全脑缺血再灌注对大鼠延髓内脏带NADPH-d阳性神经元分布与Fos蛋白表达的影响

目的 观察大鼠全脑缺血 再灌注不同时间点延髓内脏带 (MVZ)内NADPH d阳性神经元与Fos蛋白表达的变化及相互关系。 方法 采用 4血管闭塞 (4VO)改良法以及运用NADPH d组织化学反应和Fos免疫组织化学反应及双重染色技术对全脑缺血 30min ,再灌注 2h、4h、8h、12h、2 4h、4 8h对MVZ进行研究。 结果 脑缺血组MVZ内NADPH d阳性神经元染色反应增强和Fos蛋白表达随脑缺血后再灌注时程而变化 ,并见有 15 %～ 2 0 %阳性双染细胞。 结论 在全脑缺血再灌注过程中 ,MVZ内NADPH d阳性神经元与Fos蛋白表达的分布变化具有相关性 。

缺氧对大鼠纹状体边缘区AChE和NADPH-d含量的影响及其与学习记忆的关系

目的观察大鼠缺氧后纹状体边缘区(MrD)的病理改变及乙酰胆碱酯酶(AChE)和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)的含量改变,探讨缺氧对纹状体边缘区的损害及与学习记忆的关系。方法建立40只大鼠缺氧模型(予氧含量为8%、氮气含量为92%的混合气,5h/d,连续5d)并对其进行Y迷宫实验,缺氧5d后处死动物观察其脑组织切片HE染色和AChE和NADPH-d组织化学染色情况并与对照组比较。结果(1)大鼠缺氧前后Y迷宫实验成绩差异显著。(2)AChE组化结果显示,正常大鼠纹状体可见大量AChE阳性反应纤维和少量阳性细胞,MrD内AChE染色略淡;缺氧后纹状体其他部分AChE染色无明显变化,而MrD则明显加深。(3)NADPH-d组化反应显示,MrD内NADPH-d阳性细胞多呈梭形,纹状体内阳性细胞数较其他区域多;缺氧后阳性细胞形态变化不明显,但数目明显少于正常对照。结论缺氧可导致大鼠学习记忆功能下降以及MrD内AChE、NADPH-d染色的明显改变。这些改变较纹状体其他区域更为明显,表明MrD对于缺氧较敏感,缺氧后AchE和NADPH的减少可能与学习记忆功能的下降有关。

培养大鼠皮层神经元创伤性损伤后NADPH-d组化反应研究

目的：研究创伤性损伤后大脑皮层细胞ＮＡＤＰＨ－ｄ组化反应变化情况，探讨继发性脑损伤的某些机制。方法：用机械划痕法创伤性损伤混合培养１０ｄ的大鼠大脑皮层神经细胞，采用ＮＡＤＰＨ－ｄ组化染色和ＮＳＥ免疫组化染色法观察神经元和胶质细胞中的一氧化氮（ＮＯ）产生情况。结果：正常培养皮层神经元中有少量ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性反应神经元，创伤性损伤后阳性反应神经元数量增加；胶质细胞中有ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性反应，在创伤性损伤混合培养皮层神经元创道周围，ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性反应明显强于其它部位。结论：创伤可致神经元和胶质细胞过量产生和释放ＮＯ并在继发性脑损伤中可能具有重要意义。

应用NADPH-d和HRP双重组织化学技术显示一氧化氮合酶阳性神经元的纤维投射

十多年来,大量的研究资料证实一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元在脑内广泛分布,但对相关脑区(核团)内NOS阳性神经元的纤维投射方面的报道较少,且多采取霍乱毒素β亚单位作为逆行追踪剂结合神经型NOS(nNOS)双重免疫组织化学荧光染色方法[1].

BDNF ,NT-3对体外培养的胚鼠脊髓AChE和NADPH-d阳性神经元生长发育的影响

利用AChE和NADPH d酶组织化学染色法研究了脑源性神经营养因子 (brain derivedneurotrophicfac tor ,BDNF)和神经营养因子 3(neurotrophin 3,NT 3)对离体培养的胚胎大鼠脊髓胆碱能神经元和一氧化氮能神经元生长发育的影响。结果显示 :BDNF处理组和NT 3处理组AChE阳性神经元数和NADPH d阳性神经元数均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。BDNF组AChE阳性神经元和NADPH d阳性神经元胞体平均直径、每细胞突起数和最长突起长度均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。NT 3组NADPH d阳性神经元的生长发育与对照组无明显差异 ,仅AChE阳性神经元的每细胞突起数和最长突起长度显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,对胞体发育无影响。结果提示 :BDNF ,NT 3促进脊髓神经元的存活和生长发育 ,二者的作用具有选择性和特异性。

