NADPH氧化酶4在心血管损伤中的作用机制

心血管结构和功能损伤是许多心血管疾病的重要病理基础,许多研究表明氧化应激在缺血性心脏病、动脉粥样硬化、高血压等诸多病理性心血管损伤中发挥重要作用。NADPH氧化酶(Nox)是调控氧化还原信号的关键酶,而血管内的活性氧主要来源于Nox4。随着研究的不断深入,发现Nox4在不同阶段或不同刺激下会发挥不同甚至截然相反的作用,如双向调节动脉粥样硬化的进展、双向作用影响血压等。现总结Nox4在不同心血管损伤中的不同影响及作用机制,为后续的研究提供一定的理论基础。

姜黄素对大鼠肝纤维化的保护作用及其对肝脏NADPH氧化酶4表达的影响

目的:探讨姜黄素对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的影响及姜黄素能否抑制肝脏NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)的表达。方法:腹腔注射CCl4(每周2次,共6周)诱导SD大鼠肝纤维化模型。将SD大鼠随机分成4组:正常对照组(n=10)、单纯给药组(n=10)、模型对照组(n=15)和姜黄素预防组(n=15),姜黄素给药剂量为200 mg/kg体质量。检测血清中ALT、AST及活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的水平;肝损伤和肝纤维化评估采用肝组织HE染色与天狼星红染色;分别用实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫组织化学方法检测肝组织NOX4的表达。结果:姜黄素能减轻CCl4诱导后大鼠的肝损伤与肝纤维化,抑制血清ROS的产生。与模型对照组相比,姜黄素预防组的肝纤维化大鼠肝脏中NOX4 mRNA与蛋白表达水平显著降低。结论:姜黄素能减轻CCl4诱导大鼠发生的肝损伤与肝纤维化,其效应可能与抑制肝脏NOX4过表达有关。

姜黄素对大鼠角膜碱烧伤新生血管和NADPH氧化酶4表达的影响

目的研究姜黄素对大鼠角膜碱烧伤新生血管的抑制作用和对角膜NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4)表达的影响。方法选用标准化清洁级雄性SD大鼠24只,随机分为4组,每组6只,右眼为实验眼。A组为空白对照组,不做任何处理,B组为碱烧伤模型组,C组为姜黄素治疗组,D组为二甲基亚砜(DMSO)对照组。B、C和D组分别以直径3 mm的圆形滤纸片浸入1 mol/L Na OH溶液中20 s,均匀的贴于大鼠右眼角膜中央40 s,制造大鼠角膜碱烧伤模型,B组结膜下注射生理盐水0.1 ml,C组注射姜黄素溶液0.1 ml,D组注射姜黄素溶剂DMSO0.1 ml,均隔天注射1次,注射7次。第3天、第7天、第10天、第14天裂隙灯下观察并照相记录角膜新生血管(CNV)生长情况,计算CNV面积,数据做统计学分析。第14天处死所有大鼠,摘取右眼球进行石蜡包埋切片,H-E染色观察角膜形态学变化,免疫组化法(S-P)观察角膜NOX4表达,计算机彩色图像分析软件计算平均光密度值,数据做统计学分析。结果 C组新生血管第14天时明显减少退化,角膜透亮,CNV面积和B组比较有统计学差异;H-E染色C组角膜基质层新生血管减少退化;免疫组化A组NOX4仅在角膜上皮层和内皮层微量表达,B组较A组明显表达,C组和B组比较表达下降有统计学差异,D组和B组比较无统计学差异。结论姜黄素可以有效的抑制大鼠角膜碱烧伤新生血管,其效应与抗氧化抑制NOX4表达有关。

