不同分期痛风性关节炎患者NALP3炎性体及外周血γδT细胞水平观察

目的观察不同分期痛风性关节炎(GA)患者NALP3炎性体及外周血γδT细胞水平。方法回顾性选取2022年7月至2023年7月在河北省沧州中西医结合医院接受治疗的96例GA患者作为研究对象。依据GA临床分期,分为急性关节炎期组(n=38)、间歇期组(n=26)、慢性关节炎期组(n=32)。另选取同期于本院体检中心体检的健康者35名设为对照组。观察各组NALP3炎性体及外周血γδT细胞水平,分析各组GA患者的临床指标,包括血尿酸、血肌酐、总胆固醇、甘油三酯、血清C反应蛋白(CRP)水平及白细胞计数(WBC)。采用Pearson相关性分析急性关节炎期患者外周血γδT细胞及其亚型、NALP3炎性体与临床指标的关系。结果各组NALP3、γδT1细胞比较,差异均无统计学意义(P>0.05);各组Caspase-1、ASC、γδT细胞、γδT2细胞比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中,急性关节炎期组、间歇期组、慢性关节炎期组Caspase-1水平均高于对照组,γδT细胞和γδT2细胞比例均低于对照组,且病情程度越高,Caspase-1水平越高,γδT细胞和γδT2细胞比例越低;急性关节炎期组、间歇期组、慢性关节炎期组ASC水平均高于对照组,但急性关节炎期组低于间歇期组、慢性关节炎期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组总胆固醇、甘油三酯、CRP水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);各组血尿酸、WBC、血肌酐水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中,急性关节炎期组、间歇期组、慢性关节炎期组的血尿酸、WBC、血肌酐水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),且病情程度越高,血尿酸、WBC、血肌酐水平越高。相关性分析显示,γδT细胞在淋巴细胞中的比例及γδT1细胞在γδT细胞中的比例与血尿酸、血肌酐、总胆固醇、甘油三酯、WBC、CRP指标无明显相关性;γδT2在γδT细胞中的比例与甘油三酯、WBC呈负相关(P<0.05)。相关性分析显示,NALP3 mRNA表达与血肌酐、总胆固醇、甘油三酯、WBC指标无明显相关性;与血尿酸、CRP呈正相关(P<0.05)。结论NALP3炎性体及外周血γδT细胞参与GA的发展,Caspase-1、γδT细胞和γδT2细胞可作为痛风的急性炎症标记物,而ASC不能作为痛风的急性炎症标记物,同时γδT2在γδT细胞中的比例与甘油三酯、WBC呈负相关,NALP3 mRNA表达与血尿酸、CRP呈正相关,为临床病情评估和治疗提供参考。

痛风患者外周血NALP3炎性体与炎性因子、糖脂代谢的相关性

目的探讨痛风患者外周血NALP3炎性体与炎性因子、糖脂代谢的相关性。方法分别选择102例痛风患者(痛风组)、154例高尿酸血症患者(高尿酸血症组)和107例健康体检人群(对照组)作为研究对象,收集3组受试对象年龄、体质指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、尿酸(UA)、空腹血糖(FPG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)等临床资料,采用RT-PCR和Western blot检测各组患者外周血NALP3mRNA和蛋白表达。另利用100μg/mL尿酸盐刺激对照组全血6h,再次检测刺激组与未刺激组外周血单个核细胞(PBMCs)NALP3mRNA和蛋白表达。结果痛风组和高尿酸血症组BMI、FPG、LDL-C、TG、TC、UA、TNF-α、IL-1β、C反应蛋白(CRP)明显高于对照组,脂联素(APN)明显低于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05);痛风组FPG、LDL-C、TG、TC、UA、IL-1β、CRP明显高于高尿酸血症组,APN明显低于高尿酸血症组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。NALP3mRNA在痛风组(0.846±0.130)、高尿酸血症组(0.700±0.126)的表达明显高于对照组(0.231±0.049),痛风组NALP3mRNA表达量明显高于高尿酸血症组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组外周血经尿酸盐刺激后,刺激组NALP3mRNA和蛋白表达较相应空白组显著升高(均P<0.05)。痛风组和高尿酸血症组NALP3mRNA表达与FPG、UA、TNF-α、IL-1β、CRP呈正相关,与APN呈负相关(均P<0.05)。校正BMI、FPG、TG、TC等混杂因素后,结果显示NALP3mRNA不是高尿酸血症发生的危险因素,而NALP3mRNA表达≥0.808是痛风发生的危险因素(P<0.05)。结论痛风患者NALP3表达明显升高,NALP3可能参与痛风的发病和进展。