吗啡戒断大鼠中缝背核FOS、NADPH-d的表达

目的 研究吗啡戒断大鼠中缝背核FOS、NADPH -d酶表达的变化。方法 运用免疫组织化学、组织化学方法观测吗啡戒断大鼠动物模型中缝背核FOS、NADPH -d酶表达的变化。结果 吗啡戒断组FOS、NADPH-d阳性神经元、纤维和终末表达明显增加 (P <0 .0 5 )。结论 一氧化氮参与吗啡耐受、依赖和戒断的转导与调控 ;中缝背核可能是介导吗啡耐受、依赖和戒断的部位之一。

前庭代偿过程中脑干相关c-Fos/NADPH-d的表达

目的通过研究大鼠前庭神经损伤后,分别在静止、角加速度刺激状态下,c-Fos/NADPH-d阳性神经元在脑干的前庭神经内核、舌下神经前置核分布的改变,探讨前庭代偿机制。方法将60只SD大鼠分为无手术组、单耳前庭神经切断手术组和双耳前庭神经切断手术组3组,每组20只。每组一半在静止状态,另一半接受角加速度刺激。用NADPH-d组织化学和c-Fos免疫组织化学双染法观察c-Fos/NADPH-d阳性神经元分别在前庭神经核、舌下神经前置核区分布的改变。结果静止状态下的无手术组、双耳前庭神经切断手术组鼠和旋转刺激后的双耳前庭神经切断手术组鼠在双侧前庭神经内核、舌下神经前置核无c-Fos/NADPH-d阳性神经元。单耳前庭神经切断手术组鼠在同侧前庭神经内核、对侧舌下神经前置核有c-Fos/NADPH-d阳性神经元分布。旋转刺激后的无手术组鼠和单耳前庭神经切断手术组鼠在双侧前庭神经内核、舌下神经前置核有大量的c-Fos/NADPH-d阳性神经元。结论一侧前庭损伤后,同侧前庭神经内核、对侧舌下神经前置核内c-Fos阳性神经元在前庭代偿早期可能起启动作用,一氧化氮为关键神经递质。

精神分裂症模型小鼠脑内c-Fos/NADPH-d的表达

目的:检测精神分裂症模型小鼠脑内c-Fos与尼克酰胺腺啶呤二核苷酸磷酸黄递酶(NADPH-diapho-rase,NADPH-d)的共存,探讨一氧化氮(nitricoxide,NO)与精神分裂症的关系,为深入研究精神分裂症的发病机制提供形态学和神经化学依据。方法:雄性昆明小鼠,随机分为生理盐水组和苯环己哌啶(phencyclidine,PCP)组,分别用自主活动观察、Sams-Dodd的刻板行为评分标准对模型小鼠的行为改变进行检测,同时用NADPH-d组织化学和c-Fos免疫组织化学双染法检测各组小鼠脑内c-Fos/NADPH-d阳性神经元的分布。结果:(1)PCP组小鼠出现明显的自发活动的增加(P<0.01)及显著的刻板行为(P<0.01);(2)PCP组小鼠脑内c-Fos与NADPH-d阳性神经元单纯表达的数量明显高于对照组,并且在伏隔核、屏状核及被盖背外侧核出现较多c-Fos/NADPH-d双标阳性神经元,生理盐水组小鼠脑内未见c-Fos/NADPH-d双标阳性神经元。结论:NO可能在谷氨酸NMDA受体功能异常引起的精神分裂症的病理过程发挥一定作用。

疼痛刺激对大鼠脊髓上水平神经元NADPH-d和Fos表达的影响

目的 :研究一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元在中脑导水管周围灰质 (PAG)和中缝背核 (DR)内的分布 ,探讨脊髓上水平一氧化氮 (NO)与外周痛的关系。方法 :SD大鼠 2 0只 ,随机分为 2组 ,每组 10只。实验组大鼠单侧后肢足底皮下注射 5 %福尔马林 0 .1ml,对照组大鼠于相同部位注射生理盐水 0 .1ml。 2h后常规灌注、固定、取材大鼠中脑所在段、切片。切片按序分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三套。全部切片先作NADPH d组织化学反应 ,镜检阳性切片 ,Ⅰ套继续作中性红染色 ,Ⅱ、Ⅲ套作c fos免疫细胞化学反应 ,其中Ⅲ套用 0 .0 1mol/LPBS代替c fos抗体。封片后镜下观察。结果 :NADPH d阳性神经元主要分布于PAG腹外侧核 (CGLV)、背外侧核 (CGLD)和DR ;大鼠足底注射福尔马林后可在上述部位发现NADPH d、Fos和NADPH d/Fos三种标记的阳性神经元。结论