姜黄素对大鼠肝星状细胞中TGF-β调节的NADPH氧化酶4的激活及Smad信号通路的影响

目的研究姜黄素潜在的抗纤维化作用,以及转化生长因子β(TGF-β)诱导大鼠肝星状细胞(HSC-T6)激活的机制。方法不同浓度的姜黄素(0、5、10、20、40μmol/L)处理HSC-T6后,用MTT法测定其对HSC-T6增殖作用的影响;用RT-PCR法检测其mRNA水平的表达;用Westem blot法检测表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞外基质主要成分α1I胶原(Col1α1)、NADPH氧化酶4(NOX 4)、Smad 2、Smad 3及其磷酸化的水平。结果 40μmol/L的姜黄素组刺激HSC-T6 48 h后,其抑制率达到最大,显著低于仅TGF-β1刺激组、5、10及20μmol/L姜黄素组(P<0.05)。姜黄素可显著降低激活型HSC-T6的α-SMA、α1I胶原mRNA与蛋白表达,从而可以降低细胞外基质的沉积;有效降低了NOX 4的蛋白水平,减少了活性氧的水平;还明显降低Smad2、Smad 3的磷酸化程度,呈浓度依赖性。结论姜黄素在体外能够明显地抑制HSC-T6激活,对肝纤维化的发生发展具有一定抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β诱导的NOX4的激活及Smad信号通路有关。

NADPH氧化酶4调控组蛋白脱乙酰酶4在内皮素1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大中的作用

目的:探讨NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)在体外大鼠心肌细胞肥大中的作用及其信号机制。方法:分离SD乳大鼠原代心肌细胞,通过内皮素1(endothelin-1,ET-1;0.1μmol/L)诱导建立体外大鼠心肌细胞肥大模型,采用NOX4抑制剂GKT137831抑制肥大心肌细胞中NOX4表达。实验分为空白对照组、GKT137831组、ET-1组和GKT137831+ET-1组。采用RT-qPCR检测心肌细胞肥大标志物心房钠尿因子(atrial natriuretic factor,ANF)和β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)的mRNA表达水平。采用二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)染色检测心肌细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。采用Western blot法检测NOX催化亚基NOX4和调节亚基p47^(phox)的蛋白表达,以及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)和组蛋白脱乙酰酶4(histone deacetylase 4,HDAC4)的磷酸化水平。结果:ET-1可以诱导体外大鼠心肌细胞肥大,GKT137831显著抑制了ET-1诱导的心肌肥大,降低了心肌细胞表面积及肥大标志物ANF和β-MHC的mRNA表达水平(P<0.01)。GKT137831抑制了NOX中催化亚基NOX4和调节亚基p47^(phox)的蛋白表达(P<0.05或P<0.01),降低了ET-1诱导的心肌细胞中ROS的生成(P<0.05或P<0.01)。GKT137831抑制了ET-1诱导的心肌细胞中Akt、GSK-3β和HDAC4蛋白的磷酸化(P<0.05或P<0.01)。结论:抑制NOX4减轻了ET-1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大,该作用可能与其抑制肥大信号通路Akt/GSK-3β的激活,进而抑制转录因子HDAC4蛋白的磷酸化有关。

NADPH氧化酶4在高糖促进HUVECs内活性氧产生机制中的作用

目的:研究在高浓度葡萄糖刺激状态下,人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内活性氧的主要来源。方法:Ⅱ型胶原酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞,流式细胞术检测细胞内活性氧的生成,RT-PCR及Westernblot检测细胞内NADPH氧化酶4(NOX4)的表达。结果:高糖处理HUVECs后细胞内ROS升高、NOX4表达明显上调;NOX抑制剂DPI能够抑制NOX4表达的上调和细胞内ROS的升高。结论:高糖处理HUVECs时细胞内ROS升高主要来源于NOX4。