NALP3炎性体活化对脓毒症发病过程中HMGB1释放的调节作用

失控性全身炎性反应和免疫功能障碍是脓毒症发生的主要病理生理过程。HMGB1是脓毒症致死效应的最重要的晚期炎性递质,HMGB1由病原体或早期炎性反应分子活化免疫细胞释放,在脓毒症的发生、发展过程中它不仅发挥促炎效应,而且还与细胞免疫功能障碍密切相关。脓毒症和内毒素血症中HMGB1的分泌和释放继发于NALP3炎性体的活化。越来越多的证据表明,炎性体(尤其是NALP3炎性体)对单核/巨噬细胞释放HMGB1起着重要的调节作用。在炎性反应过程中,免疫细胞主动释放HMGB1的过程主要以一种炎性反应小体参与的、依赖caspase活化的方式进行。通过调节NALP3炎性体活化,抑制HMGB1释放,调节免疫功能紊乱状态,为脓毒症等免疫紊乱相关疾病的治疗提供了新的策略。

NALP3炎性体在结直肠腺瘤样息肉与结直肠癌中的表达及意义

目的研究检测NALP3炎性体在癌旁正常组织、结直肠腺瘤样息肉及结直肠癌中的表达差异,揭示NALP3炎性体在慢性炎症向恶性肿瘤发展过程中的意义。方法 Real-time PCR及Western blot对人结直肠腺瘤样息肉、结直肠癌及癌旁正常组织炎性体成分NALP3、ASC、caspase-1基因及蛋白进行检测。结果 NALP3、ASC、caspse-1在结直肠癌组织中表达最低,在结直肠腺瘤样息肉中表达最高,各因子在各组间差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 NALP3炎性体在正常组织—慢性炎症—恶性肿瘤发展中有着重要作用,变化可能与机体及肿瘤局部免疫状态相关。

NALP3炎性体与非感染性炎症疾病

在机体非感染性炎症疾病过程中,caspase-1的活化引起IL-1β、IL-18、IL-33等促炎细胞因子的分泌是一个重要的过程。而一个被称为NALP3炎性体的多蛋白复合物在caspase-1的活化过程中起到了重要的调节作用。各种外源或内源的刺激可通过不同的信号通路激活NALP3炎性体来活化caspase-1。本文就NALP3炎性体的结构和分布、活化和信号通路及对2型糖尿病、痛风、阿尔兹海默病和肾脏疾病等非感染性炎症疾病的近期研究作一综述。