微量海人酸注入大鼠延髓网状背侧亚核诱导的Fos表达及其与NADPH-d的共存(英文)

目的 :研究大鼠网状背侧亚核的功能传出通路及该通路上NADPH d的分布。 方法 :将微量海人酸注入大鼠延髓网状背侧亚核 ,2h后灌注 ,脑片进行NADPH d组织化学和Fos免疫组化染色。 结果 :Fos阳性细胞主要分布于中缝背核 (DR)、中缝大核 (NRM )、蓝斑 (LC)、中脑导水管周围灰质腹外侧 (vlPAG)和下丘脑室旁核。Fos/NADPH d双标细胞主要分布于巨细胞网状核、下丘脑室旁核和中缝大核。 结论 :大鼠延髓网状背侧亚核与脊髓上中枢存在广泛的功能联系 ,而且在延髓网状背侧亚核的功能传出通路上有一氧化氮合酶的分布。

大鼠脑室触液神经元的分布及其在中缝核团与NADPH-d的共存

目的系统研究脑内接触脑脊液神经元的分布,并对远位触液神经元与一氧化氮合酶的共存进行研究。方法将霍乱毒素B(CTB)注入侧脑室,5d后将动物进行灌注,留取全脑切片,进行CTB免疫组化染色和NADPH鄄d组化染色,镜下观察免疫阳性细胞和纤维的分布。结果CTB标记的触液神经元的分布分为3个区:脑室壁周围、蛛网膜下及大脑皮质表层以及脑实质内。在中缝背核、中缝正中核和线形核等部位还可见NADPH鄄d阳性细胞以及CTB/NADPH鄄d双标细胞。结论侧脑室内触液神经元分布广泛;在中缝系统部分NADPH鄄d阳性细胞与远位触液神经元的共存,提示一氧化氮在脑鄄脑脊液之间的信息传递中有一定作用。

柞蚕幼虫期神经系统一氧化氮合酶的NADPH-d组织化学

运用NADPH-d组织化学整体染色方法研究柞蚕Antheraea pernyi Gu rin-Meneville幼虫神经系统中一氧化氮合酶阳性细胞的分布、数量及形态特征。结果表明,柞蚕各龄期幼虫中枢神经的脑及各神经节中都有一氧化氮合酶阳性反应,阳性神经元根据其形态大小和染色特性可分为A,B,C3种类型：A型细胞沿神经节中线分布,阳性反应较强,胞体长径约30～70μm,各神经节中的数量恒定。B型细胞多分布于神经节周边部分,阳性反应较弱,胞体长径约8～20μm,各神经节中的数量变化较大,随着龄期增加有减少的趋势。C型细胞分布于咽下神经节和第8腹神经节,在3种细胞中阳性反应最强,胞体长径约16～50μm。

FOS免疫组化结合NADPH-d组化双重染色方法

NADPH—d组化染色是定位NOS神经元的流行方法。FOS表达与NOS激活具有共同的上游事件，即Ca2+内流、钙调素依赖机制，FOS蛋白与NOS是否存在于同一种神经元中尚缺乏形态学方面的证据。F。S是一种核蛋白，定位在神经元核内，免疫组化染色后呈褐色或棕色，NADPH—d定位在胞浆中，组化染色呈现兰色，这为两种方法结合提供了良好的双染条件。结合途径有两种①先染NADPH－d再染FOS；②先染F。S再染NADPH－d疽种方法我们及其它作者已有报道。但在Soman诱发惊厥大鼠模型中，对杏仁核、下丘脑染色未能取得满意效果。因此，我们试用了另一结合途径。结果显示了满意的双染效果。现将这一方法介绍如下：1．ABC免疫组化：常规ABC免疫组化：我们采用低温、高抗体稀释度、长时间孵育方法，DAB呈色。2．切片入恢复液；配方是0IMPB配制，含0．05MCaCI。、0．of％双氧水，O25％TritonX－10OI。37C，30min。3．入NADPH—d染液：0ling／mlNBTling／mlNADPH-d。0．3％Tritonxl0oin0．IMPBpH7．337C40～6Omin，这一染色方法成功率高，双染效果好，色泽鲜艳。这一方法尤其适用于NADPH－d神经元大小中等，且比较集中的脑区进行染色。应用这一方法应该注意的是：①应尽量减少免疫组化染色的背底；②37℃孵育时；司不直超过Zh。

