NADPH氧化酶1在胆囊癌组织中的表达及临床意义

目的探讨NADPH氧化酶1(NOX1)在胆囊癌组织中的表达及其临床意义。方法运用实时荧光定量PCR(q PCR)及免疫组化分别检测正常胆囊组织及胆囊癌组织中NOX1 m RNA及蛋白表达量,并分析其表达量与胆囊癌患者临床病理学资料及生存预后之间的关系。结果 (1)q PCR及免疫组化显示,胆囊癌组织中NOX1 m RNA及蛋白表达量较正常胆囊组织显著升高,差异具有统计学意义(均P<0.05);(2)胆囊癌组织中NOX1蛋白表达水平与患者有无吸烟、胆囊结石、血清CA19-9水平、淋巴结转移、肿瘤分级及TNM分期相关(均P<0.05);(3)淋巴结及远处转移、TNM分期、手术方式及NOX1蛋白表达水平是影响胆囊癌患者预后的独立危险因素。结论 NOX1在胆囊癌组织中表达显著升高,有望成为胆囊癌恶性生物学行为的重要指标。

机械牵张力上调小鼠血管平滑肌细胞蛋白二硫键异构酶和NADPH氧化酶1表达的观察

目的观察机械牵张力诱导小鼠血管平滑肌细胞（VSMC）蛋白二硫键异构酶（PDI）表达，并初步探讨其与NADPH氧化酶1（NOXl）表达的关系。方法体外静息培养状态的VSMC给予不同时间和强度的机械牵张力刺激，用免疫印迹法检测细胞内PDI和NOXl的表达水平。结果机械牵张力可诱导VSMC内PDI表达增加，呈时间和强度依赖性；NOXl的表达水平也呈同样方式升高。结论机械牵张力刺激通过同时上调PDI和NOXl表达，参与氧化应激的过程。本研究为临床上与生物机械力增加相关的疾病（如高血压、静脉移植性粥样硬化）致病机制的研究提供了有用资料。

NOX1在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤和炎症中的作用研究

目的:探索NADPH氧化酶1(NOX1)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的肺泡上皮细胞A549氧化损伤和炎症中的作用。方法:以real-time PCR和Western blot法测定TNF-α处理后肺泡上皮细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达水平。在肺泡上皮细胞中转染NOX1 si RNA及其阴性对照,以TNF-α诱导以后,用real-time PCR和Western blot测定细胞中NOX1水平。硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA法检测细胞培养液中的白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白cleaved caspase-3的水平。结果:TNF-α诱导处理后A549细胞中NOX1 m RNA和蛋白水平均升高(P <0. 05),NOX1 si RNA转染可以下调细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达(P <0. 05),转染si RNA阴性对照对细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达没有影响。TNF-α处理后细胞中MDA含量升高,SOD活性降低,细胞分泌的IL-4、IL-6和IL-1β增多,细胞凋亡率和凋亡蛋白cleaved caspase-3水平均升高,与没有经TNF-α处理的细胞比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。下调NOX1的细胞经TNF-α诱导后,细胞中MDA含量降低,SOD活性升高,细胞分泌的IL-4、IL-6和IL-1β减少,凋亡率及凋亡蛋白cleaved caspase-3水平降低,与只经过TNF-α诱导处理的细胞比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:TNF-α诱导肺泡上皮细胞表达NOX1。下调NOX1表达可减少细胞氧化损伤和炎症因子分泌,减少细胞凋亡。

NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子转录活性的影响

目的:构建含NADPH氧化酶1(NOX1)近端启动子区的pGL3萤光素酶报告基因载体及缺失NF-κB结合元件的相应载体,分别测定其相应活性,探讨NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子区转录活性的影响。方法:采用PCR法克隆NOX1启动子区序列(1 415 bp),将目的片段与pGL3萤光素酶载体分别双酶切、纯化后进行连接(pGL3-NOX1-1415),测序鉴定;应用Alibaba 2.1软件分析NOX1近端启动子区,获取NF-κB结合元件;重叠PCR法将含该元件的启动子区域(88 bp)缺失,并构建相应载体(pGL3-NOX1-1327)。将两载体分别与pRL-TK内参质粒瞬时转染进入A549细胞,采用TNF-α(10μg/L)刺激细胞24 h,萤光酶标仪检测A549细胞的萤光素酶活性。结果:测序鉴定结果提示pGL3-NOX1-1415及NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327载体构建成功;细胞实验显示,TNF-α刺激后,转染pGL3-NOX1-1415的A549细胞萤光素酶活性明显强于对照组(P<0.05),而转染NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327的细胞萤光素酶活性明显低于转染pGL3-NOX1-1415组(P<0.05)。结论:TNF-α诱导A549细胞NOX1基因活化与NF-κB密切相关,NF-κB参与了TNF-α诱导的NOX1基因启动子的转录调控。

