IFN-α联合As_2O_3对NB4细胞株VEGF及Survivin表达的影响

目的探讨IFN-α联合不同浓度As2O3对NB4细胞株血管内皮生长因子(VEGF)、凋亡抑制蛋白(Sur-vivin)表达的影响。方法实验分不同浓度的As2O3即0、0.1、0.5、1.0、2.0μmol/L及不同浓度As2O3联合IFN-α共10组,利用MTT法检测细胞毒性反应,同时采用免疫组织化学方法半定量分析NB4细胞VEGF、Survivin表达的动态变化。结果Survivin在未加药组阳性率为93.8%,VEGF在未加药组阳性率为82.4%。As2O3(≤1.0μmol/L)作用后VEGF表达增加,但无统计学意义;Survivin表达下降(P<0.029)。2.0μmol/L As2O3作用下两者表达均明显降低(P=0.006;P=0.000);联合IFN-α组两者表达均明显降低(P=0.000),分析两者呈正相关(r=0.8754)。结论IFN-α联合As2O3可降低VEGF、Survivin的表达,提示IFN可以降低As2O3对NB4细胞凋亡抑制基因的表达,具有调控细胞凋亡的作用。

槲皮素对体外培养NB4细胞株p53表达的影响

目的 为研究治疗白血病的有效药物。方法 将槲皮素作用于培养的 NB4细胞株 ,应用 RT- PCR及western blot方法 ,研究不同浓度槲皮素 (30、6 0、90μm)诱导细胞 2 4、48、72、96、12 0 h后 ,白血病 NB4细胞株中突变型 p5 3基因及蛋白表达的情况。结果 证实其 30～ 90 μm浓度时对突变型 p5 3基因没有影响 ,而对突变型 p5 3蛋白的表达产生抑制作用。

黄芪及其与柔红霉素联用对白血病NB4细胞株增殖的影响

背景与目的蒽环类药物对心脏的毒性不同程度的限制了其临床应用,中药黄芪对心肌细胞有一定的保护作用,而黄芪对白血病细胞的干预情况了解甚少。本实验旨在了解黄芪以及与柔红霉素(DNR)联合应用时对培养的人白血病细胞株NB4增殖的影响。方法以NB4细胞株为实验模型,实验细胞分为4组空白对照组(不加任何药物)、黄芪组、DNR组及黄芪+DNR组。分别于24、48和72h3个时相收集细胞分析,应用Annexin V+碘化丙锭双染色法观察细胞凋亡情况,以及激光共聚焦显微镜(LSCM)对细胞内DNR蓄积情况进行定性和定量分析检测。结果3个时相收集细胞,黄芪组细胞凋亡率分别为(4.11±0.45)%、(4.68±0.59)%和(6.76±0.85)%,空白对照组为(3.58±0.48)%、(4.81±0.62)%和(5.88±0.82)%,两组差异无显著性(P>0.05);DNR组为(24.31±4.21)%、(39.74±5.26)%和(53.99±7.20)%,黄芪+DNR组为(25.13±4.82)%、(38.92±5.40)%和(60.48±7.89)%,两组差异无显著性(P>0.05)。LSCM检测DNR在细胞内的蓄积情况显示,3个时相DNR组荧光强度分别为112.87±31.68、173.54±38.15和179.33±40.95,黄芪+DNR组为146.67±42.47、148.87±50.28和157.04±43.67,两组差异无显著性(P>0.05)。而DNR组、黄芪+DNR组与空白对照组相比,差异均有显著性(P<0.05)。结论黄芪对NB4细胞的增殖无明显促进或抑制,与DNR联用时,不会影响DNR对白血病细胞的抑制作用。