NALP3炎性体、骨形态发生蛋白在退变腰椎间盘髓核组织中的表达及意义

目的探究退变腰椎间盘髓核组织中NALP3炎性体、骨形态发生蛋白(BMP)的表达及意义。方法在我院选取2017年6-2018年6月接受治疗的80例腰椎间盘突出症患者,患者手术切除标本中取出退变椎间盘髓核组织块,另外选取在我院行前路减压内固定切除的脊柱骨折患者椎间盘的正常椎间盘髓核组织块制作标本待用。对待测标本进行免疫组化染色,使用Western Blot检测NALP3、BMP-2表达。分析NALP3、BMP-2与腰椎间盘突出症患者腰椎间盘退变等级、腰部负荷程度的关系,并分析NALP3、BMP-2之间相关性。结果腰椎间盘组患者中NALP3表达显著高于正常组(P<0.05),BMP-2表达低于正常组(P<0.05);Ⅴ级患者NALP3水平高于Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级(P<0.05),BMP-2水平低于Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级(P<0.05);重程度患者NALP3水平高于很轻、轻、中程度(P<0.05),BMP-2水平低于很轻、轻、中程(P<0.05);NALP3、BMP-2之间进行Pearson相关性分析,NALP3、BMP-2之间呈负相关(r=-0.269,P=0.016)。结论退变腰椎间盘髓核组织中NALP3升高,BMP-2降低,且与患者退变等级、病情严重程度密切相关,为临床上腰椎间盘突出症的诊治提供理论参考。

NALP3炎性体在沙眼衣原体感染中的作用研究进展

沙眼衣原体具有广泛的致病谱,不仅是感染性致盲的首要病因,也是性传播疾病的主要病原体。持续性炎症反应与沙眼衣原体感染致病密切相关。NALP3炎性体是一种细胞内多蛋白复合物,在Ct感染所致的持续炎症反应中发挥重要作用。本文就NALP3炎性体的结构和功能及其在沙眼衣原体感染中的作用作一综述。

基于NALP3炎性体的痛风宁对急性痛风性关节炎大鼠抗炎作用量效和时效研究

目的观察痛风宁对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠NALP3炎性体及相关炎症因子的影响,探讨其抗炎作用的量效与时效关系。方法将240只SD大鼠随机分为造模组200只和正常组40只。右后踝关节腔内注射尿酸盐混悬液制作大鼠AGA模型,成模大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组及痛风宁低、中、高剂量组,每组40只。正常组和模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,其余组大鼠给予相应药物灌胃干预。首次干预后6、12、24、48 h各组随机取10只大鼠处死,收集右后踝关节液与滑膜组织,采用ELISA、Western blot和RT-qPCR分别检测白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,痛风宁中、高剂量组及秋水仙碱组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.01,P<0.05);与秋水仙碱组比较,痛风宁中、高剂量组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达无明显差异(P>0.05),痛风宁低剂量组大鼠明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论中剂量痛风宁在下调模型大鼠NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达及降低IL-1β、PGE2含量方面作用相对较佳,且首次干预后48 h抗炎作用相对明显。

NALP3炎性体在小鼠非酒精性脂肪性肝炎发病中的作用

目的探讨NALP3炎性体在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠发病中的作用。方法予C57BL小鼠高脂饮食(高脂组)及脂多糖建立非酒精性脂肪肝模型(NASH组),同时设立正常饮食组作为对照。观察各组小鼠血清ALT、AST值与计算肝指数,评定脂肪性肝炎程度,ELISA法测定肝脏TNF-α水平,蛋白质印迹法测定NF-κB、NALP3、caspase-1、ASC的表达;实时荧光定量反转录-PCR检测NALP3、caspase-1、ASC mRNA的表达水平。数据处理采用单因素方差分析及LSD法。结果 NASH组小鼠ALT、AST及肝指数明显高于高脂组,差异有统计学意义(P<0.05),高脂组和NASH组的NALP3 mRNA表达高于正常对照组(P<0.05)。NASH组caspase-1和ASC mRNA表达水平明显高于正常对照组及高脂组(P<0.01),高脂组caspase-1和ASC mRNA表达高于正常对照组(P<0.05)。NASH组NALP3、caspase-1和ASC表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),NASH组NALP3、caspase-1和ASC表达水平明显高于高脂组(P<0.05),高脂组NALP3、caspase-1和ASC表达水平与正常对照组无明显差异(P>0.05)。结论 NALP3炎性体参与胰岛素抵抗的形成,可能是影响NASH发生和发展的重要因素。

