siRNA对肺癌细胞株NCI-H460 bcl-2基因表达的影响

目的:研究siRNA (smallinterferenceRNA)对大细胞肺癌细胞株NCI -H4 6 0bcl- 2基因表达的影响。方法:利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl - 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入NCI-H4 6 0细胞株,设置转染bcl- 2反义药物G3139和空白两对照组。用MTT法检测siRNA对细胞生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期的改变和Bcl- 2蛋白表达;RT -PCR检测bcl- 2mRNA水平。结果:siRNA组与对照组细胞存活率均有显著性差异(P <0 0 5 ) ;siRNA组bcl- 2的mRNA明显低于对照组和反义组(P <0 0 5 ) ;siRNA组Bcl- 2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组以及反义组细胞阻滞于S期。结论:体外转录合成的siRNA可抑制NCI-H4 6 0细胞bcl- 2基因的表达,抑制率可达5 0 %以上。

低剂量辐射对荷人小细胞肺癌(NCI-H446)裸小鼠移植瘤细胞凋亡的影响

目的探讨低剂量辐射对荷人小细胞肺癌(NCIH446)裸小鼠移植瘤细胞凋亡的影响。方法对荷人小细胞肺癌裸小鼠进行全身深部X射线照射,采用TUNEL(末端脱氧核甘酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记)检测荷人小细胞肺癌裸小鼠移植瘤组织细胞凋亡的情况。结果D1组(75mGy)照射后,细胞凋亡指数(AI)呈增加趋势,但与假照组(0mGy)比差异不显著(P>0.05)。D2组(4Gy)、D1+D2组细胞凋亡指数均明显增加,与假照组(0mGy)比差异显著(P<0.010。而D1+D2组与D2组比较,D1+D2组细胞凋亡指数增加更为明显,有统计学差异(P<0.05)。结论75mGy照射对小细胞肺癌可能有一定的促细胞凋亡作用;大剂量照射及低剂量联合大剂量照射对小细胞肺癌均有促细胞凋亡作用,低剂量辐射与大剂量辐射有协同促小细胞肺癌细胞凋亡的作用。

噬菌体肽库与NCI-H1299细胞筛选肺癌特异性结合多肽ZS-9的初步研究

目的:利用噬菌体肽库与肺癌NCI-H1299细胞筛选出肺癌特异性结合的多肽,研究其亲和力和特异性。方法:以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,与噬菌体随机十二肽库进行三轮筛选,挑取单克隆扩增并测序,进行生物信息学分析、比对;利用ELISA、细胞免疫化学、组织免疫化学方法测定多肽的亲和力和特异性。结果:经过三轮减性筛选发现,随机挑选的9个单克隆中,其中1个对NCI-H1299和A549均具有较高亲和力,将其命名为ZS-9,测序结果为CAT AAT AAG CAT CTT CCG TCT ACG CAG CCT CTT GCG,根据测序结果推导出ZS-9的氨基酸序列HNKHLPSTQPLA,生物信息学分析表明ZS-9的氨基酸序列与美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBank DNA序列数据库和Swiss-Prot蛋白数据库中的已知基因和蛋白无同源性,表明我们筛选到一种新的肺癌相关抗原的配体。结论:利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞NCI-H1299和A549具有较高亲和力的多肽ZS-9,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。

甲基汞对人类小细胞肺癌NCI-H446细胞周期的影响

目的研究氯化甲基汞(MMC)对小细胞肺癌NCI-H446细胞周期的影响。方法采用流式细胞仪检测了MMC对NCI-H446细胞细胞周期的作用,并与目前最常用的化疗药顺铂(DDP)和同样具有剧毒的三氧化二砷(As2O3)做比较。结果MMC、DDP能使NCI-H446细胞表现为G0/G1期细胞数剂量依赖性明显增加,S期细胞数呈剂量依赖性明显减少;As2O3组细胞表现为明显的G2/M期剂量依赖性增加,S期细胞数剂量依赖性减少。结论MMC、As2O3、DDP均能诱导小细胞肺癌细胞株的细胞周期阻滞,但阻滞作用发生在细胞周期的不同时相。