siRNA沉默Nox1基因抑制胃癌细胞的生长

目的:探讨siRNA沉默NADPH氧化酶1(Nox1)基因表达对胃癌细胞的生长抑制作用。方法:合成Nox1 siRNA,采用实时定量PCR和Western blotting观察Nox1 siRNA转染后胃癌SGC-7901细胞Nox1 mRNA及相应蛋白表达的变化;用CCK-8细胞增殖实验、流式细胞检测技术分别检测胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的变化。结果:转染Nox1 siRNA后的胃癌SGC-7901细胞Nox1 mRNA及蛋白表达明显受抑制。与对照组相比,干扰组SGC-7901细胞生长明显变缓(P<0.05),细胞凋亡率明显增高(P<0.01)。结论:Nox1 siRNA可明显下调靶基因Nox1的表达,在体外可抑制胃癌SGC-7901细胞的生长并促进其凋亡。

动情期和动情间期小鼠输卵管中氧化应激和抗氧化基因表达差异

目的观察昆明(Kunming,KM)小鼠输卵管中氧化应激和抗氧化基因的表达是否随动情周期而改变。方法分别取动情期和动情间期小鼠输卵管进行RNA提取,用PCR芯片检测氧化应激和抗氧化基因表达的差别,然后用Real Time PCR对差异表达基因进一步验证。结果与动情间期比较,动情期小鼠输卵管中NADPH氧化酶1(NADPH oxidase1,NOX1)、谷胱甘肽过氧化物酶2(glutathion peroxidase 2,GPX2)、超氧化物歧化酶3(superoxide dismutase 3,SOD3)、一氧化氮合酶2(nitric oxide synthase 2,NOS2)等4个基因表达上调。结论动情期小鼠输卵管中NOX1、GPX2、SOD3和NOS2等4个基因表达上调,提示其可能参与维持动情期小鼠输卵管腔内适度的活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)和一氧化氮(nitric oxide,NO)水平,为卵子受精和早胚发育提供必要第二信号分子。

Galectin-9、NOX-1 mRNA在胆囊癌中表达变化及与癌细胞生物学行为指标的关系

目的探究半乳糖凝集素9(Galectin-9)、NADPH氧化酶1(NOX-1)mRNA在胆囊癌中表达变化及与癌细胞生物学行为指标的关系。方法选取本院胆囊癌患者84例,检测对比癌组织与与距离癌组织边缘5 cm左右的癌旁正常组织中Galectin-9、NOX-1 mRNA相对表达量,分析癌组织中Galectin-9 mRNA与NOX-1 m RNA关联性及两者与临床病理特征、癌细胞生物学行为指标的关系。结果癌组织中Galectin-9 mRNA相对表达量低于癌旁正常组织,NOX-1 mRNA相对表达量高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中Galectin-9 mRNA与NOX-1 mRNA呈负相关(r=-0.688,P<0.001);Galectin-9 m RNA与临床分期、淋巴结转移、分化程度显著相关(P<0.05);NOX-1 mRNA与临床分期、淋巴结转移、分化程度、肿瘤浸润深度显著相关(P<0.05);Galectin-9 mRNA与p-STAT3、Bcl-2、MMP-7 mRNA呈负相关,NOX-1 m RNA与p-STAT3、Bcl-2、MMP-7 mRNA呈正相关(P<0.05)。结论Galectin-9 mRNA下调、NOX-1 mRNA上调可能是胆囊癌发生的重要机制,且两者表达水平与临床病理特征、生物学行为指标密切相关,能为临床诊治提供有效信息。