非布司他对慢性痛风性关节炎中NALP3炎性体的作用及意义

目的探讨非布司他治疗慢性痛风性关节炎及其对NALP3炎性体的影响。方法选取89例慢性痛风性关节炎患者和50例健康体检者,检测各组治疗前后NALP3炎性体mRNA及NALP3炎性体的蛋白表达水平。结果治疗组治疗前血尿酸、NALP3、ASC及Caspase-1 mRNA的表达较对照组高(P<0.05)。苯溴马隆与别嘌醇组治疗前后NALP3炎性体无改变。非布司他组治疗后血尿酸、NALP3 mRNA(P=0.040)和Caspase-1 mRNA(P=0.023)的表达明显降低(P<0.05),ASC mRNA的表达升高(P=0.043)。非布司他组治疗前后比较差异有统计学意义。结论 NALP3炎性体与慢性痛风性关节炎相关,非布司他可以更好的降尿酸并影响其功能。

非布司他联合依托考昔联合治疗急性痛风性关节炎的临床效果及对NALP3炎性体信号通路的影响

目的探究非布司他联合依托考昔联合治疗急性痛风性关节炎的临床效果及对NALP3炎性体信号通路的影响。方法选取无锡市第九人民医院2018年8月—2021年4月接诊82例的急性痛风性关节炎患者作为研究对象。以电脑随机数法将其分为联合组和对照组,对照组41例予以依托考昔给药治疗,联合组在对照组基础上联合非布司他给药,评估两组患者给药1周后的临床疗效,治疗前后血液生化指标[血尿酸(UA)、肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)]、疼痛水平、NALP3炎性体信号通路基因表达水平,统计治疗期间药物不良反应。结果联合组治疗有效率高于对照组(P<0.05);治疗后,两组NALP3、ASC及Caspase-1表达量均低于治疗前,联合组低于对照组(P<0.05);治疗后,两组患者的UA水平均低于治疗前,且联合组低于对照组(P<0.05);治疗后,两组患者的关节疼痛评分均低于治疗前,且联合组低于对照组(P<0.05);两组患者的不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论非布司他联合依托考昔治疗急性痛风性关节炎患者,可有效降低患者血液UA水平,减轻关节疼痛程度,抑制NALP3炎性体信号通路,临床疗效较优且安全良好。

清热除湿通络法对大鼠痛风性关节炎模型中NALP3炎性体表达的影响

目的:观察清热除湿通络法对大鼠痛风性关节炎模型中NALP3、Caspase-1、Pycard m RNA及NALP3、Caspase-1蛋白表达的影响。方法:将经典痛风性关节炎模型大鼠造模后采用随机数表法分为空白组、模型组、虎杖组及其各拆方组、吲哚美辛组和秋水仙碱组。造模12h后取材,随后运用RT-PCR技术检测大鼠气囊灌洗液中NALP3、Caspase-1、Pycard m RNA变化;Western blot法检测大鼠气囊灌洗液中NALP3、Caspase-1蛋白的变化。结果:以模型组为对照,虎杖组NALP3 m RNA相对表达下调,而其余组均上调;虎杖组Caspase-1 m RNA上调幅度小于其余组(除清热方组);虎杖组Pycard m RNA表达上调幅度低于其余组。虎杖组NALP3蛋白表达水平较模型组及其各拆方组、秋水仙碱组低(P<0.01,P<0.05);虎杖组Caspase-1蛋白表达量低于除湿方组、模型组(P<0.05,P<0.01)。结论:清热除湿通络法通过在蛋白质翻译层面下调NALP3、Caspase-1蛋白,干扰了NALP3炎性复合体的装配或激活,进而发挥了拮抗痛风炎性反应的作用。