胰岛素样生长因子Ⅰ受体反义寡核苷酸对肺癌NCI-H460细胞中该受体蛋白表达的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-ⅠR)反义寡核苷酸(ASODN)对肺癌NCI-H460细胞中IGF-ⅠR蛋白表达的影响。方法:设计并合成3条IGF-ⅠR反义寡核苷酸序列,转染NCI-H460细胞,另设无关的IGF-ⅠR反义寡核苷酸序列和空白培养液作对照,细胞培养48h后,蛋白酶消化收集细胞,滴于预处理的载玻片上。采用免疫细胞化学SP法检测各组NCI-H460细胞中IGF-ⅠR的蛋白表达。结果:3条IGF-ⅠR ASODN转染的NCI-H460细胞中IGF-ⅠR蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),但均低于无关寡核苷酸转染组及空白培养液对照组(P<0.05)。结论:IGF-ⅠR ASODN可抑制肺癌NCI-H460细胞中IGF-ⅠR蛋白的表达。

吉非替尼对肺癌细胞株H358放疗敏感性的影响及其机制

背景与目的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是决定放疗效应的重要因素,它的过表达或激活常与包括非小细胞肺癌在内的肿瘤放疗抵抗相关,因而阻断EGFR的信号通路是增强放疗敏感性很有潜力的治疗策略。本研究旨在观察小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼与放疗联合是否有提高非小细胞肺癌细胞株H358放疗敏感性的作用以及探索其分子机制。方法将非小细胞肺癌细胞株H358分为X线组和X线+吉非替尼组,前者采用单纯X线照射,后者经1mol/L吉非替尼作用24h后再行X线照射。克隆形成实验比较两组细胞放射敏感性,免疫荧光激光共聚焦显微镜观察X线照射后各时间点细胞核中磷酸化γ-H2AX及EGFR焦点在细胞中的定位情况,Westernblot法检测放疗后核蛋白中EGFR的表达。结果克隆形成实验中X线+吉非替尼组各个剂量点的细胞存活率均少于X线组,可见X线+吉非替尼组对放疗更敏感。免疫荧光激光共聚焦显示,X线+吉非替尼组比X线组各时段细胞核内γ-H2AX焦点数增加,持续的时间也更长。EGFR免疫荧光及Westernblot结果显示,X线组EGFR在放疗后1h内入核,而X线+吉非替尼组EGFR不在核内表达,仍位于细胞浆内。对Westernblot结果用SPSS13.0进行统计学分析,其差异有统计学意义(P=0.042)。结论吉非替尼可能是通过抑制EGFR放疗后入核进行损伤后DNA双链断裂修复,而起到对NSCLC细胞株H358放疗增敏的作用。

抑癌汤对人肺癌NCI-H446细胞增殖抑制作用的体外实验研究

目的通过自拟方抑制癌汤对人肺癌NCI-H446细胞株进行干扰研究,探讨其增殖抑制作用。希望从苗药中药组方中找到抑制肺癌细胞增殖的新方法。方法将NCI-H446细胞进行培养,绘制NCI-H446细胞生长曲线,取处在对数生长期的NCI-H446细胞进行实验。首先确定抑癌汤的作用浓度范围。取细胞的存活率为50%时的药物浓度范围作为抑癌汤的给药浓度参考。再将抑癌汤在该浓度范围内分为5个浓度组;实验分抑癌汤组、西药组、抑癌汤加西药组、空白组四组、每一组各4个复孔,进行对照研究。结果抑癌汤对NCI-H446细胞毒实验得到细胞存活率50%时的药物浓度范围在1～100μg/ml之间。抑癌汤加西药组优于抑癌汤组;抑癌汤加西药组优于西药组;西药组优于抑癌汤组;抑癌汤组优于空白组;抑癌汤加西药组优于空白组;西药组优于空白组。结论抑癌汤在体外对人肺小细胞肺癌NCI-H446细胞具有抑制作用,具有潜在药用价值,值得进一步深入研究。

