荧光标记胆固醇用于测定人单核巨噬细胞脂质外流

目的利用荧光标记的胆固醇(NBD-胆固醇)建立测定人巨噬细胞胆固醇外流的新方法,并与传统同位素标记胆固醇的测定方法进行比较。方法提取受试者外周血单核细胞分化为人巨噬细胞。体外培养人单核细胞系THP-1及鼠单核细胞系J774。以不同浓度的NBD-胆固醇孵育THP-1细胞,观察胆固醇浓度和孵育时间对细胞摄取的影响。用荧光酶标仪测定荧光信号强度以反映胆固醇摄取和外流。分别在三种细胞中测量NBD-胆固醇外流率,并在原代人巨噬细胞中观察与同位素标记胆固醇外流率的相关性。结果 NBD-胆固醇孵育细胞后迅速分布于细胞器中,但不进入细胞核。细胞对NBD-胆固醇的摄取有浓度依赖性,但达峰时间不受浓度影响。NBD-胆固醇外流率在各种巨噬细胞中呈现相似趋势,由载脂蛋白A1和高密度脂蛋白诱导的外流率在诱导外流4 h达到平台期。3H-胆固醇外流率在人巨噬细胞中与NBD-胆固醇外流率显著相关(r=0.968,P<0.001)。结论 NBD-胆固醇是一种有效的、敏感且环保的探针,可替代同位素标记的胆固醇用于巨噬细胞外流率的测定。

荧光标记结合超声裂解测定泡沫细胞胆固醇流出

利用荧光基团NBD标记的胆固醇(NBD-胆固醇)并结合超声裂解检测THP-1源性巨噬泡沫细胞胆固醇流出率。佛波酯(PMA)刺激人单核THP-1细胞分化为巨噬细胞,NBD-胆固醇作用于乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞后,测定载脂蛋白A-1(apoA-1)介导的胆固醇流出率。结果显示,与对照ac-LDL组相比,apoA-1介导的泡沫细胞胆固醇流出率增加了78.57%(P<0.01)。[3H]-标记胆固醇处理的泡沫细胞,apoA-1介导的胆固醇流出率与对照组相比,增加了80.12%(P<0.001)。NBD-标记胆固醇与超声裂解细胞相结合的方法,可作用一种替代同位素标记胆固醇的方法对泡沫细胞胆固醇流出进行检测。