肠易激综合征患者肠道菌群特征和NOX1表达的研究

背景:研究表明肠道菌群、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)在慢性内脏痛形成中起有重要作用,但其在肠易激综合征(IBS)中的作用尚不明确。目的:探讨IBS患者肠道黏膜菌群特征与NOX1表达的相关性。方法:收集2017年7月—2017年12月长治医学院附属和平医院收治的符合罗马Ⅳ标准的IBS患者和健康受试者结肠黏膜标本,利用高通量测序方法检测肠道黏膜菌群,并分析菌群物种多样性和丰度。采用免疫组化法测定结肠黏膜NOX1表达。结果:IBS组和对照组肠道黏膜菌群以拟杆菌门、变形菌门和厚壁菌门为主。IBS-D组、IBS-U组和对照组之间菌群多样性相比差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,IBS组Tissierella丰度明显增加(H=6.688,P<0.05),Granulicatella丰度明显降低(H=6.212,P<0.05)。与对照组和IBS-U组相比,IBS-D组Porphyromonas、Marmoricola、Cardiobacterium丰度明显增加(P均<0.05)。与对照组相比,IBS-U组、IBS-D组NOX1表达增加(P<0.01)。肠黏膜NOX1表达与Tissierella丰度存在正相关性(r=0.611,P<0.05),但与Granulicatella丰度无明显相关性(r=0.253,P=0.376)。Tissierella、Granulicatella丰度、NOX1表达与IBS严重程度无明显相关性(P>0.05)。结论:IBS患者与健康受试者的肠道黏膜菌群多样性无明显变化,部分菌群丰度发生改变,且不同亚型的菌群丰度变化不同。IBS患者结肠黏膜NOX1表达上调,且与Tissierella丰度存在一定的相关性。

NOX-1基因及其在恶性肿瘤中的作用和分子机制

NADPH氧化酶-1(NADPH oxidase-1,NOX-1)是NADPH氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NADPH oxidase,NOX)家族成员之一。NOX是调节体内氧化还原反应的关键酶,也是最早被确认的产生活性氧类(reactive oxygen species,ROS)的体系。一方面,少量的ROS可增强免疫防御,参与细胞分化、增殖、凋亡及细胞间信号通路的调控;另一方面,过多的ROS可引起氧化应激,致使细胞生理功能紊乱,对加速炎症、纤维化和肿瘤形成等病理过程起着重要作用。作为ROS主要来源之一,NOX-1在肿瘤形成过程中扮演重要角色。本文综述NOX-1及其在肿瘤中的作用和分子机制研究进展,以期探寻胆囊癌等恶性肿瘤诊治和预后判断的有效靶标。

香荆芥酚对药物性耳聋模型大鼠的治疗作用及NOX3/STAT1信号通路的影响

目的:探讨香荆芥酚对药物性耳聋模型大鼠的治疗作用及NADPH氧化酶3(NOX3)/转录活化因子1(STAT1)信号通路的影响。方法:72只Wistar大鼠随机分成4组:正常对照组、模型组、香荆芥酚低、高剂量组(1.25,2.5 mg·kg^(-1)),每组18只。除正常对照组外,其余各组建立顺铂耳聋模型,建模成功后,香荆芥酚低、高剂量组用相应剂量药物灌胃治疗,正常对照组和模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液,连续给药4周。给药结束后,测定大鼠听性脑干反应(ABR)阈值,电镜观察大鼠耳蜗组织改变,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法及蛋白免疫印迹法(WB)法测定耳蜗组织NOX3、STAT1 mRNA及蛋白表达水平。结果:模型组ABR阈值水平、耳蜗组织NOX3、STAT1 mRNA和蛋白水平显著高于正常对照组(P<0.05);香荆芥酚低、高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织NOX3、STAT1 mRNA和蛋白水平显著低于模型组(P<0.05),且香荆芥酚高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织NOX3、STAT1 mRNA和蛋白水平显著低于香荆芥酚低剂量组(P<0.05)。正常对照组耳蜗毛细胞结构正常;模型组耳蜗内、外毛细胞排列紊乱,与螺旋神经节细胞周围突结合出现裂隙;香荆芥酚高剂量组耳蜗内、外毛细胞排列趋于正常,与螺旋神经节细胞周围突结合处仍然有裂隙,但裂隙较小;香荆芥酚低剂量组仍然可见耳蜗内、外毛细胞排列紊乱。结论:香荆芥酚可降低药物性(顺铂)耳毒性,其机制可能与香荆芥酚抑制药物性耳聋模型大鼠耳蜗组织中NOX3、STAT1 mRNA和蛋白的表达进而抑制NOX3/STAT1炎症通路的激活有关。

