Nbn基因对小鼠海马神经元发育的影响

目的观察Nbn基因神经特异性敲除(Nbn-CNS-del)小鼠海马神经元发育的形态学变化,探讨Nbn基因在小鼠海马神经元发育中的作用。方法采用成熟神经元标记物NeuN,应用HE染色、免疫组织化学技术结合体视学方法,对生后(P)7、14、21 d的Nbn-CNS-del小鼠海马神经元的发育进行系统观察和定量分析,以非基因敲除(Nbn-CNS-ctr)仔鼠为对照组。结果 P7～P21 d,与对照组相比,Nbn-CNS-del小鼠海马发育迟缓,分子层、颗粒细胞层/锥体细胞层及多形层的截面积均减小(P<0.01);颗粒细胞层/锥体细胞层NeuN阳性细胞面数密度也均明显减少(P<0.01)。结论 Nbn-CNS-del小鼠海马神经元发育迟缓,Nbn基因可能是海马神经元发育中的重要基因。

Nbn基因对生后小鼠海马颗粒细胞发育的影响

目的通过观察神经特异性Nbn基因敲除(Nbn-CNS-Del)组和对照(Nbn-CNS-Ctr)组小鼠海马发育的形态学变化,探讨DNA损伤修复基因Nbn在生后小鼠海马颗粒细胞发育过程中的作用。方法应用光镜连续切片、免疫组织化学技术和体视学方法对生后(postnatal day,P)7、14、21d的Nbn-CNS-Del组和Nbn-CNS-Ctr组小鼠海马颗粒细胞进行系统的形态学观察和定量分析。结果P7～P21d,Nbn-CNS-Ctr小鼠海马颗粒细胞层颗粒细胞均呈"C"形结构,截面面积逐渐增加,伴有颗粒细胞胞体的逐渐增大;颗粒细胞层内臂细胞的发育在P7d左右出现,P7～P14d变化最明显。Nbn-CNS-Del组P7～P21d海马颗粒细胞层的颗粒细胞的"C"形结构在绝大多数组织标本上都可以观察到,但分布较松散;Nbn-CNS-Del组小鼠海马颗粒细胞层发育比Nbn-CNS-Ctr组明显滞后,各时间段的截面面积均减小(P<0.01),NEUN染色阳性的海马颗粒细胞面数密度值在各时间段均有差异。结论DNA损伤修复基因Nbn是小鼠海马颗粒细胞发育的一个重要基因,影响小鼠海马颗粒细胞层的发育与成熟。

Nbn基因影响小鼠海马齿状回发育的体视学研究

目的观察Nbn基因神经特异性敲除小鼠海马齿状回发育的形态学变化，探讨Nbn基因在小鼠海马齿状回发育中的作用。方法采用成熟神经元标记物NeuN，应用免疫组织化学技术结合体视学方法对生后（P）7、14、21天的神经特畀性敲除小鼠海马齿状回的发育进行系统观察，并对齿状回各层截面积等参数进行测量，以非基因敲除小鼠为对照组。结果与对照组相比，P7—21天基因敲除小鼠海马齿状回发育明显延缓，分子层、颗粒细胞层及多形层的截面积均减小（P〈0．05）；颗粒细胞层阳性细胞面数密度也均明显减少（P〈0．05）；多形层阳性细胞面数密度P21天仍较高（P〈0．05）。结论Nbn基因神经特异性敲除小鼠海马齿状回发育明显延缓，提示Nbn基因可能是海马齿状回发育中的重要基因。

外显子组测序研究唾液腺透明细胞肉瘤患者NBN基因体细胞错义突变

目的筛选唾液腺透明细胞肉瘤(clear cell sarcoma,CCS)患者的基因突变,为CCS发病机制研究奠定基础。方法应用外显子组测序检测1例原发CCS标本的基因突变,用Sanger测序对该患者的外周血和癌旁组织进行验证。结果外显子组测序以及Sanger测序验证结果显示存在体细胞错义突变c.1061C>T(p.P354L),其突变位点为NBN基因的第9个外显子。结论本例标本无EWSR1-ATF1融合但存在NBN上c.1061C>T(p.P354L)体细胞错义突变,拓宽了CCS的基因型频谱并在分子水平临床诊断CCS上提供了新的方向。

NBN基因3’端非编码区rs10464867遗传变异与胃癌易感性的生物信息学功能分析

目的 探讨NBN基因3’端非编码区潜在的功能性单核苷酸多态性位点rs10464867遗传变异在胃癌易感性中的生物信息学功能。方法利用生物信息学工具进行NBN基因生物信息学功能的预测和分析,并基于癌症基因组图谱计划(TCGA)数据库RNA-Seq的表达数据分析胃腺癌组织及癌旁组织中NBN mRNA的表达,初步推测NBN基因在胃癌发生中潜在存在的生物学功能。结果在GTEx数据库中对与rs10464867高连锁不平衡(LD)的单核苷酸多态性(SNP)和NBN基因进行表达数量性状位点(eQTL)分析,结果发现rs2284135与NBN基因存在eQTL,rs2284135的A等位基因可以显著增加NBN基因的表达(P<0.05)。根据TCGA数据库RNA-Seq表达数据分析也进一步显示NBNmRNA在胃腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.01)。结论 NBN基因rs10464867与胃癌风险相关,可能通过eQTL位点rs2284135来调控NBN基因的表达,在胃癌发生发展中发挥生物学功能,从而影响胃癌患病风险,生物信息学功能预测也有助于进一步认识NBN基因在肿瘤发生发展中的作用。