NADPH-d组化方法染色条件的探讨

运用定量分析方法对NADPH－d组化染色方法进行了初步探讨。实验对象采用在鼠海马，固定后的标本冰冻冠状连续切片35urn，切片染色封装后，光镜下图像分析方法定量观测染色效果。结果显示以下几个因素对染色的影响颇大。1．染液的配方：我们推荐NBT浓度为0.1mg／ml，NADPH－d浓度为1mg／ml，0．IMPBSpH7．3，Triton－100浓度为03％的配方。提高NBT浓度至0．2、04、0sing／ml，染色速度加快，但易造成深染细胞的过染而使神经元形态不清并易造成切片污染。NADPH—d的浓度最小值是ling／ml，较低的浓度05～08mg／ml染色速度减慢且着色浅淡，染色细胞数量减少。较高的浓度1．2、1．sing／ml与ling／ml的染色效果类似，但染色时间缩短。2．固定液：4％多聚甲醛固定的标本中，NADPH－d染色阳性神经元见于海马除锥体细胞层的其它各层，染色细胞为原生型NOS神经元，4％多聚甲醛＋1．25％戊H醛固定的标本可使锥体细胞显示淡阳性，似可以使内皮型NOS神经元（eNOS）显示阳性。因此，选用不同固定液有助于确定NOS的类型。3．染色时间：37C下温育以40～60分钟为宜，时间过长可造成某些胶质细胞的染色并可使染色过深。通过试验我们认为：对脑组织进行NADPH－d染色的适宜条件为：NBT浓度：0．l一0．12ms／ml。

乙状结肠痛对大鼠中缝背核Fos-LI和NADPH-d阳性神经元表达影响的实验研究

目的 :探讨中缝背核还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶 (NADPH d)阳性神经元是否参与调控大鼠乙状结肠痛。方法 :采用Fos免疫组织化学、NADPH d组织化学及Fos /NADPH d双标技术 ,观察乙状结肠痛大鼠中缝背核NADPH d阳性神经元和Fos样免疫反应蛋白 (Fos LI)的变化。结果 :乙状结肠痛刺激后 ,中缝背核内NADPH d阳性神经元个数和染色深度增加 ;中缝背核Fos LI明显增加 ;中缝背核内有Fos LI /NADPH d双标神经元的表达 ,约占NADPH d神经元的11% ,与生理盐水对照组相比有显著性差异。结论 :中缝背核NADPH d阳性神经元可能参与对乙状结肠痛刺激的信息传递。

大鼠室旁核和视上核NMDAR_1及NADPH-d阳性神经元分布的性别差异

为了研究ＮＭＤＡＲ１ 及ＮＡＤＰＨ－ｄ 阳性神经元在室旁核及视上核分布的性别差异，本研究采用雌雄Ｗ ｉｓｔａｒ 大鼠，恒冷箱切片，分别进行ＮＭＤＡＲ１ 免疫细胞化学和ＮＡＤＰＨ－ｄ 组织化学反应，并进行ＮＭ ＤＡＲ１ 免疫细胞化学和ＮＡＤＰＨ－ｄ 组织化学双重反应，光镜下观察室旁核及视上核的阳性细胞分布状况。观察结果发现，雄性组室旁核中的ＮＭＤＡＲ１ 和ＮＡＤＰＨ－ｄ 双重反应阳性细胞明显多于雌性组。ＮＭ ＤＡＲ１ 免疫反应组可见免疫阳性神经元，但雌雄两组之间未见明显差异。ＮＡＤＰＨ－ｄ 组化反应组可见高尔基样的阳性细胞，雌雄两组之间也未见明显差异。ＮＭ ＤＡＲ１、ＮＡＤＰＨ－ｄ 及ＮＭＤＡＲ１ 和ＮＡＤＰＨ－ｄ 双重反应各组在视上核未见性别差异。室旁核ＮＭＤＡＲ１ 和ＮＡＤＰＨ－ｄ 双重反应的分布有明显性别差异的研究结果表明，雄性大鼠室旁核可能通过ＮＭ ＤＡＲ－ＮＯ 途径介导雄性大鼠的某些性行为。