补骨脂素加长波紫外线对人白血病细胞株NB4、HL-60、K562作用的研究

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法对人白血病细胞株NB4、HL-60、K562的作用。方法以NB4、HL-60、K562细胞株为研究对象,以细胞抑制率、凋亡率及在电镜下细胞超微结构改变为检测指标,观察PSO加波长360nm的UVA对人白血病细胞株的影响,并分析各因素间的交互作用。结果当PSO浓度均为80μg/ml,UVA照射时间分别为10min、15min和15min时,NB4、HL-60、和K562细胞的抑制率分别达峰值;当PSO浓度分别为40μg/ml、80μg/ml和80μg/ml,UVA照射时间为10min、15min和15min时,NB4、HL-60和K562细胞的凋亡率达峰值。不同PSO浓度、不同UVA照射时间对不同白血病细胞株的抑制率、凋亡率的差异有统计学意义,且各因素之间有交互作用。电镜下观察经PSO和UVA处理后的NB4、HL-60及K562细胞超微结构,均可见明显的凋亡形态学改变。结论PSO加UVA(PUVA)可抑制白血病细胞株NB4、HL-60、K562的生长,并可诱导其凋亡。浓度为40～80μg/mlPSO与波长为360nm的UVA照射10～15min是PUVA抗NB4、HL-60、K562白血病细胞的最佳作用点。

人APL细胞株NB4不同二维电泳条件对电泳结果的影响

本研究探讨不同二维电泳条件对人急性早幼粒细胞性白血病 (APL)细胞株NB4二维电泳结果的影响。选用 2 4cm ,pH3- 10L的固定 pH梯度 (immobilizedpHgradient,IPG)胶条 ,用IPGphor进行第一相等电聚焦 ,然后用EttanDaltII垂直电泳系统进行第二相SDS PAGE ,银染后用ImageMaster 2DElite软件进行分析。结果表明 :采用低离子强度的缓冲液冲洗收集样品可以提高等电聚焦效果。裂解液中 7mol/L尿素、4 0mmol/LDTT能溶解NB4细胞大部分蛋白质 ,而水化液中硫脲与尿素合用可以明显增加碱性端中低分子量区可分辨的蛋白质点。NB4细胞用 2 4cm ,pH3- 10L的IPG胶条进行二维电泳时 ,10 0 μg左右的上样量、6 32 0 0V小时左右的等电聚焦时间是恰当的。结论 :APL细胞的蛋白质种类繁多 ,受多种因素影响 ,正确选择样品制备方法和二维电泳条件十分重要。

蛋白磷酸酶2A在三氧化二砷诱导NB4、MR2细胞株凋亡过程中的变化

本研究探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性与表达的变化。不同浓度ATO单用或与冈田酸(OKA)联合作用于NB4、MR2细胞,然后采用MTT法测定药物对细胞增殖的影响,用瑞氏染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术测定细胞凋亡率,丝/苏氨酸磷酸化酶检测试剂盒分析药物对细胞内PP2A活性的影响,Western blot检测细胞内PP2A各亚基表达。结果表明:蛋白磷酸酶抑制剂OKA能明显增强ATO对NB4、MR2细胞的增殖抑制;OKA能促进ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡;ATO诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中PP2A活性均下降,且随ATO浓度的增加PP2A活性下降越明显;与OKA连用后PP2A活性下降更加明显;在ATO诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中,PP2A/A表达较对照组均明显减少,而B和C亚基表达与对照组比较变化不明显。结论:在ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡过程中,细胞内PP2A/A表达减少,PP2A活性降低,且随ATO浓度增加PP2A活性下降越明显,抑制PP2A活性有助于ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡。