主动脉夹层血管壁中氧化应激蛋白NOX1表达及意义

目的：探讨主动脉夹层（aortic dissection,AD）血管组织中氧化应激蛋白NOX1的表达及意义。方法：收集2014年~2015年在武汉大学人民医院AD患者升主动脉血管组织标本（AD组）及多器官捐献患者升主动脉血管组织标本（对照组）各12例。采用维多利亚蓝染色观察主动脉中膜弹性纤维形态结构;应用SP免疫组织化学法及Western blot法对标本组织中的NOX1进行检测分析。结果：AD组主动脉中膜弹性纤维形态和排列不规则、破碎、丢失,结构紊乱。免疫组织化学显示NOX1阳性表达见于主动脉壁平滑肌细胞胞质中,AD组与对照组比较,NOX1表达明显升高。Western blot蛋白印迹示AD组NOX1表达明显增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：NOX1在AD主动脉中膜中表达上调,可能在AD的发生中发挥作用。

矢车菊素-3-葡萄糖苷通过降低STAT3活化抑制TNF-α诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖

【目的】探讨矢车菊素-3-葡萄糖苷(C3G)对TNF-α诱导的血管平滑肌增殖的影响及可能的机制。【方法】C57BL/6J小鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)购于ATCC,体外培养后以C3G对细胞进行预处理后观察TNF-α的促细胞增殖作用;Dihydroethidium(DHE)荧光染色检测VSMC在TNF-α作用下的活性氧(ROS)生成情况;实时定量PCR检测细胞内NADPH氧化酶活化蛋白1(NoxA1)的mRNA水平;蛋白质印迹法检测细胞内NoxA1、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3及β-actin的表达水平。统计学方法采用单因素方差分析。【结果】C3G预处理能够抑制TNF-α诱导的VSMC增殖,该作用呈现剂量、时间依赖性。联合应用50μmol/L C3G及100μmol/L apocynin显著减少TNF-α诱导ROS的生成。C3G联合apocynin较C3G或apocynin单独孵育更能显著抑制TNF-α处理下VSMC内NoxA1基因的表达及STAT3蛋白的磷酸化。应用ROS清除剂触媒(catalase 2 000 U/mL)能显著抑制TNF-α诱导的VSMC增殖及STAT3蛋白活化。【结论】C3G对抗TNF-α诱导VSMC增殖的机制很可能是通过削弱NoxA1导致的ROS生成,从而抑制STAT3蛋白的激活。

高血糖状态结直肠癌相关基因的验证及其诊疗效能评估

目的验证高血糖状态结直肠癌相关基因表达并评估其诊断价值。方法收集109例结直肠癌患者肿瘤组织、远端正常肠黏膜组织及外周血样本、30例糖尿病患者及30名健康志愿者外周血样本,采用实时荧光定量PCR法检测上述样本葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1 (NOX1)、癌胚抗原相关的细胞黏附分子5(CEACAM5)、热休克蛋白60 (HSP60)、组蛋白去乙酰化酶1 (HDAC1)基因mRNA表达,采用Pearson相关性分析基因表达与临床病理参数的关联;采用诊断试验方法计算上述基因在结直肠癌患者血清中表达的灵敏度、特异度、准确度、预测性、正确指数、似然比,绘制受试者工作特征曲线,并计算受试者工作特征曲线下面积,评价多基因联合检测的诊断效能。结果 GRP78 (P=0. 001)、NOX1 (P=0. 022)、CEACAM5 (P=0. 000)、HSP60 (P=0. 044)、HDAC1 (P=0. 047)基因mRNA表达分别与空腹血糖状态呈显著正相关;与正常血糖状态结直肠癌肿瘤组织及血清相比,高血糖状态结直肠癌肿瘤组织及血清中的NOX1 (P=0. 000,P=0. 008)及HDAC1 (P=0. 000,P=0. 037) mRNA表达均显著增高; NOX1mRNA表达与结直肠癌肿瘤直径呈显著正相关(P=0. 013),HDAC1 mRNA表达与结直肠癌发病部位(P=0. 049)、原发灶浸润深度(P=0. 025)、TNM分期(P=0. 042)均呈显著正相关; NOX1、CEACAM5、HDAC1的受试者工作特征曲线下面积分别为0. 931、0. 852、0. 860 (P均=0. 000); NOX1、HDAC1 mRNA在高血糖状态结直肠癌患者血清中表达的特异度、准确度及阴性预测值均在90%以上。联合检测NOX1、CEACAM5、HDAC1表达的灵敏度为98. 82%,特异度为99. 93%。结论联合检测高血糖状态结直肠癌相关基因可提高高血糖人群早期筛查结直肠癌的诊断效能。