槲寄生碱影响Ras蛋白表达抑制肺癌H358细胞增殖

目的研究槲寄生碱对非小细胞肺癌H358细胞的抑制作用及其相关作用机制。方法采用MTT法检测槲寄生碱对H358细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测槲寄生碱对H358细胞凋亡的影响;采用Western blot方法检测槲寄生碱对K-Ras、Bcl-2和Bax等蛋白表达的影响;测定caspase 3、caspase 8和caspase 9的活性;检测槲寄生碱在体内的抑瘤活性。结果槲寄生碱以质量浓度依赖的方式抑制H358细胞增殖,并能有效地诱导H358细胞凋亡;caspase 3、caspase 8和caspase 9受到了不同程度的激活;同时,槲寄生碱抑制K-Ras和Bcl-2的表达,而对Bax没有明显抑制作用;槲寄生碱在体内也表现出明显的抑瘤活性。结论槲寄生碱在体外能够抑制H358细胞增殖并诱导H358细胞凋亡,为K-Ras突变型非小细胞肺癌等肿瘤疾病的治疗奠定了实验基础。

花青素对NCI-H460细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用

目的研究花青素对大细胞型肺癌NCI-H460细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法体外培养NCI-H460细胞与25—200μg/ml的花青素共孵育，采用噻唑兰（MTT）法检测细胞增殖抑制率，Hoechst33258荧光染色观察细胞形态，DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况，流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期的分布。结果花青素在25—200μg／ml浓度范围内抑制NCI-H460细胞的增殖，有剂量和时间依赖性，花青素对NCI-H460细胞的IC50值为90．8μg／ml，50—200μg／ml的花青素处理NCI-H460细胞72h，Hoechest33258荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等细胞凋亡特征；DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯形条带；流式细胞图上可看到“亚G1期”凋亡峰，25、50、100、200μg/ml花青素对NCI-H460细胞凋亡率为1．3％、2．0％、11．7％和27．8％，G0／G1细胞数目显著增多，S期细胞显著减少。结论花青素能抑制NCI-H460细胞的增殖，诱导细胞的凋亡，呈剂量依赖性，并使细胞阻滞于G0／G1期。

人参皂苷Rg3协同TRAIL促进肺癌H358细胞凋亡的机制

目的:探讨人参皂苷Rg3联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肺癌H358细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:肺癌H358细胞培养完成后,0、50、100、200 ng/ml TRAIL或0、25、50、100μmol/L Rg3作用H358细胞48 h,按照实验方法分为对照组、50μmol/L Rg3组、100 ng/ml TRAIL组及50μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL组。MTT法检测Rg3和/或TRAIL对肺癌H358细胞增殖的影响,DAPI染色荧光倒置显微镜观察Rg3和/或TRAIL对肺癌H358细胞形态学变化的影响,流式细胞术检测Rg3和/或TRAIL对肺癌H358细胞凋亡的影响,WB实验检测Rg3和/或TRAIL对各组肺癌H358细胞内死亡受体(DR5)及caspase-8表达的影响。结果:50μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL组与其他各组比较,肺癌H358细胞的增殖抑制最明显(P<0.05);DAPI染色后显示,50μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL组多数胞核皱缩,染色质凝集,荧光强度增加,并出现饱和碎裂等晚期凋亡形态学改变;50μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL组与其他各组比较,细胞凋亡率升高最明显,细胞内DR5及caspase-8表达增强最明显(均P<0.05)。结论:人参皂苷Rg3联合TRAIL能够协同抑制肺癌H358细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其作用机制可能与人参皂苷Rg3协同促进DR5及caspase-8的表达上调有关。