IFNγ联合全反式维甲酸对白血病细胞株NB4、MR2增殖和分化的影响

背景与目的:全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)的应用,使90%以上的急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)患者获得了完全缓解,但维甲酸耐药的快速发生成为ATRA治疗APL的一大缺憾。许多研究表明ATRA耐药与缺乏干扰素合成的某些蛋白质有一定的关系,本研究拟探讨干扰素联合ATRA作用抑制ATRA耐药APL细胞增殖和分化的可能性及其机制。方法:γ干扰素(interferonγ,IFNγ)、ATRA单独或联合作用于ATRA敏感细胞株(NB4)及ATRA耐药细胞株(MR2)后,采用MTT法检测细胞的增殖,用光镜观察和NBT还原实验检测细胞的分化,间接免疫荧光法观察早幼粒细胞白血病(promyelocyticleukemia,PML)蛋白表达的情况。结果:第8天时,IFNγ组、ATRA组和(IFNγ+ATRA)组NB4细胞的生长抑制率依次为68.0%、85.0%和95.2%;MR2细胞的生长抑制率依次为24.1%、4.3%和51.5%。联合用药组NB4细胞、MR2细胞的生长抑制率明显高于单独用药组(P<0.05)。第3天时,IFNγ组、ATRA组和(IFNγ+ATRA)组NB4细胞的NBT阳性率依次为19.3%、74.7%和93.3%,MR2细胞的NBT阳性率依次为16.8%、5.2%和31.5%,联合用药组NB4细胞、MR2细胞的NBT阳性率明显高于单独用药组(P<0.05)。IFNγ作用后,NB4细胞和MR2细胞核内的荧光颗粒较对照组明显增多。结论:IFNγ与ATRA具有协同作用,二者联合应用不仅能够增强ATRA对NB4细胞和MR2细胞的增殖抑制作用,而且能够部分诱导对ATRA耐药的MR2细胞发生分化。

复方黄黛片含药兔血清对NB_4细胞株作用的研究

目的研究复方黄黛片含药兔血清对NB_4细胞株的作用。方法以免为实验血清的供体,以给药与否及血清灭活与否为分组依据,采用双道原子荧光法检测血清中砷的浓度,以细胞抑制率及凋亡率为观察指标,对实验结果进行分析。结果(1)给药前、后兔血清中砷剂浓度分别为(0.01±0.001)mg/L和(0.11±0.006)mg/L,差异显著;(2)四组兔血清对NB_4细胞株生长均有抑制作用,且对NB_4细胞株生长的抑制作用具有一定的浓度及时间依赖性;(3)四组兔血清均可诱导NB_4细胞株发生凋亡,且该作用具有一定的浓度及时间依赖性。结论(1)复方黄黛片含药兔血清可明显抑制人急性早幼粒细胞白血病NB_4细胞株的生长、抑制作用呈一定的浓度、时间依赖性;(2)复方黄黛片含药兔血清可诱导人急性早幼粒细胞白血病NB_4细胞株发生凋亡,该作用呈一定的浓度、时间依赖性;(3)中药血清药理学方法用于深入研究复方黄黛片抗白血病作用机理,能够较真实反映机体血药浓度下的作用及变化规律,能够全面展示复方黄黛片各组分的共同作用,具有可行性和科学性。

威灵仙总皂苷诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化作用的研究

目的研究威灵仙总皂苷对NB4细胞分化的影响。方法取对数生长期的NB4细胞,设置多个浓度梯度的威灵仙总皂苷药物组,观察用药后不同时间点NB4活细胞数,计算生长抑制率;Wright's-Giemsa染色计数法和NBT还原试验测定细胞分化率,透射电镜观察细胞形态学变化;流式细胞术检测CD11b/CD33表达情况。结果与空白对照组比较,威灵仙总皂苷对NB4细胞有明显的生长抑制作用,且具有剂量-效应依赖关系;但具有统计学意义的诱导分化现象不明显。结论威灵仙总皂苷可有效抑制NB4细胞增殖,但对NB4细胞无明显的诱导分化作用。

柠檬醛诱导白血病细胞株NB4凋亡的分子机制

目的探讨柠檬醛(Citral)诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的分子机制。方法Citral处理NB4细胞后,采用DNA Ladder检测断裂DNA;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blot检测caspase3、9的活化以及Bcl-2家族中Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1蛋白的表达水平变化;实时荧光定量PCR法检测Mcl-1 mR-NA的表达水平变化。结果Citral诱导NB4细胞凋亡呈现剂量和时间依赖性;caspase3、9在Citral作用后均发生活化;Citral处理的NB4细胞抗凋亡蛋白Mcl-1表达水平下降,但其mRNA的表达水平改变无统计学意义。结论Citral诱导NB4细胞凋亡,其中线粒体途径是重要的凋亡途径,这可能和抗凋亡蛋白Mcl-1的下调有关,Mcl-1的下调发生在转录后水平。

