现,miR-3组细胞周期G0/G1期细胞所占比例较未转染组明显增加,而S期则明显减少(P<0.05).四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测发现,转染组细胞在体外的增殖能力较对照组明显下降(P<0.05).证明RNA干扰技术能有效抑制靶基因ILK的表达,进而抑制了膀胱癌细胞系BIU-87的增殖.

整合素连接激酶、醌氧化还原酶-1和增殖细胞核抗原在肝细胞癌中的表达及意义

目的检测肝细胞癌术后组织中整合素连接激酶(ILK)、NADPH:醌氧化还原酶(NQO)-1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,关注三者的关系及临床意义。方法 79例肝细胞癌术后组织及临床资料作为观察组,55例正常肝组织作为对照组,采用免疫组化方法检测两组中ILK、NQO-1和PCNA的表达。结果肝细胞癌中ILK、NQO-1和PCNA表达阳性率明显高于对照组,观察组中ILK、NQO-1和PCNA的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、肿瘤最大径及Ki67的表达密切相关。相关性分析显示ILK和PCNA、NQO-1和PCNA的表达均具有正相关性。观察组中ILK、NQO-1和PCNA高表达患者生存时间明显短于低表达患者。结论肝细胞癌中ILK、NQO-1和PCNA高表达,对病变的进展有重要影响,术后联合检测ILK、NQO-1和PCNA的表达可能对判断生物学行为和生存时间有一定价值。ILK、NQO-1对PCNA表达的增殖有直接关系,这可能是两种蛋白的作用机制。

整合素连接激酶与肿瘤

整合素连接激酶 (ILK )是一种新发现的Ser/Thr蛋白激酶。ILK能够通过与整合素 β1亚单位的结合介导细胞与胞外基质的连接 ,以依赖于PI3K的方式激活 ,并通过磷酸化下游底物PKB/AKT、GSK3等使胞外信号得以向下游传递 ,对细胞的生长、分化、迁移等进行调控。某些蛋白磷酸酶如PTEN能够对ILK的活性进行抑制。由于ILK在胞内胞外信号传递中起着关键的作用 ,并且抑制ILK的活性能够导致细胞周期的停滞和细胞程序死亡的启动 。

ILK、Cyclin D1及MMP-9在膀胱癌中的表达及意义

目的通过研究膀胱癌中ILK、Cyclin D1及MMP-9的表达,探讨它们在膀胱癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测ILK、Cyclin D1及MMP-9在58例膀胱癌和20例癌旁正常组织中的表达,并对检测结果进行分析。结果 ILK、Cyclin D1及MMP-9在膀胱癌及正常组织中的表达分别为62.1%和15.0%,70.7%和20.0%,65.5%和15.0%(P<0.05)。同时,其阳性表达随着肿瘤分化程度的降低呈上升趋势(P<0.05)。ILK与Cyclin D1和MMP-9的表达均呈正相关(P<0.05)。结论 ILK、Cyclin D1及MMP-9蛋白在膀胱癌中均呈过表达,且与病理分化程度密切相关,提示其参与膀胱癌的发生及转移,是肿瘤病理学分期分级的有效参考指标,联合检测有助于膀胱癌的临床诊断与预后。

ILK、E-cadherin及Twist在膀胱癌中的表达及意义

目的通过研究膀胱癌中ILK、E-cadherin及Twist的表达,探讨其在膀胱癌发生、发展中的作用。方法运用免疫组织化学SP法检测ILK、E-cadherin及Twist在62例膀胱癌和25例癌旁正常组织中的表达,并分析其相关性。结果在膀胱癌和癌旁组织中,ILK的表达率分别为54. 8%(34/62)和16. 0%(4/25),两组相比差异具有统计学意义(χ~2=10. 9,P<0.05); E-cadherin的阳性表达分别为32. 3%(20/62)和72. 0%(18/25),两组相比差异具有统计学意义(χ~2=11. 4,P<0.05);Twist的阳性表达分别为64. 5%(40/62)和4. 0%(1/25),两组相比差异具有统计学意义(χ~2=26. 2,P<0.05)。同时,ILK和Twist在高分化膀胱癌中的表达明显低于低分化癌,两组相比差异具有统计学意义(均P<0.05),而E-cadherin在高分化膀胱癌中的表达明显高于低分化癌(P<0.05)。膀胱癌中E-cadherin与ILK和Twist的表达均呈负相关;而Twist与ILK表达呈正相关。结论 ILK、E-cadherin及Twist蛋白在膀胱癌中均有异常表达,并与膀胱癌的分化程度密切相关,ILK、E-cadherin及Twist可能参与膀胱癌的发生、发展。