猫纹状体边缘区中P物质、脑啡肽、神经肽Y和NADPH-d阳性物质的分布

我们以前的工作己经证明大鼠纹状体内存在一个亚区──边缘区。但边缘区是否属哺乳类动物纹状体普遍存在的结构，猫的纹状体有无边缘区，尚未见有文献报道。本文对猫纹状体的形态和递质特征进行了研究，观察到猫纹状体尾侧的壳核和苍白球之间有一条明显的密集梭形细胞带。细胞长轴呈背腹方向排列，常密集排列成簇状。并可见NADPH－d阳性的梭形细胞呈背腹方向排列，突起由细胞背腹方向伸出很长距离。细胞的形态、大小、排列及部位和大鼠纹状体边缘区类似。用免疫组化方法观察到花纹状体尾侧的壳核和苍白球之间的部位，有一条明显的P物质、亮氨酸-脑啡肽和神经肽Y阳性物质密集分布的带状区。带的部位及形状和大鼠纹状体边缘区类似。证实猫纹状体内也存在一个和大鼠纹状体边缘区类似的亚区──边缘区。

口虾蛄(Oratosquilla oratoria)神经系统一氧化氮合酶的NADPH-d组织化学定位研究

运用NADPH-d组织化学整体染色的方法研究了甲壳纲动物- 口虾蛄神经系统一氧化氮合酶(NOS)的分布.脑神经节中有少量来自腹神经链的纤维呈阳性;每侧联合神经节中各有一个阳性细胞(直径约75 μm);食道下神经节的阳性细胞可分为两类,即小型强阳性细胞(直径约40 μm)和大型弱阳性细胞(直径约90 μm),前者的阳性突起构成节间联系;胸神经节的阳性细胞也可分为两种类型,每节有4个小型强阳性反应细胞(直径约60 μm)和6～10个大型弱反应细胞(直径约80 μm),小细胞发出的突起进入中央纤维网尔后构成不同体节的神经节间联系;腹部前五个体节的神经节中各有5对阳性细胞(直径约80 μm),腹部最后一个神经节阳性细胞数量较多,其末端有一对阳性细胞(直径约55 μm)其突起经中线处交叉后前行进入腹神经索.结果说明:NOS广泛存在于口虾蛄神经系统中,NO作为信息分子参与其信息传递过程.

热应激后小鼠皮层NADPH-d阳性神经元计数的时程变化

目的:探讨急性热应激小鼠皮层NADPH-黄递酶(NADPH-d)阳性神经元计数的时程变化。方法:复制小鼠急性热应激模型,用穿梭实验法,观察小鼠热应激后6、12、24 h不同时间点学习记忆功能。采用NADPH-d组化染色法,观察小鼠热应激后6、12 h、24 h不同时间点皮层NADPH-d阳性神经元计数的时程变化。结果:(1)穿梭实验结果表明:与对照组相比,热应激组在6、12 h时错误次数(M)明显增高,潜伏期(EL)明显缩短(P<0.05)。(2)NADPH-黄递酶组织化学染色结果显示:与对照组相比,热应激组在6 h,NADPH-d阳性神经元的数目明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。热应激组在12 h NADPH-d阳性神经元的数目明显减少。结论:急性热应激可以对小鼠的学习记忆造成明显的损伤,而这种损伤的机制可能与NADPH-d阳性神经元表达的增加有关。

免疫组化法和NADPH-d酶组化法在术中快速诊断婴幼儿先天性巨结肠(HD)中应用价值的比较

目的探讨免疫组化与还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)酶组织化学染色法在术中快速诊断婴幼儿先天性巨结肠(Hirschsprung′s disease,HD)中的应用价值及其临床意义。方法标本采自经HE常规染色确诊的36例先天性巨结肠患儿的术中切除肠管,其中男性28例,女性8例,年龄均为3个月以内,中位年龄为2个月。标本分扩张段和痉挛段,经连续切片分别用免疫组化染色和NADPH-d染色并进行配对比较研究,观察组织蛋白酶D(cathepsin D,CAD)和NADPH-d的染色特点。结果(1)免疫组化CAD染色中,35例HD扩张段和阳性对照的肠壁黏膜下及肌间神经丛内可见阳性的神经节细胞;NADPH-d酶组织染色中35例HD扩张段和阳性对照的肠壁肌间神经丛中可见蓝色的神经节细胞;(2)免疫组化CAD染色与NADPH-d染色36例HD痉挛段组肠壁神经丛中缺乏阳性表达,未见神经丛及阳性神经节细胞;(3)免疫组织化学法和NADPH-d酶组织化学法阳性率差异无统计学意义(P>0.05),但NADPH-d法在诊断时间和辨识度比免疫组化有优势。结论NADPH-d染色法对诊断婴幼儿先天性巨结肠有优越性,NADPH-d法与其联合快速HE染色法能提高术中诊断效率,准确指示病变肠段切除范围;免疫组化实验要求高,诊断时间相对长,不适用于快速诊断婴幼儿HD。