基于NALP3炎性体信号通路研究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎的作用机制

目的：探究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎以及对NALP3炎性体（NACHT-LRR-PYD-containing proteins-3,NALP3）信号通路的影响。方法：将SD大鼠分为6组,分别为正常组,模型组（踝关节腔注射尿酸钠制备）,栀黄止痛颗粒低、中、高剂量（1.0,2.5,5.0 g·kg^-1）和阳性药组（秋水仙碱,3.0 g·kg^-1）,酶联免疫吸附法（ELISA）法测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-6（IL-6）,白细胞介素-1β（IL-1β）含量,造模后24 h评定大鼠步态以及关节炎症指数,造模前、造模后6,12,24,48 h测定大鼠裸关节肿胀度。苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠踝关节组织病理学变化,逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）,蛋白免疫印迹法（Western blot）,免疫组化法检测关节组织中NLRP3,IL-1β,凋亡相关斑点样蛋白（ASC）,半胱天冬酶-1（Caspase-1）表达。结果：与正常组比较,模型组血清中TNF-α,IL-6,IL-1β含量显著升高（P〈0.01）;与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组显著降低TNF-α,IL-6,IL-1β含量（P〈0.01）。与正常组比较,模型组大鼠步态较差、关节肿胀显著（P〈0.01）;与模型组比较,秋水仙碱组、药物处理组步态、关节肿胀得到所改善,随着药物剂量浓度的增加,步态、关节肿胀分级逐渐降低（P〈0.05,P〈0.01）。与正常组比较,模型组踝关节组织中NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白表达显著升高（P〈0.01）;与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组均显著降低NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白的表达（P〈0.01）。免疫组化显示,与正常组比较,模型组NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1表达阳性表达量显著升高,而与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒中、高剂量组显著降低阳性表达率（P〈0.01）,具有剂量依赖性。结论：栀黄止痛颗粒能够缓解痛风性关节炎大鼠关节肿胀,其机制可能与抑制NALP3炎性体信号通路有关。

NALP3炎性体在痛风发病中的作用与药物治疗研究进展

痛风是体内嘌呤代谢紊乱引起尿酸钠盐沉积所致的晶体相关性疾病。近年研究表明,核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NALP3)炎性体活化与巨噬细胞吞噬尿酸钠晶体密切相关。NALP3炎性体活化后可剪切半胱天冬酶-1并促进白介素1β释放,引起痛风炎症反应。现将从NALP3炎性体的组成及活化、尿酸钠晶体的吞噬识别途径,以及以NALP3炎性体为靶点的抗痛风药物等方面作一综述。

痛风宁含药血清对尿酸盐诱导THP-1中NALP3炎性体相关蛋白及炎症因子表达的影响

目的通过检测痛风宁含药血清对尿酸盐(monosodium urate,MSU)诱导人单核细胞株THP-1(human monocytic cell line,THP-1)中NALP3炎性体相关蛋白与mRNA及上清液中IL-1β、PGE_2表达的影响,探讨痛风宁对痛风性关节炎的抗炎机制。方法制备低、中、高剂量痛风宁含药血清。将THP-1随机分为空白组和MSU干预组,MSU干预组予200 mg/L MSU混悬液诱导12 h建立炎症细胞模型,模型鉴定成功后采用随机数字表法分为模型组及低、中、高剂量痛风宁含药血清组(以下简称低、中、高剂量痛风宁组)、阳性对照组,分别予10%空白血清,10%低、中、高剂量痛风宁含药血清,10%空白血清+Caspase-1抑制剂干预,无MSU干预的空白组予10%空白血清干预。24 h后,离心收集各组THP-1及细胞上清液。采用ELISA检测各组细胞上清液中IL-1β、PGE_2含量,Western Blot、RT-qPCR分别检测各组THP-1中NALP3、Caspase-1、ASC蛋白及mRNA表达。结果与空白组比较,模型组NALP3、Caspase-1、ASC蛋白与mRNA表达及IL-1β、PGE_2含量均升高(P<0.01);各剂量痛风宁组所有指标均低于模型组及阳性对照组(P<0.01),同时低、高剂量痛风宁组所有指标水平均高于中剂量痛风宁组(P<0.05,P<0.01);阳性对照组Caspase-1蛋白表达及IL-1β、PGE_2含量低于模型组(P<0.01),Caspase-1 mRNA、NALP3、ASC蛋白及mRNA表达与模型组差异无统计学意义(P>0.05)。结论痛风宁对AGA的抗炎机制可能与抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达,减少炎症因子IL-1β、PGE_2的产生有关。