辛伐他汀对急性髓系白血病NB4细胞株DNA甲基转移酶的影响

目的探讨辛伐他汀对急性髓系白血病(AML)NB4细胞株DNA甲基转移酶(DNMT)的影响及其作用机制。方法将NB4细胞与不同浓度辛伐他汀(终浓度为0、5、10、15μmol/L)共处理。DNA甲基转移酶活性/抑制试验测定DNMT活性,采用实时定量PCR法检测DNMT1、DNMT3A、P53 m RNA的表达水平,采用Western blotting法检测DNM T1、DNM T3A、DNM T3B蛋白水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果辛伐他汀处理后,剂量依赖性的DNMT活性下调(P<0.05);DNMT1、DNMT3A m RNA及蛋白水平降低,P53 m RNA表达水平增高(P<0.05),DNM T3B蛋白表达未见明显变化(P>0.05);辛伐他汀促进NB4细胞凋亡。结论辛伐他汀在NB4细胞中可降低DNMT的活性及表达水平并促进细胞凋亡,有望作为DNMT抑制剂治疗急性白血病。

蓬子菜总黄酮诱导NB4细胞株凋亡作用

目的探讨蓬子菜总黄酮(FGVL)抗急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4的作用及诱导凋亡的分子机制。方法噻唑蓝法检测FGVL对细胞增殖的抑制作用;吖啶橙/溴乙锭荧光染色观察NB4细胞凋亡的形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链式反应检测凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达。结果 FGVL明显抑制NB4细胞增殖,FGVL50、100、200μg/mL组细胞增殖抑制率分别为(24 h:6.7%、7.4%、24.3%,48 h:2.3%、18%、45.9%,72h:3.7%、24%、51.7%);细胞形态学观察可见明显的细胞凋亡特征;并有典型的DNA"梯形"凋亡条带出现。FGVL下调Bcl-2 mRNA表达,上调Bax mRNA表达,呈剂量和时间依赖关系。结论 FGVL可抑制急性早幼粒细胞白血病NB4细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与调节Bcl-2/Bax表达有关。

伊马替尼对NB4细胞株表达Fas、Caspase-3、bcl-2和Annexin—V的影响

目的观察伊马替尼（ST1571）体外对急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB。凋亡的作用。方法用流式细胞仪检测NB。细胞在不同浓度ST1571处理后，在不同的时间抗凋亡基因bcl-2和凋亡基因Caspase-3、Fas、Annexin—V的表达水平。结果随着伊马替尼浓度的增加（0．5～5．0umol／L），NB。细胞株表达bcl-2、Caspase-3、Annexin—V、Fas的变化分别南（10．22±0．62）降低至（5．82±0．52），由（42．21±1．02）升高到（52．35±0．83），由（25．42±1．21）升高到（37．84±0．63），由（18．21±0．81）升高到（21．41±1．02）。随着伊马替尼（5．0umol／L）处理时间的增加（24、48、72h），NB。细胞株表达bcl-2、Caspase-3、Annexin—V、Fas的变化分别由（5．81±0．52）降低至（2．51±0．43），由（52.31±0．83）升高到（69．51±1．12），由（37．81±0．93）升高到（78．62±0．83），由（23．41±0．73）升高到（26．53±1．02）。结论伊马替尼能以剂量和时间依赖的方式诱导NB4细胞发生凋亡，但Fas的表达无变化。

