NaOH消蚀法制备胎儿脱细胞真皮基质的研究

目的:探索NaOH消蚀法对胎儿真皮基质的成分及其形态结构的影响。方法:使用NaOH消蚀法制备胎儿皮肤的脱细胞真皮基质(ADM),应用组织化学和免疫组织化学染色方法检测细胞的余留及细胞外基质成分的破坏情况,应用扫描电镜观察ADM的构筑。结果:NaOH消蚀处理16h即可去除真皮细胞成分。制备的ADM韧性好,勿需戊二醛交联。弹性纤维的含量有所减少而胶原纤维形态完整,排列正常,保留了基本的真皮构筑。HLA-DR呈阴性,Fibronectin(FN)呈弱阳性,Laminin(LN)和Ⅳ型胶原均呈阴性。结论:NaOH消蚀法简易经济,去除细胞成分较彻底,所制备的ADM韧性好,胶原纤维形态完整,排列正常,但对基膜的成分及结构破坏较重。

NaOH消蚀法制备脱细胞真皮基质修补腹壁疝

背景:与其他疝修补材料相比,脱细胞真皮基质具有易血管化、抗感染、从而可用替代传统补片用于感染腹壁缺损重建等特点。目的:观察NaOH消蚀法制备的脱细胞真皮基质作为修补材料应用于腹疝的应用价值。方法:以全厚猪皮制成脱细胞真皮基质,45只SD雄性大鼠制备腹壁疝模型,随机数字表法分为腹壁疝组:直接缝合皮肤,Marlex网组和脱细胞真皮基质组:分别应用大小为3.5cm×4.0cm的Marlex网和脱细胞真皮基质缝合皮肤;观察修复后1周时有无腹壁疝发生,脱细胞真皮基质组修复后1,2,3,5,10周分别取材,其中每周各组取4只用于苏木精-伊红染色,光镜观察。修复后第5周Marlex网组和脱细胞真皮基质组各取6只用于抗张力试验。结果与结论:术后1周脱细胞真皮基质组与Marlex网组腹壁疝发生率均显著低于腹壁疝组(P<0.001)。脱细胞真皮基质的胶原纤维无明显变化,即有少量成纤维细胞植入,术后2周可见新生血管,术后5周脱细胞真皮基质内部血管密度基本稳定。将单独脱细胞真皮基质片与Marlex网行抗张力试验,Marlex网的抗张力显著高于脱细胞真皮基质(P<0.001)。但植入体内5周后,脱细胞真皮基质筋膜组织的抗张力高于Marlex-筋膜组织(P<0.05)。提示复合消蚀制备的脱细胞真皮基质可以作为良好的疝修补材料。

NaOH消蚀法制备骨细胞外基质材料的实验研究

目的 : 研制一各新型的天然骨移植替代材料 ,为其临床应用提供实验依据。方法 : 采用NaOH消蚀法制作家兔骨细胞外基质支架 ,扫描电镜观察 ;对支架行生物相容性实验 ,将支架埋植于兔背部肌肉内 ,分别于术后 1周、2周、4周、6周取出行组织学观察 ,X射线能谱分析埋植前、后化学元素组成的改变。结果 : (1)SEM观察 ,以NaOH消蚀处理后 ,骨组织中的细胞成分被彻底清除掉 ,细胞外基质成分 -胶原纤维及骨盐则维持原有形态及三维立体网状结构。 (2 )光镜下观察 ,支架周围有成纤维细胞及毛细血管增生 ,轻度淋巴浸润 ;支架结构随埋植时间渐稀疏、紊乱。 (3)X射线能谱分析结果 ,埋植后钙原子含量低于埋植前水平 (p <0 .0 0 1)。结论 : NaOH消蚀骨支架作为骨移植替代材料 ,其三维立体网状结构为成骨细胞发挥功能提供了有利空间 ,有可能作为骨组织工程中种子细胞的载体 ;骨盐的存在使其具有一定的力学强度 ,适宜修复较大节段的骨缺损 ;组织相容性好 ,在体内可降解吸收。

人胰结缔组织纤维的细微和超微构筑及其意义——NaOH消蚀法SEM观察

目的:探讨胰结缔组织纤维的细微和超微构筑及其意义。方法:采用NaOH消蚀和超声波(USW)清洗技术,制备只保留结缔组织纤维成分的人胰组织样品,进行扫描电镜(SEM)观察和分析。结果:经NaOH消蚀和USW清洗处理的胰组织,其细胞和基质成分全被消蚀掉,只留有结缔组织纤维,仍保持原有构筑特征。胰腺小叶、小叶间结缔组织和胰岛的轮廓清晰可见。穿行于小叶间结缔组织内的胰腺导管、动脉和静脉血管、淋巴管以及神经纤维束,易被辨认和区别。结缔组织纤维织成的束或网,均由胶原蛋白聚合而成的纳米(10-100mm)纤维,或称胶原细纤维所组成。结论:活体上充满组织液的胰结缔组织纤维网,构成了该器官的组织支架和通道,为胰内、外分泌细胞的支持与保护、营养与代谢、分泌与通讯、再生与修复等,提供了适宜的微环境。

戊二醛交联时间对人脱细胞真皮基质生物学性质的影响

目的:探讨戊二醛交联时间对人脱细胞真皮基质(ADM)生物学性质的影响。方法:用低浓度戊二醛交联高渗盐-NaOH消蚀法制备的人ADM,根据交联时间的不同分为交联10、15、20、30min组,大体观察各组的物理性状;免疫组织化学检测各组Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达;MTT细胞毒性实验评价4组ADM的细胞毒性反应;将NIH3T3细胞接种于各组ADM上,比较24h细胞贴壁数并观察细胞生长情况;将人成纤维细胞与交联10、15min组ADM体外复合培养,观察细胞生长和增殖情况。结果:随着交联时间延长,ADM的韧性逐渐增加;各组ADMⅠ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达阳性;ADM细胞毒性反应交联10和15min组0～1级、20min组1～2级、30min组1～3级;交联10、15min组分别与20min组24h3T3细胞贴壁数比较有统计学意义;而交联10、15min两组间无统计学意义;3T3细胞能够在交联10、15min组ADM表面贴附、增殖;免疫荧光法显示鼠抗人波形蛋白抗体呈阳性,有较多的人成纤维细胞黏附于交联10和15min组ADM上,生长和增殖良好。结论:戊二醛化学交联10～15min的人ADM蕴涵丰富的生物信息,细胞毒性小,生物相容性好,是一种很好的生物支架材料。

人窦房结胶原纤维网架的构筑

目的 :观察人窦房结胶原纤维网架的构筑及其与窦房结中央动脉的关系。方法 :用NaOH消蚀法扫描电镜观察成人窦房结。结果 :人窦房结中央动脉管壁的纤维网架分为内膜、中膜和外膜 3层 ;在窦房结中央动脉周围 ,形成厚约 5 0～ 80 μm的致密的动脉周围层 ;再向外是中央层 ,窦房结实质细胞就位于其胶原纤维隔围成的直径约 8～ 1 6μm的孔洞中 ;中央层与普通心肌胶原纤维网架间的界限明显。 结论 :人窦房结胶原纤维网架的构筑 ,有利于消除中央动脉博动的影响 。