NALP3炎性体及相关肿瘤性疾病发病机制的研究进展

NALP3(NACHT-LRR-PYD-containing proteins 3 inflammasome)是NOD样受体(NOD-like receptors,NLRs)蛋白家族中典型代表,有调节机体免疫及调控炎症反应的作用,通过促进多种炎性介质(如IL-1β、IL-6、TNF-α等)释放可增加自身免疫性疾病及非感染性疾病的发生风险,近年来有许多研究表明NALP3炎性体还与肿瘤的发生、逃逸及转移有关,使之成为肿瘤性疾病研究的新热点。本文主要针对NALP3炎性体的结构、激活方式及相关肿瘤疾病做一综述。

高压氧对脊髓损伤大鼠 NALP3炎性体表达的影响

目的：建立脊髓损伤（ spinal cord injury ， SCI ）大鼠模型，探讨高压氧（ hyperbaric oxygen ， HBO）对SCI大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NACHT－LRR－PYD－containing protein 3， NALP3）炎性体表达的影响，为SCI损伤及修复机制研究奠定基础。方法成年SD大鼠120只，体质量250～300 g，按数字表法随机分为4组：SCI组，使用NYU脊髓损伤专用撞击器，以25 gcm致伤能量损伤大鼠T10脊髓节段；SCI＋HBO组，SCI造模后辅助以HBO处理；假手术对照组（ SH组），仅打开T10节段椎板，显露脊髓，不造成SCI；SH＋HBO组，假手术处理后辅以HBO；各组分别于造模后12 h和1、3、7、14 d处死，取脊髓损伤节段组织检查NALP3炎性体的表达。结果用相对定量2－ΔΔCT法分析RT－PCR结果显示在1、3、7 d时SCI ＋HBO 组的NALP3、凋亡相关斑点样蛋白（ adaptor molecule apoptosis－associated speck－like protein， ASC）、半胱天冬酶－1（cysteine aspartic acidspecific protease ， caspase－1）的mRNA含量与相应的SCI组相比明显降低（P＜0．05或P＜0．01），表明HBO处理可降低大鼠SCI组织的NALP3炎性体的mRNA表达水平；用软件灰度分析Western－blot结果显示，SCI＋HBO组与SCI组相比NALP3的灰度值在1、3、7 d明显降低，ASC和caspase－1的灰度值与SCI组相比在3、7 d明显降低（ P＜0．05或P＜0．01），表明HBO处理可降低SCI组织的NALP3、ASC、capase－1蛋白的表达。结论 HBO处理可降低大鼠SCI组织的NALP3、ASC、caspase－1的mRNA和蛋白的表达水平，通过抑制NALP3炎性体的激活而减轻脊髓继发性损伤，保护损伤区周围残存的神经细胞。

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活NALP3炎性复合体诱导THP-细胞产生IL-1β和IL-18

目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5质粒蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用,并初步分析其分子机制。方法:用0、3、6、12、24、36μg/ml不同浓度的pORF5蛋白刺激THP-1细胞,并于0、8、16、24、36 h收集上清及细胞,ELISA检测IL-1β和IL-18的含量;Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体mRNA表达水平,Western blot鉴定Caspase-1活化状态;分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA转染THP-1细胞24 h或用Caspase-1特异性抑制剂(Z-YVADFMK)预处理THP-1细胞30 min后,再用24μg/ml的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞24 h,ELISA分析各处理因素对IL-1β和IL-18产生的影响。结果:pORF5质粒蛋白以浓度依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18。当pORF5质粒蛋白浓度为24μg/ml时,IL-1β和IL-18的表达水平最高,分别为491 pg/ml、186 pg/ml;同时pORF5质粒蛋白以时间依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18,两者分别在24 h和16 h达到峰值。pORF5质粒蛋白可增强THP-1细胞NALP3、ASC和Caspase-1 mRNA的表达,促进Caspase-1的活化;NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制剂处理组IL-1β和IL-18的产生水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论:pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。