氨肽酶抑制剂对全反式维甲酸诱导人急性早幼粒白血病细胞株NB4细胞分化作用的影响及其机制的初步探讨

为了研究氨肽酶抑制剂乌苯美司(bestatin)对全反式维甲酸(ATRA)诱导人APL细胞株NB4细胞分化作用的影响及其可能机制,NB4细胞经bestatin和ATRA单用或联合应用处理一定时间后,用光学显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测CD11b表达,四氮唑蓝(NBT)还原实验检测分化细胞功能,RT-PCR法检测c-myc和c-EBPεmRNA表达,Westernblot检测c-Myc蛋白表达。结果显示:NB4细胞经100μg/mlbestatin和10nmol/LATRA联合处理72小时后,其分化的形态更明显;100μg/mlbestatin与不同浓度ATRA联合处理72小时,能增强NB4细胞的NBT还原能力,与单用相应浓度ATRA组相比,差异显著(P<0.01);从48-96小时,100μg/mlbestatin能增强10nmol/LATRA诱导NB4细胞的NBT还原能力,且呈时间依赖性,与相应时间点ATRA组相比,差异明显(P<0.01);与单用10nmol/LATRA组相比,ATRA(10mmol/L)和bestatin(100μg/ml)联用处理72小时,NB4细胞CD11b阳性表达率明显增加(P<0.01);与单用10nmol/LATRA组相比,联用100μg/mlbestatin处理4小时后,NB4细胞c-mycmRNA表达的降低更明显(P<0.05);50、75、100μg/mlbestatin与10nmol/LATRA联合处理8小时后,NB4细胞c-Myc蛋白表达水平明显降低,与单用ATRA组相比差异显著(P<0.05);药物联用各组NB4细胞c-Myc蛋白表达水平与NBT还原能力之间呈负相关(r=-0.940,p=0.017);与100μg/mlbestatin联用不能增强10nmol/LATRA上调c-EBPεmRNA的表达;50、75、100μg/mlbestatin单独处理对NB4细胞的分化无影响。结论:氨肽酶抑制剂bestatin能够增强ATRA对NB4细胞的诱导分化作用,这可能与bestatin协同ATRA下调c-myc的表达有关。

新型维甲酸衍生物诱导NB4细胞分化的初步研究

目的:本研究探讨10种新型维甲酸衍生物对白血病细胞株NB4的抑制增殖和诱导分化活性。方法:维甲酸类衍生物作用于NB4细胞后,通过MTT法检测细胞的增殖。瑞氏染色法在倒置相差显微镜下观察加药处理前后细胞形态学变化。NBT还原实验法分析细胞的分化指标。FCM检测分析细胞周期和细胞表面分化抗原变化。结果:维甲酸衍生物作用3 d后,抑制细胞增殖作用呈剂量依赖效应。10种维甲酸衍生物(10-5mol/L)的诱导分化活性表现在油镜下观察NB4细胞向粒系分化成熟的改变,NBT阳性细胞率增加,细胞表面分化抗原CD11b表达量增加,CD13表达则减少。通过对细胞周期的分析,发现G0/G1期细胞表达量增加,呈G1期阻滞。结论:维甲酸衍生物2a-03,4a-02和5a-02显示有较强的诱导NB4细胞分化的活性。

补骨脂素加长波紫外线诱导NB4细胞凋亡及对Fas/FasL基因表达影响的研究

目的探讨自中药补骨脂中提取的补骨脂素(psoralen,PSO)加长波紫外线(ultraviolet A,UVA)诱导人白血病细胞NB4凋亡及对Fas/FasL基因表达的影响。方法以NB4细胞为研究对象,采用流式细胞术、透射电镜、定量PCR等方法观察不同浓度的PSO,在不同时间的波长为360 nm的UVA照射下,细胞凋亡率、细胞超微结构以及细胞Fas/FasL基因、蛋白表达水平的变化。结果(1)补骨脂素加长波紫外线(PUVA)可诱导NB4细胞凋亡,当PSO浓度为10、20、40、80μg/mL时,UVA照射5 min的细胞凋亡率分别为(26.57±0.42)%、(30.67±0.11)%、(34.90±0.30)%、(24.63±0.38)%,凋亡率呈剂量-时间依赖性,两因素间有交互作用。(2)电镜下观察经PUVA处理后的NB4细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变特征。(3)PUVA可上调NB4细胞Fas基因、蛋白的表达水平,并呈剂量-时间依赖性,在基因水平两因素间有交互作用,在蛋白水平两因素无交互作用。(4)PUVA可下调NB4细胞FasL基因、蛋白的表达水平,并呈剂量-时间依赖性,且两因素间有交互作用。结论PUVA可诱导白血病细胞NB4发生凋亡,Fas/FasL系统是PUVA诱导NB4细胞发生凋亡的作用途径之一。

