miR-484通过靶向SIRT1介导细胞凋亡参与非酒精性脂肪肝性肝病损伤

背景目前非酒精性脂肪肝性病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已经成为被严重低估的重大健康威胁.尽管NAFLD发病机理复杂,但是越来越多的证据表明microRNAs(miRNAs)在调控NAFLD的发生和发展中起着重要的作用.其中,miR-484是否参与NAFLD发生和发展仍有待阐明.目的研究miR-484参与肝脏脂肪变性的损伤作用机制.方法通过喂养高脂饲料建立小鼠高脂模型,采用RT-qPCR和Western blot方法测定肝组织中miR-484和SIRT1的mRNA和蛋白水平,再次构建miR-484基因敲除NAFLD小鼠模型,检测小鼠血清ALT、AST、TG、TC变化水平,通过油红O染色、HE染色和TUNEL染色检测脂肪变性程度和细胞凋亡水平.此外,通过游离脂肪酸构建NAFLD细胞模型,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-484和SIRT1的直接靶向关系;通过转染pc-DNA和pc-DNA SIRT1构建SIRT1过表达模型,通过油红O染色检测脂质积累和流式细胞学检测细胞凋亡水平.结果在NAFLD小鼠模型中,miR-484表达明显上调,而SIRT1表达下降;敲除miR-484后小鼠脂肪变性程度减轻,血清ALT和AST明显降低.在NAFLD细胞模型中,miR-484能够通过直接靶向SIRT1,过表达SIRT1显著降低细胞凋亡率,减轻肝细胞脂质积累.结论miR-484通过靶向SIRT1调控细胞凋亡,加重肝细胞脂质积累,表明miR-484可能是NAFLD的治疗靶标.