可替宁对穿孔素/粒酶B诱导的NCI-H460肺癌细胞凋亡的抑制作用

目的探讨可替宁对穿孔素/粒酶B(perforin/granzyme B)诱导的NCI-H460非小细胞肺癌细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法以人肺癌细胞株NCI-H460为研究对象,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色检测细胞生长增殖活性,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学变化,异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色后流式细胞仪定量检测细胞凋亡率,RT-PCR及Western blot法检测凋亡抑制蛋白XIAP及Survivin的表达量。结果 (1)不同浓度可替宁单独作用NCI-H460细胞时未见明显诱导凋亡现象,可显著抑制细胞生长,其抑制率与作用时间和剂量呈正相关。(2)0.25μg/ml浓度穿孔素作用NCI-H460细胞(1×106个)时,PI染核率可达到90%以上。而当加入1.5μl粒酶B(1μg/ml)孵育6h时,穿孔素/粒酶B组细胞可呈现90%以上的凋亡现象。(3)166ng/ml浓度可替宁作用穿孔素/粒酶B预处理的细胞6h时可见明显凋亡抑制现象,当检测其凋亡抑制蛋白XIAP、survivin表达量时,发现穿孔素/粒酶B组表达量明显降低,可替宁组表达量较高,而当可替宁联合穿孔素/粒酶B时表达量最高。结论可替宁可明显抑制穿孔素/粒酶B诱导的NCI-H460肺癌细胞凋亡现象,这种作用可能与凋亡抑制蛋白XIAP、survivin的表达上调有关。

一种海洋来源ETP类化合物GQQ-ZML-2抑制H358细胞增殖作用与机制的研究

目的探究化合物GQQ-ZML-2对H358细胞(KRAS^(G12C))的增殖抑制作用并初步研究其作用机制。方法采用磺酰罗丹明B法(SRB法)测定GQQ-ZML-2对不同KRAS突变的肿瘤细胞的细胞毒;采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;利用荧光探针DCFH-DA检测细胞内总活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;蛋白质印迹法(western blotting,WB)检测相关信号蛋白的表达水平。结果GQQ-ZML-2选择性抑制H358细胞增殖,以浓度依赖的方式抑制克隆形成并将细胞周期阻滞于G2/M期而诱导细胞凋亡。机制研究表明GQQ-ZML-2引起KRAS^(G12C)依赖的ROS产生,抑制AKT/mTOR和JAK2/STAT3信号通路。结论GQQ-ZML-2是一种新型的具有选择性抑制H358细胞增殖作用的海洋来源化合物,其作用机制可能与诱导KRAS^(G12C)依赖的ROS增加相关。为开发新型的拮抗具有KRAS^(G12C)突变肿瘤的药物提供了实验依据。

瑞香狼毒水提取物对人肺鳞状细胞癌Survivin表达的影响

目的研究瑞香狼毒水提取物对人肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞株的抑制作用及对Survivin表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物处理NCI-H520细胞,分别用MTT法检测肺癌细胞抑制率、半定量RT-PCR检测Sur-vivin mRNA水平以及用Western-blotting检测蛋白水平的表达。结果瑞香狼毒水提取物可显著抑制NCI-H520细胞的生长,随着药物浓度的升高抑制作用逐渐增强。瑞香狼毒作用4 h后细胞内Survivin蛋白的表达水平降低,而SurvivinmRNA的表达变化不明显。结论①瑞香狼毒水提取物可抑制NCI-H520细胞的生长,并具有浓度和时间依赖性;②瑞香狼毒水提取物可降低NCI-H520细胞的Survivin蛋白表达水平,而对mRNA水平无明显影响。

BCSC-1基因异位表达对人小细胞肺癌细胞增殖的抑制效应

背景与目的:人乳腺癌候选抑制蛋白1(breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)基因已被证实是一种新型抑癌基因,在多种肿瘤细胞均存在表达缺失的现象。该研究通过将BCSC-1基因转染至人小细胞肺癌细胞株NCI-H446,探讨BCSC-1基因异位表达对NCI-H446细胞增殖的抑制效应。方法:用PCR扩增BCSC-1 cDNA,构建真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1。通过脂质体把pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染入野生型NCI-H446细胞。以转染空质粒pcDNA3.1/v5-HisB的NCI-H446细胞为对照组,野生型NCI-H446细胞为空白对照组。采用流式细胞仪检测细胞周期;MTT法检测细胞增殖;免疫组化确认BCSC-1基因和CD44分子在NCI-H446细胞中的表达。结果:成功构建了真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1,制备了BCSC-1基因异位高表达的NCI-H446稳定细胞株。细胞周期分析显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞大部分阻滞在G0/G1期,明显高于对照组和空白组(P<0.01)。MTT法检测显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞与对照组、空白组相比,生长速度明显减慢(P<0.05)。免疫组化显示异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞CD44表达增高。结论:BCSC-1基因的异位表达对NCI-H446细胞的恶性增殖行为有明显的抑制作用,这种抑制作用可能与细胞周期阻滞和黏附分子CD44表达增高有关。