ILK与NOS在SACC中的表达及意义

目的:通过观察整合素连接激酶(Integrin-linked kinase,ILK)与一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)在涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)中的定位及表达,探讨ILK与NOS在SACC中的作用。方法:对2006-2012年吉林医药学院附属医院病理科30例SACC存档蜡块,和25例非肿瘤疾病的正常涎腺组织(对照组)行免疫组化分析,观察ILK与NOS在SACC中的表达分布情况。利用SPSS13.0统计软件分析ILK与NOS的差异性及相关性。结果:在SACC中,ILK阳性率为76.67%,e NOS阳性率为63.33%,i NOS阳性率为80%。ILK实验组与对照组比较,P<0.05;e NOS实验组与对照组比较,P>0.05;i NOS实验组与对照组比较,P<0.05。ILK与e NOS在SACC中的表达不存在相关性;ILK与i NOS在SACC中的表达存在正相关,r=0.512。结论:ILK与i NOS在SACC中的表达存在正性相关,可能通过i NOS信号转导途径启动VEGF的表达,促进肿瘤早期的血管发生和形成。

整合素连接激酶在妇科肿瘤方面的研究

整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)通过与整合素β1亚单位的结合,与整合素共同介导细胞与细胞外基质(ex-tracellular matrix,ECM)的连接,对细胞的生长、增殖、分化、迁移及细胞凋亡等进行调控,在肿瘤的发生、发展中发挥重要的作用.近年来,ILK被许多学者关注,越来越多的研究表明其与恶性肿瘤关系密切.在此主要介绍ILK的生物学特性及ILK与肿瘤关系的研究进展,特别是其在妇科肿瘤方面的研究情况.

ILK、ER在子宫内膜癌组织中的表达及相关性分析

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)、雌激素受体(ER)在子宫内膜癌组织中的表达及相关性。方法:应用免疫组化SP法,检测60例子宫内膜癌、34例癌旁组织和20例正常子宫内膜标本中ILK、ER蛋白的表达情况。结果:①ILK蛋白在子宫内膜癌组织的阳性表达率为65.0%,显著高于正常内膜组织(5.0%)及癌旁组织(8.8%)(P<0.001)。②ER在正常子宫内膜及癌旁组织中的阳性表达率分别为100.0%、94.1%,均高于其在子宫内膜癌组织中的表达(50.0%)(P<0.001)。③ILK随着晚临床分期、组织低分化、深肌层浸润及发生淋巴结转移表达增高(P<0.05),ER表达与组织学分级、肌层浸润程度有关(P<0.05)。④ILK与ER在子宫内膜癌组织中的表达呈负相关(r=0.314,P=0.014)。结论:ILK在子宫内膜癌的发生、发展过程中发挥着重要作用,ER随细胞恶变而发生改变。对ILK、ER表达水平的联合检测在子宫内膜癌的诊断、治疗及判断预后方面有一定的指导意义。

地鳖虫醇提物对肿瘤细胞侵袭与凋亡的作用机制

目的探究地鳖虫醇提物(ESWE)对前列腺癌细胞的迁移、侵袭、凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养前列腺癌细胞,通过划痕实验测定其对细胞运动能力的影响,transwell小室做细胞迁移侵袭能力测定,吖啶橙溴乙锭(AO/EB)染色观察其对前列腺癌细胞凋亡的影响,Western印迹(WB)检测整合素(ITG)β1/ITG连接激酶(ILK)/纤维型肌动蛋白(F-actin)通路相关基因的表达。结果通过毒性试验得出ESWE对前列腺癌细胞的IC50值为6.265 mg/ml;随ESWE浓度增加,细胞运动能力、迁移与侵袭能力逐渐减弱;ITGβ1、ILK mRNA表达量呈递减趋势(P<0.05);半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3增加表达,促进凋亡。骨架蛋白F-actin重构受阻并未影响F-actin mRNA的表达。结论ESWE通过抑制ITGβ1的表达从而调节F-actin重构,抑制PC3细胞迁移与侵袭,并上调其下游caspase3蛋白表达促进细胞凋亡。