NADPH氧化酶4在骨癌痛模型大鼠背根神经节中的作用

目的:研究NADPH氧化酶4(Nox4)在骨癌痛(CIBP)大鼠背根神经节(DRG)中的表达。方法:48只成年雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、骨癌痛组(CIBP)、空病毒对照组(Lenti-NC)与Nox4基因沉默组(Lenti-shNox4)。通过鞘内注射方法给予大鼠重组慢病毒处理,通过胫骨骨髓腔接种Walker256细胞的方法建立大鼠骨癌痛模型,通过胫骨HE染色及行为学检测鉴定大鼠CIBP模型,应用real time RT-PCR检测大鼠DRG中Nox4 mRNA的表达,利用Western Blot和免疫组织荧光染色检测Nox4蛋白在大鼠DRG中的表达和细胞定位,利用商品化试剂盒检测大鼠DRG中H2O2的含量,应用real time RT-PCR和Western Blot检测Nox4基因沉默对大鼠DRG中神经型一氧化氮合酶(n NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)及N-甲基-D-天冬氨酸受体2D(NMDAR2D)和γ-氨基丁酸A型γ2受体(GABAA-γ2)表达的影响。结果:大鼠接种Walker256细胞可造成胫骨破坏及肿瘤细胞生长,PWT减少和TWL缩短;在骨癌痛大鼠DRG中,Nox4的表达显著升高;免疫组织荧光染色结果表明Nox4主要表达于DRG小胶质细胞中;敲减DRG中Nox4表达能减轻骨癌痛大鼠的机械痛敏和热痛敏,降低DRG中H2O2的水平,下调nNOS和NMDAR2D表达,上调SOD和GABAA-γ2表达。结论:敲减DRG中Nox4表达可通过减轻氧化应激反应缓解大鼠骨癌痛。

NADPH氧化酶4对心脏纤维母细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:探讨NADPH氧化酶4(NOX4)在小鼠心脏纤维母细胞转化为心肌纤维母细胞中的作用及其可能机制。方法:分离并培养原代C57BL/6小鼠心脏纤维母细胞,分为空白对照组、TGF-β1组(10μg/L TGFβ-1作用24 h)、TGFβ-1+DPI组(10μmol/L DPI预处理2 h后,TGFβ-1作用24 h)和TGFβ-1+siRNA组(NOX4siRNA预处理6 h后,TGFβ-1作用24 h)。α平滑肌肌动蛋白(SMα-actin)和NOX4的mRNA含量采用Real-time PCR检测。SMα-actin蛋白水平采用western blotting检测。H2O2含量采用Amplex Red法检测。结果:NOX4 siRNA能显著抑制细胞NOX4 mRNA的表达。TGFβ-1组细胞内NOX4、SMα-actin mRNA表达、SMα-actin蛋白含量和H2O2水平均高于空白对照组;而DPI和siRNA则明显抑制了TGF-β1诱导的NOX4和SMα-actin表达上调,同时减少了H2O2的产生。结论:NOX4及其催化的ROS部分介导了TGFβ-1诱导的心脏纤维母细胞向心肌纤维母细胞的分化。

HDL抑制人脐静脉内皮细胞NADPH氧化酶4表达和活性氧生成

目的分析HDL对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)内NAD-PH氧化酶4(NADPH oxidase4,NOX4)及其亚组分p22phox、p67phox、Rac1与活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响,研究HDL对LDL的拮抗作用。方法用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养HUVEC;用RT-PCR、Western印迹观察NOX4、p22phox、p67phox、Rac1表达的变化;用流式细胞仪检测细胞内ROS的变化。结果HDL处理HUVEC能下调NOX4和p67phox mRNA和蛋白水平,但不影响p22phox和Rac1的表达。高浓度LDL刺激HUVEC时,NOX4表达上调,细胞内ROS生成增加,但p22phox、p67phox和Rac1的表达没有明显变化。用HDL预处理再加高浓度LDL刺激时,NOX4表达下调,ROS生成量减少;结论HDL可通过下调HUVEC NOX4表达降低ROS水平。