突变型K-ras siRNA抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移并诱导细胞凋亡

目的：构建靶向K-ras的siRNA，研究K—rassiRNA对K-ras基因突变型肺癌细胞A549及K-ras野生型小细胞肺癌细胞NCI—H446生长和迁移的抑制作用。方法：设计并人工合成4条K．rassiRNA（针对野生型K-ras基因的K—rassiRNA1-K—rassiRNA3；针对突变型K-ras基因的K—rassiRNA4），并分别转入A549和NCI—H446细胞。RT—PCR和Westernblotting检测不同K—rassiRNA对K—rasmRNA和蛋白表达的影响，MTr法检测不同K—rassiRNA对A549和NCI—H446细胞增殖的抑制作用。Transwell实验和Hoechst33258染色检测K—rassiRNA对细胞迁移和凋亡的影响。结果：靶向突变型K-ras的K．rassiR—NA4能特异性抑制A549细胞中K-ras的表达，但对N-ras和H-ras的表达没有影响。K—rassiRNA4抑制A549细胞的增殖，但不影响含野生型K-ras基因的NCI—H446细胞的增殖。K—rassiRNA4还能诱导A549细胞凋亡、抑制A549细胞迁移。结论：针对突变型K-ras基因的siRNA可特异性抑制K-ras突变型肺癌细胞的增殖和迁移，并诱导该细胞凋亡，K—rassiRNA可望用于K-ras突变型肿瘤特别是肺癌的个体化治疗。

高/低侵袭转移性肺癌干细胞模型的建立

目的以人肺癌NCI-H446细胞为研究对象,建立一种高/低侵袭性肺癌干细胞(high/low invasion lung tumor stemcells,H/L-ILTSCs)模型,并鉴定其生物学特性。方法首先,利用transwell小室迁移实验分离高/低迁移性NCI-H446细胞。取高/低迁移性NCI-H446细胞采用transwell小室侵袭实验分离高/低侵袭转移性NCI-H446细胞。然后,以CD133、CD44为肺癌干细胞(lung tumor stem cells,LTSCs)表面标志,采用磁珠分选法分离NCI-H446细胞H/L-ILTSCs并进行纯度鉴定。最后,采用MTT法、transwell侵袭及免疫缺陷动物成瘤等实验,检测H-ILTSCs、L-ILTSCs及NCI-H446细胞的生长增殖,体外侵袭转移及体内成瘤能力。结果 H-ILTSCs生长增殖,体外侵袭转移及体内成瘤能力均高于L-ILTSCs及NCI-H446细胞,而L-ILTSCs与NCI-H446无显著差别。结论人肺癌细胞NCI-H446中可以分离和富集H/L-ILTSCs,且二者存在着干性差别。

ATM蛋白在不同肺癌细胞株中表达差异与放射敏感性关系的研究

目的 通过对ATM蛋白在不同肺癌细胞株中表达差异与放射敏感性关系的研究，为下一步研究打下基础。方法利用细胞集落形成实验研究肺癌细胞株A549、NCI—H446的放射敏感性差异，并结合免疫荧光实验和激光共聚焦扫描（LSCM）技术来探讨两细胞株中ATM蛋白的表达差异与放射敏感性之间的关系。结果集落形成实验中，在接受2、4、6、8Gy剂量照射时，A549和NCI—H446两肺癌细胞株的存活分数分别为81．0％、32．4％、12．0％、3．5％和52．4％、17．0％、3．2％、0．7％。ATM蛋白定位于细胞浆和胞核；利用LSCM分析两细胞株中ATM蛋白的表达差异，A549细胞ATM蛋白荧光强度（71．188＋13．379）较NCI-H446细胞（47．478±19．032）明显增强（P〈0．0001），有统计学意义。结论两肺癌细胞株A549和NCI-H446具有放射敏感性差异，ATM蛋白在两细胞株中的表达亦有差异显著性，表明其表达量可能与放射敏感性呈负相关。

