鼻咽癌相关基因NAP1的克隆及鉴定

从UniGene库中选取编号为BG2 31197,来自人鼻咽组织的EST序列 .利用Blast检索GenBank的nr数据库和EST数据库 ,构建EST重叠群 .利用人类基因组草图搜索法从成人正常鼻咽组织中PCR扩增获得该基因全长cDNA ,命名为NAP1,GenBank登录号为AY190 32 6 .NAP1基因cDNA序列全长为 5 73bp ,编码由 85个氨基酸组成 ,相对分子质量为 970 0的多肽 .用α 3 2 P dCTP标记NAP1基因片段 ,与含 15种正常成人组织的多组织RNA印迹膜杂交 ,结果表明NAP1基因在淋巴结和气管中高表达 ,转录本大小约为 0 6kb ,在其他组织中不表达 .NAP1蛋白质与滤泡树突状细胞 (folliculardendriticcell,FDC)的一种分泌肽前体 (FDC SP) (AF4 35 0 80 )同源 ,与其他已知蛋白质无明显同源性 .NAP1基因定位在染色体 4q13,基因组跨越 9179bp ,含 5个外显子和 4个内含子 .采用差异RT PCR检测了 4 0例经病理诊断为低分化鳞状上皮癌的鼻咽活检组织及其对侧相应部位的正常鼻咽组织中该基因的表达差异 .在 4 0例鼻咽癌中 ,NAP1基因表达下调的有 17例 (4 2 5 % ) ,表达上调的有 6例 (15 % ) ,无明显表达差异的有 17例 (4 2 5 % ) .原位杂交和免疫组化结果显示该基因在正常鼻咽和鼻咽癌组织间质中的树突状细胞中表达 。

NAP1基因在鼻咽癌组织中表达下调原因的初步分析

目的:分析NAP1基因在鼻咽癌组织中表达下调的原因。方法:正常鼻咽组织及鼻咽癌组织的常规HE染色和小鼠抗人CD35单克隆抗体免疫组化检测。在光镜40倍视野(1.77 mm2)下观察20例正常鼻咽组织及40例鼻咽癌组织中位于次级淋巴滤泡中的生发中心数目。NAP1蛋白的表达水平用免疫组化检测。同时进行NAP1基因编码区的PCR-SSCP分析及NAP1基因的5’非翻译区的CpG岛分析。结果:在正常鼻咽间质存在次级淋巴滤泡及其位于生发中心的滤泡树突状细胞的浸润,在鼻咽癌间质淋巴细胞成片处以及癌旁组织有少量滤泡树突状细胞存在,且数目明显少于正常鼻咽粘膜。正常鼻咽组织中生发中心的平均数目为1.2个/1.77 mm2,而鼻咽癌组织中生发中心的平均数目为0.4个/1.77 mm2。另外,NAP1蛋白的表达水平与正常鼻咽间质和鼻咽癌组织间质中位于生发中心的滤泡树突状细胞数目成正比。在NAP1基因编码区未发现点突变。在NAP1基因的5’非翻译区未发现CpG岛。结论:鼻咽癌组织中次级淋巴滤泡及其位于生发中心的滤泡树突状细胞数目的减少可能是NAP1基因在鼻咽癌组织中表达下调的主要原因。

NAP1基因和ARHP基因启动子区的生物信息学分析

采用进化足迹法,利用生物信息学在线软件,分析了鼻咽癌相关肽基因NAP1和成人视网膜假定蛋白基因ARHP的启动子结构,在人和小鼠NAP1基因的启动子保守区内预测出38个共同的转录因子结合部位,在人和小鼠ARHP基因的启动子保守区内预测出44个共同的转录因子结合部位,分析结果为NAP1基因和ARHP基因调控区的分析与鉴定,基因表达调控机制的研究提供了重要的参考.