NADPH氧化酶-4对大鼠高血压性心肌肥大的影响

目的:研究NADPH氧化酶-4(NOX4)及活性氧(ROS)在高血压性心肌肥大发生过程中的作用.方法:采用手术缩窄大鼠腹主动脉致压力超负荷心肌肥厚的方法,制作大鼠高血压性心肌肥大模型.48只大鼠分为4组,即假手术组(或对照组)、心肌肥大模型组(模型组)、4羟基2,2,6,6四甲基哌啶(4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-N-oxyl,Tempol)治疗组(Tempol组)和二亚苯基碘(DPI)治疗组(DPI组).两治疗组分别于缩窄手术后给予含Tempol和DPI的饮用水.对4组大鼠,术前及术后2,4,8wk分别测定血压,术后8wk测定心脏质量指数以判断心肌肥大程度,术后8wk检测心肌组织中过氧化氢(H2O2)含量和NOX4mRNA表达.结果:模型组大鼠血压从术后2wk开始持续增高(P<0.01).两治疗组大鼠血压术后2wk时与模型组大鼠血压相同,但从术后4wk开始,Tempol和DPI的作用导致治疗组血压明显低于模型组(P<0.05).模型组左心室、心脏指数、心肌组织中H2O2含量及NOX4mRNA含量均显著高于对照组(P<0.01).DPI组以上指标则明显低于模型组(P<0.05);而Tempol组的左心室、心脏指数、H2O2含量明显低于模型组(P<0.05),但NOX4mRNA含量与模型组无明显差异.结论:心肌NOX4与大鼠高血压性心肌肥大的发展密切关联,其作用是通过它下游的活性氧而介导的.

抵抗素样分子β和NADPH氧化酶4在低氧性肺动脉高压大鼠肺小动脉的表达变化及意义

目的研究大鼠低氧性肺动脉高压（HPH）肺小动脉平滑肌抵抗素样分子β（RELM-β）和NADPH氧化酶4（NOX4）表达变化及与血管重塑的关系。方法40只雄性SD成年大鼠随机分为对照组（C组）、低氧3d、7d、14d和21d组（H3、H7、H14、H21组），复制HPH大鼠模型；测各组大鼠平均肺动脉压（mPAP）、右室肥厚指数（RVHI）；取左肺组织包埋切片HE染色观察血管形态学指标；免疫组织化学检测血管壁RELM-β和NOX4蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应检测肺小动脉平滑肌中RELMG和NOX4mRNA表达情况。结果与对照组相比，低氧组大鼠出现肺小动脉重塑和RVHI增加，21d时最明显；低氧7d后，mPAP上升，14d达高峰并持续到21d；mRNA显示RELM—β和NOX4在对照组肺小动脉壁弱阳性表达；RELM—β mRNA于低氧7d后明显增加，低氧14d后达高峰，低氧21d下降但仍高于对照组；NOX4mRNA于低氧3d明显增加，低氧7d下降但高于对照组，低氧21d再次升高且高于低氧3d组，呈“驼峰样”改变。免疫组织化学显示RELM—β和NOX4变化趋势与mRNA水平变化基本一致；大鼠肺小动脉壁RELM—β与NOX4mRNA、蛋白表达与mPAP、血重塑指数、RVHI均呈正相关。结论慢性低氧诱导HPH大鼠模型肺小动脉壁REI，M—β、NOX4表达升高，RELMp可能促进NOX4在慢性低氧后期的表达增加，二者共同参与HPH的发病过程。

NADPH氧化酶Nox4调控非诺贝特的抗高血压心肌肥大效应

目的拟阐明NADPH氧化酶Nox4与非诺贝特抗高血压心肌肥大效应的关系。方法构建腹主动脉缩窄(abdominal aorta coarctation,AAC)诱导的高血压大鼠模型,观察非诺贝特对高血压大鼠左心室肥大的影响。结果非诺贝特可显著抑制AAC高血压大鼠左心室肥大。与假手术组比较,AAC组左心室中NADPH氧化酶Nox4蛋白和mRNA水平均显著增加;与AAC组比较,非诺贝特剂量依赖性降低AAC高血压大鼠左心室中NADPH氧化酶Nox4蛋白和mRNA水平。结论降低NADPH氧化酶Nox4表达可能是非诺贝特发挥抗高血压心肌肥大效应的重要机制。