四嗪二甲酰胺体外诱导NB4细胞增殖、凋亡与分化作用的研究

为了观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)对白血病细胞株NB4的增殖、分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。将不同浓度的ZGDHu-1与NB4细胞在体外培养,并以全反式维甲酸作阳性药物对照,观察ZGDHu-1对NB4细胞增殖抑制、凋亡和分化的作用。用流式细胞术检测ZGDHu-1诱导NB4细胞分化和调亡过程中bcl-2和bax的表达变化,以及P38MAPK和STAT3磷酸化水平,同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT-mRNA表达的变化。结果表明:ZGDHu-1对NB4细胞增殖和活力抑制呈时间和剂量的量效关系,48和72小时的IC50分别为450和200ng/ml。NB4细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期,G0/1期细胞减少;细胞出现典型的形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加,Annexin-V/PI标记升高;Hoechst33258荧光染色后见凋亡细胞的特征性改变,这些均证实ZGDHu-1能诱导NB4细胞凋亡。NB4细胞经2-100ng/mlZGDHu-1作用3天后,细胞部分分化,NBT阳性率增加,细胞表面CD11b、CD13表达增高。ZGDHu-1作用NB4细胞后,bcl-2表达无变化,但bax表达显著增加,bax/bcl-2的比值升高,磷酸化P38MAPK表达增强,而磷酸化STAT3表达无变化,端粒酶hTERT-mRNA的表达随ZGDHu-1作用的浓度增加而显著下调。结论:ZGDHu-1能抑制NB4细胞增殖,诱导细胞分化,促进细胞凋亡,其机制可能与bax表达上调、P38MAPK活化增强和端粒酶逆转录酶受抑有关。

VPA联合As_2O_3对NB_4细胞VEGF及Survivin表达的影响

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)联合三氧化二砷(As2O3)对NB4细胞株血管内皮生长因子(VEGF)、凋亡抑制蛋白Survivin表达的影响。方法:NB4细胞分为对照组、As2O3组及As2O3联合VPA组,RT-PCR方法检测NB4细胞VEGF、Survivin mRNA的表达。结果:As2O30.1μmol/L组NB4细胞VEGF mRNA的表达明显高于对照组、Survivin mRNA的表达明显低于对照组(P<0.05);与As2O30.1μmol/L组比较,As2O30.1μmol/L+VPA 1.0mmol/L组NB4细胞VEGF mRNA、Survivin mRNA的表达均明显降低(P<0.05)。结论:VPA联合小剂量As2O3可以降低单独应用As2O3导致的NB4细胞VEGF表达的升高、并进一步降低Survivin的表达,As2O3联合VPA可降低As2O3治疗急性早幼粒细胞白血病时的不良反应。

威灵仙总皂苷体外抑制NB4细胞增殖及对CD11b、CD33表达的影响

目的:制备纯化的威灵仙总皂苷,体外作用于急性早幼粒细胞白血病NB4细胞,研究威灵仙总皂苷对NB4细胞分化的影响。方法:取对数生长期的NB4细胞,设置多个浓度梯度的威灵仙总皂苷药物组,观察用药后不同时间点NB4活细胞数,计算生长抑制率;Wright's-Giemsa染色计数法和NBT还原试验测定细胞分化率,透射电镜观察细胞形态学变化;流式细胞术检测CD11b/CD33表达情况。结果:与空白对照组比较,威灵仙总皂苷对NB4细胞有明显的生长抑制作用,且具有剂量-效应依赖关系;但具有统计学意义的诱导分化现象不明显。结论:威灵仙总皂苷可有效抑制NB4细胞增殖,但对NB4细胞无明显的诱导分化作用。