四种显像剂在NCI—H358肺癌裸鼠模型中显像效果和生物分布的比较

目的比较^18F-脱氧葡萄糖（^18F-FDG）、^99Tc^m-甲氧荩异丁基异腈（^99Tc^m-MIBI）^99Tc^m-氮-二（N-2基N-2氧基二硫代氧基甲酸盐）[^99Tc^m-N（NOET））]和^99Tc^m-RGD-4CK娃像剂任NCI—H358肺癌裸鼠中的摄取，评价4种硅像剂对低代谢肺胆瘤的诊断价值。方法建立人非小细胞肺癌NCIH358细胞裸鼠移植瘤模型20只，随机分为4组，分别经尾静脉注射^18F-FDG、^99Tc^m-MIBI、^99Tc^m-N（NOErr），和^99Tc^m-RGD-4CK移像剂，进行显像和生物分布研究。结果SPECT全身平面显像显示，^18F-FDG组倚瘤小鼠胸部放射性核素明妙浓聚，与肿瘤组织部分重叠，以敛肿瘤轮廓显示不清晰；^99Tc^m-MIBI组荷瘤小鼠右前肢肿瘤处隐约显影，轮廓不清；^99Tc^m-N（NOET）2组和^99Tc^m-RGD-4CK组荷瘤小鼠右前肢肿瘤部位硅影均清晰。^18F-FDG组、^99Tc^m-MIB组。^99Tc^m-N（NOET）：组和^99Tc^m-RGD-4CK组肺癌裸鼠模型显像的肿瘤勺肌肉放射性比值（T／NT）分别为1．85±0．07、0．99±0．16、2．78±2．26和3．40±0．27，生物分布的T／NT值分别为2．32±0．14、0．44±0．08、2．59±0．53和3．43±0．36，其^99Tc^m-RGD-4CK组的rf／NT值明显高于其他组（均P〈0．01）。结论^99Tc^m-RGD-4CK对人非小细胞肺癌NCI—H358细胞移植瘤的湿像效果好于^18F—FDG，在诊断低代谢的非小细胞肺癌时，^99Tc^m-RGD--4CK妊像町能比^18F—FDG显像更具优势。

基于味觉细胞传感器的人工甜味剂识别方法的研究

根据目前的研究结果,某些人工甜味剂对人体是无毒无害的,如三氯蔗糖;然而某些甜味剂对人体健康是有不同程度的副作用,如阿斯巴甜、糖精。所以对食品中不同种类的人工甜味剂进行识别是非常有必要的。

白花蛇舌草乙醇提取物联合吉非替尼对TGF-β_1诱导的肺腺癌细胞H358上皮间质化的干预作用

目的研究白花蛇舌草乙醇提取物(ethanol extract of Hedyotis diffusa,EEHD)联合吉非替尼对TGF-β_1诱导的肺腺癌细胞H358上皮间质化的干预作用。方法以上皮表型人肺腺癌细胞H358为研究对象,TGF-β_1诱导构建细胞上皮间质化模型,按EEHD、吉非替尼及两药3种不同顺序联合作用分为6组:A组,EEHD作用48 h;B组,吉非替尼作用48 h;A24B24组,先EEHD作用24 h,后吉非替尼作用24 h;B24A24组,先吉非替尼作用24 h,后EEHD作用24 h;AB48组,同时加入吉非替尼和EEHD作用48 h;对照组。CCK-8法测定各组细胞坏死率,Western-blot检测各组细胞中E-cadherin、Vimentin、EGFR蛋白表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,比较组间差异。结果各组药物作用均能不同程度抑制上皮间质化肺腺癌细胞H358增殖,E-cadherin表达呈上升趋势,Vimentin表达下降。其中EEHD联合吉非替尼组的细胞生长抑制率和细胞凋亡率显著高于吉非替尼单用组,E-cadherin蛋白表达率则显著高于吉非替尼单用组,而EGFR、Vimentin蛋白表达率显著低于吉非替尼单用组(P<0.05),EEHD与吉非替尼先后顺序作用组间差异无统计学意义。结论EEHD与吉非替尼对上皮间质化的H358细胞具有联合抑制作用,白花蛇舌草可部分逆转H358细胞上皮间质化状态。