NOX4介导的氧化应激参与垂体腺瘤出血性卒中的发生

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶4(NOX4)在垂体腺瘤出血性卒中(PA)中的作用。方法取厦门大学附属中山医院神经外科垂体腺瘤手术剩余标本,根据术后病理分为出血卒中(PA)组和非卒中(non-PA)组,每组18例。苏木精-伊红(HE)染色明确是否出血;免疫组织化学染色检测NOX4阳性细胞百分数;Western blot检测NOX4蛋白表达量;DCFH-DA探针检测活性氧(ROS)平均荧光强度;TUNEL法检测细胞凋亡率。结果出血卒中组组织间大量红细胞渗出,非卒中组未见红细胞。出血卒中组表达的NOX4阳性细胞百分数为21.53%±4.25%,显著高于非卒中组的4.29%±1.71%(P<0.001)。出血卒中组NOX4蛋白表达水平显著高于非卒中组(P<0.001)。出血卒中组ROS平均荧光强度显著高于非卒中组(P<0.001)。出血卒中组细胞凋亡率为38.64%±12.46%,显著高于非卒中组的6.19%±2.40%(P<0.001)。结论NOX4参与垂体腺瘤出血性卒中的发生。NOX4介导的氧化应激调控细胞凋亡可能是垂体腺瘤出血性卒中的潜在机制。

血清NOX4联合Nrf2水平检测对稳定期COPD患者急性加重的预测价值

目的探讨血清NADPH氧化酶4(NOX4)联合核因子E2相关因子2(Nrf2)水平检测对稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者急性加重的预测价值。方法选取2019年8月至2021年12月在河北北方学院附属第一医院住院治疗并在出院后随访1年内有急性加重发作情况的138例稳定期COPD患者作为研究对象,根据出院后1年内急性加重发作次数分为急性加重发作次数≥2次的频发组52例和发作次数≤1次的非频发组86例。比较两组患者临床资料及血清NOX4、Nrf2水平,采用多因素logistic回归分析稳定期COPD患者1年内急性加重频繁发作的影响因素;采用ROC曲线评估NOX4、Nrf2预测稳定期COPD患者1年内急性加重频繁发作的效能。结果频发组患者合并糖尿病比例、血清NOX4水平均高于非频发组,ALB、Nrf2水平均低于非频发组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,合并糖尿病、NOX4水平升高是稳定期COPD患者1年内急性加重频繁发作的危险因素,Nrf2水平升高是稳定期COPD患者1年内急性加重频繁发作的保护因素(均P<0.05);ROC曲线分析显示,血清NOX4及Nrf2水平对稳定期COPD患者1年内急性加重频繁发作具有预测价值,两者联合预测的灵敏度和特异度分别为0.814和0.885。结论血清NOX4和Nrf2有望成为评价COPD患者1年内急性加重频繁发作风险的潜在标志物。

CGRP通过抑制p38MAPK/NOX4通路保护氧化应激诱导的血管内皮细胞损伤

目的观察降钙素基因相关肽(CGRP)对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用及其对p38MAPK/NOX4信号通路的抑制作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs),外源性给予过氧化氢(H2O2)或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作为氧化刺激因素,CGRP作为保护剂处理细胞。噻唑蓝比色法(MTT)观察HUVECs活力;流式细胞仪(FCM)观察分析HUVECs增殖指数的改变;Western Blot和Real-time PCR分别检测p38MAPK、NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白和mRNA的表达。结果 500μmol/L H2O2或100 nmol/L AngⅡ能浓度依赖性地降低HUVECs活力和增殖指数(PI);CGRP可以显著增加HUVECs活力和及其PI。同时,H2O2、AngⅡ均能诱导p38 MAPK磷酸化,并能上调NOX4蛋白和mRNA表达,p38 MAPK阻断剂能部分增强CGRP抑制AngⅡ或H2O2诱导的NOX4的表达。结论 CGRP对内外源性的氧化应激损伤HUVECs的保护机制可能与抑制p38MAPK/NOX4信号通路有关。

