猪传染性胃肠炎病毒NASBA检测方法的建立

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NASBA的检测方法,本研究利用BioEdit和BlastN,根据GenBank中猪TGEV的S基因保守序列设计引物,建立了扩增TGEV的NASBA检测技术。利用该方法建立的反应体系在41℃反应2h即可得到有效扩增。实验结果表明:该方法对TGEV进行扩增获得约200bp特异性目的条带,而对CSFV、PRRSV、PCV-2、PPV、PEDV和ST细胞扩增结果均为阴性。NASBA的灵敏度高于普通RT-PCR,与病毒分离方法相当,可检测到5pg的核酸。该方法为TGEV的早期诊断提供了新途径。

鸭病毒性肝炎病毒NASBA检测方法的建立

为了建立对鸭病毒性肝炎的检测方法,快速诊断DHV,本研究建立了DHV的NASBA检测方法并加以验证,实验结果表明该方法具有特异性、敏感性可重复性,该方法为鸭病毒性肝炎的诊断提供技术支持。

国境口岸志贺氏菌的NASBA快速检测

目的采用NASBA技术,建立国境口岸志贺氏菌的快速检测方法。方法根据志贺氏菌侵袭性质粒抗原ipa H基因设计引物,进行NASBA检测,并采用人工添加菌株污染样品进行验证。结果 NASBA技术检测志贺氏菌特异性强,能够从污染样品中扩增出391bp的特异性片段,试验中未出现假阳性和假阴性结果,灵敏度高,检出限达到8.2pg/μL总RNA;且检测周期短,NASBA反应在42℃90min即可进行有效扩增,24h即可完成样品中目标菌的筛选。结论因NASBA技术具有特异性强,灵敏度高,检测周期短等优点,不仅适用于国境口岸现场快速检测志贺氏菌,而且随着该技术的不断发展,必将有更为广阔的应用空间。

HIV-1抗体蛋白印迹确认与核酸检测复核对比研究

应用病毒核酸载量法NASBA和HIV-1 RNA的巢式逆转录PCR(nested RT-PCR)法与HIV抗体蛋白印迹(WB)方法,对经过初筛的44例HIV-1抗体阳性标本进行了对照检测研究。发现了2例(gp160、p24)和1例(gp160g、p120p、66、p24)的特殊阳性样本,经NASBA法和该RT-PCR法核酸检测为阴性;WB确认的4例gp160阳性带、1例p24、p17阳性带和13例p24阳性带,经NASBA法和该RT-PCR法核酸检测也为阴性;而WB确认的其余全部带型的抗体阳性标本经过NASBA法和该RT-PCR法检测均为阳性。该研究表明对只有gp160p、24和gp160、gp120p、66、p24的特殊阳性标本和以p24为主的抗体不确定标本需要用RT-PCR或NASBA方法进行核酸检测,以进一步确认。

661份HIV抗体阳性血浆样本HIV-1 RNA浓度测定

目的 评价HIV感染者和艾滋病人体内病毒载量水平。方法 用新一代NASBA试剂及其检测系统(NUCLISENSTM HIV 1QT)测定 6 6 1份来自HIV感染者和艾滋病人的抗体阳性血浆样本HIV 1RNA浓度。结果 6 6 1份样本中 ,血浆HIV 1RNA浓度能被NASBA方法定量的样本数为 4 6 9份 (70 .95 % ) ,不能定量 (低于试剂盒可检限 )的样本数为 192份 (2 9.0 5 % )。 4 6 9份能被定量的样本中 ,HIV 1RNA浓度 (cp/ml)≤ 5 0 0、5 0 1～ 30 0 0、30 0 1～ 10 0 0 0、10 0 0 1～ 30 0 0 0、>30 0 0 0的样本百分率分别为 2 .98%、2 0 .90 %、17.70 %、14 .2 9%和 4 4 .13%。结论 血浆HIV 1RNA浓度能被定量的HIV 1感染者和艾滋病人体内病毒载量具有普遍偏高趋势。

8项新标准为防制禽流感助力

1月23日,我国发现首例禽流感。2月15日,国家质检总局8项关于禽流感病毒检测方法、检疫和防治规范的系列国家标准就发布实施。这是个奇迹!也是厚积薄发的体现。说奇迹是因为国家标准化主管部门紧急启动了国家标准快速制定程序,在短短的23天中8项系列标准就发布实施了;说厚积薄发是因为我们质检部门和农业部门多年来对禽流感病毒检验检疫和疫情防治的深入研究,正所谓养兵千日,用兵一时。本栏因篇幅所限,仅摘登8项新国标的部分内容,希望能对读者有所帮助。