痛风宁对急性痛风性关节炎模型大鼠IL-1β,TNF-α及NALP3炎性体的影响

目的：从核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NALP3）炎性体角度探讨痛风宁的抗炎作用机制。方法：将48只SD大鼠随机分为造模大鼠36只、正常大鼠12只。造模大鼠采用踝关节局部注射O．2mL尿酸钠（monosodium urate，MSU）混悬液建立急性痛风性关节炎（acute outyarthritis，AGA）模型，正常大鼠予相同部位注射生理盐水。造模成功后，随机分为模型组、痛风宁组、秋水仙碱组，分别用生理盐水、痛风宁药液、秋水仙碱混悬液灌胃，每天2次，共3d。正常大鼠为正常组，同时予等量生理盐水灌胃。造模成功后72h，行腹腔注射麻醉后取踝关节液及滑膜组织。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠踝关节液白细胞介素-1β（IL-lβ），肿瘤坏死因子-a（TNF-a）含量；蛋白免疫印迹法（Westernblot）及实时荧光定量PCR（Real-timePCR）检测滑膜组织NALP3炎性体相关蛋白与mRNA表达。结果：与正常组比较，模型组大鼠踝关节液IL-1β，TNF-α含量显著升高，滑膜组织NALP3，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1），凋亡相关斑点样蛋白（ASC）蛋白及mRNA表达均显著增加（P〈0．01）；与模型组比较，痛风宁组与秋水仙碱组大鼠踝关节液IL-1β，TNF-1β含量显著下降，且滑膜组织中NALP3，Caspase-1，ASC蛋白及mRNA表达均显著降低（P〈0．01）；与秋水仙碱组比较，痛风宁组大鼠踝关节液IL-1β ，TNF-a含量仍较高（P〈0．05），但滑膜组织中NALP3，Caspase-1，ASC蛋白及mRNA表达均较低（P〈0．05，P〈0．01）。结论：痛风宁对AGA的抗炎作用机制可能是通过抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达，从而减少IL-1β，TNF-α的生成，减轻关节炎症反应。

火针对急性痛风性关节炎大鼠NALP3、IL-1β表达的影响

目的观察急性痛风性关节炎模型大鼠NALP3炎性体及IL-1β的表达,探讨火针对其的影响及可能作用机制。方法 75只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、火针组、针刺组及秋水仙碱组5组,每组15只。除正常组外,其余各组采用氧嗪酸钾联合Coderre方法造模。各组采取相应干预措施。于治疗第1天、治疗第4天、治疗第7天取材记录,采用酶联免疫法检测大鼠血清NALP3及IL-1β水平变化,免疫组化法检测大鼠关节滑膜NALP3、IL-1β的变化。结果 (1)治疗第1天,与正常组比较,模型组、火针组、针刺组及秋水仙碱组关节滑膜NALP3及IL-1β水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)治疗第4天,与正常组比较,模型组及针刺组血清NALP3水平升高,差异有统计学意义(P<0.01);模型组、针刺组血清IL-1β水平均升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,火针组及秋水仙碱组血清IL-β、NALP3表达受到抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,火针组、针刺组及秋水仙碱组关节滑膜IL-1β、NALP3表达受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)治疗第7天,与正常组比较,仅模型组血清IL-1β仍处于较高水平,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,仅秋水仙碱组血清IL-1β下降明显,差异有统计学意义(P<0.05)。各组NALP3恢复正常水平,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论火针治疗急性痛风性关节炎的分子机制可能与火针具有抑制血清NALP3炎性体的活化和IL-1β的成熟分泌作用相关联。