人参皂苷Rg1通过抑制NOX4/MAPK通路减轻棕榈酸钠诱导HMCs细胞的纤维化

目的探讨人参皂苷Rg1对棕榈酸钠(sodium palmitate,PA)诱导的人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)纤维化的抑制作用及机制。方法(1)用不同浓度的PA将HMCs处理24 h,通过油红O染色观察脂质变化,H2DCFDA法检测ROS生成情况;(2)将HMCs细胞分为对照组、PA(160μmol·L^(-1))组、HG(25 mmol·L^(-1))组、PA+HG组,用活细胞成像观察细胞24 h内形态变化;(3)将HMCs细胞分为对照组、PA(160μmol·L^(-1))组、PA+Rg1(5μmol·L^(-1))组、PA+Rg1(10μmol·L^(-1))组、PA+Apocynin(50μmol·L^(-1))组,免疫荧光法检测Col4的表达,Real-time PCR检测Col4、TGF-β和FN的mRNA表达;Western blot测定TGF-β、FN以及NOX4、MAPK通路相关蛋白表达。结果PA各浓度处理HMCs可剂量依赖性增加细胞内脂质沉积和ROS生成;PA组和PA+HG组均能导致HMCs细胞形态异常变化;Apocynin和Rg1(5、10μmol·L^(-1))可抑制PA引起的HMCs内脂质积累、ROS的增多,以及Col4、TGF-β和FN mRNA的过表达,并明显下调PA诱导的HMCs中TGF-β、FN、NOX4和MAPK相关蛋白的增多。结论人参皂苷Rg1能明显抑制PA诱导的HMCs细胞的纤维化,其机制可能与减少脂质沉积、抑制NOX4/MAPK通路等有关。

紫草酸甲酯抑制海马Nox4介导的铁死亡改善小鼠术后学习记忆障碍

目的探讨紫草酸甲酯(PAME)对小鼠术后学习记忆障碍的影响及机制。方法将C57BL/6J雄性小鼠随机分为Sham组、手术组、手术+PAME组(PAME组)、手术+NADPH氧化酶4(Nox4)腺相关病毒过表达组(Nox4过表达组)、手术+Nox4腺相关病毒空载组(AAV空载组)、手术+PAME+Nox4过表达组(PN组)。手术模型采用剖腹探查术,PAME(20 mg/kg)给药时间为术后连续灌胃7 d,Nox4腺相关病毒在手术前28 d注射到海马脑区。Morris水迷宫实验和条件性恐惧实验检测小鼠学习记忆能力;免疫荧光观察Nox4表达变化;Western blot法检测Nox4、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达;分光光度法检测活性氧(ROS)和铁含量。结果与Sham组相比,手术组、Nox4过表达组、AAV空载组小鼠学习记忆能力下降,Nox4、ACSL4表达升高,GPX4表达降低,ROS、铁含量增加,PAME治疗后小鼠术后学习记忆能力改善,海马神经元Nox4和铁死亡减轻。结论PAME治疗后可提高术后小鼠学习记忆能力,与其抑制海马Nox4介导的铁死亡有关。

基于Nox4/PKC_(α)/Gal-3通路探讨柴胡皂苷D对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响

目的:基于NADPH氧化酶4(Nox4)/蛋白激酶C_(α)(PKC_(α))/半乳糖凝集素3(Gal-3)通路探讨柴胡皂苷D对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、柴胡皂苷D组(50 mg/kg)、Apocynin组(10 mg/kg)、柴胡皂苷D+Apocynin组(柴胡皂苷D 50 mg/kg+Apocynin 10 mg/kg),每组12只。除假手术组外,其余各组制备心肌梗死模型。经药物处理后,采用超声测量各组大鼠心室功能指标左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS);苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠心肌组织形态;Masson染色检测各组大鼠心肌组织纤维化改变,并计算心肌组织胶原容积积分(CVF);酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、转化生长因子(TGF)-β_(1)水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠心肌组织Nox4/PKC_(α)/Gal-3通路相关蛋白表达含量。结果:相较于假手术组,模型组大鼠心肌组织有严重的病理损伤,胶原增生明显,心肌CVF、LVEDD、LVESD及血清IL-1β、IL-6、TGF-β_(1)水平升高,心肌组织Nox4、PKC_(α)及Gal-3蛋白表达升高(P<0.05),LVEF及LVFS降低(P<0.05)。相较于模型组,各药物组大鼠心肌组织病理损伤减轻,胶原增生减少,CVF、LVEDD、LVESD及血清IL-1β、IL-6、TGF-β_(1)水平降低,心肌组织Nox4、PKC_(α)及Gal-3蛋白表达降低(P<0.05),LVEF及LVFS升高(P<0.05)。相较于柴胡皂苷D组、Apocynin组,柴胡皂苷D+Apocynin组大鼠心肌组织病理损伤进一步减轻,且胶原增生进一步减少,CVF、LVEDD、LVESDE及血清IL-1β、IL-6、TGF-β_(1)水平降低,心肌组织Nox4、PKC_(α)及Gal-3蛋白表达降低(P<0.05),LVEF及LVFS升高(P<0.05)。结论:柴胡皂苷D可抑制Nox4/PKC_(α)/Gal-3通路激活,减轻心肌梗死大鼠心肌组织炎症损伤,缓解心肌纤维化,改善心功能。

血清ADMA和NOX4与慢性阻塞性肺疾病患者并发肺动脉高压的关系

目的探讨血清不对称二甲基精氨酸(ADMA)和NADPH氧化酶亚基4(NOX4)与慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者并发肺动脉高压的关系。方法选取2017年至2020年我院收治的COPD合并肺动脉高压(PH)患者92例作为PH组,分为PH轻度组(30例)、PH中度组(40例)及PH重度组(22例);同时选择稳定期COPD患者32例作为对照组。采用酶联免疫吸附法测定血清ADMA、NOX4水平。应用ROC曲线分析血清ADMA、NOX4水平对COPD患者并发PH的预测价值,多因素Logistic逐步回归分析COPD并发PH的危险因素。结果与对照组比较,轻度、中度和重度PH组ADMA、NOX4、IL-12、TNF-α、IL-6水平升高,IFN-γ、FEV1%、FEV1/FVC、DLCO%水平降低(P<0.05)。随着COPD并发PH病情逐渐严重,ADMA、NOX4、IL-12、TNF-α、IL-6水平逐渐升高,IFN-γ、FEV1%、FEV1/FVC、DLCO%水平逐渐降低(P<0.05)。ADMA、NOX4与FEV、FEV1/FVC、IFN-γ呈负相关,与IL-12、TNF-α、IL-6呈正相关(P<0.05)。ADMA、NOX4两者的AUC、灵敏度、特异度相近,ADMA联合NOX4诊断COPD患者并PH的AUC(0.859,95%CI:0.768~0.964)、灵敏度(88.0%)更高。高水平ADMA、NOX4、TNF-α为COPD并PH的危险因素(P<0.05)。结论COPD并发PH患者血清ADMA、NOX4水平升高,ADMA、NOX4与疾病严重程度正相关,高水平ADMA、NOX4为COPD并发PH的危险因素。

六味地黄丸含药血清对软脂酸诱导人脐静脉内皮细胞损伤抗氧化的机制

目的探讨六味地黄丸(LWDHP)含药血清对软脂酸(PA)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤抗氧化的保护作用及机制。方法噻唑蓝(MTT)法观察HUVEC的存活率;氮蓝四唑(NBT)显色法测定细胞裂解上清液总超氧化物歧化酶(SOD)的活力;硫代巴比妥酸(TBA)反应法检测细胞裂解上清液丙二醛(MDA)的含量;RT-PCR及Western印迹检测细胞内NADPH氧化酶4(NOX4)mRNA和蛋白的表达。结果 LWDHP含药血清能促进PA损伤的HUVEC增殖,增加细胞裂解上清液总SOD活力,降低细胞内MDA含量,减少NOX4 mRNA和蛋白的表达。结论 LWDHP含药血清能够对PA诱导的HUVEC氧化损伤发挥保护作用,此作用可能与LWDHP降低HUVEC内NOX4的表达量有关。