Lupalbigenin通过EGFR信号通路抑制非小细胞肺癌NCI-H1975细胞增殖

目的:探究Lupalbigenin是否通过表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路诱导非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)系中NCI-H1975细胞增殖。方法:主要采用了MTT法检测细胞毒性;用细胞形态学观察、细胞迁移实验、细胞克隆形成实验观察及检测细胞增殖能力;通过蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测Lupalbigenin对EGFR和其下游MAPK信号通路蛋白ERK及其磷酸化水平及其凋亡相关Cleaved PARP、P21、CDK4、CDK6、CyclinD1和CyclinA2以及抗凋亡蛋Bcl-2的影响。结果:结果显示Lupalbigenin在NCI-H1975细胞系上IC_(50)值为3.246μmol/L,并且呈浓度依赖性抑制细胞增殖;细胞形态学观察结果显示与空白组比较,10μmol/L Lupalbigenin实验组处理细胞24 h导致细胞核固缩、细胞质凝聚及细胞凋亡显著增加;迁移实验和集落形成实验结果显示,5μmol/L LG能够显著抑制细胞迁移和菌落形成能力;Western Blot检测结果表明,Lupalbigenin在较短时间内对EGFR/ERK蛋白磷酸化表达有显著的抑制作用。同时,Lupalbigenin处理后,Cleaved PARP和P21蛋白的表达水平显著上调,CDK4、CDK6、CyclinD1和CyclinA2以及Bcl-2蛋白的表达水平显著下降。结论:综上,Lupalbigenin可以调控EGFR及其下游相关蛋白的表达,从而抑制NCI-H1975细胞的增殖。

抑制自噬起始阶段增强喜树碱诱导的NCI-H1975人肺腺癌细胞凋亡

目的研究自噬抑制剂氯喹(CQ)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)对喜树碱(CPT)诱导非小细胞肺腺癌NCI-H1975细胞凋亡的影响。方法通过CPT处理肺腺癌NCI-H1975细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性,碘化丙啶(PI)染色观察细胞形态学的变化,流式细胞术检测CPT作用于NCI-H1975细胞后细胞的凋亡情况,Western blot法检测自噬及凋亡相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)和LC3Ⅱ、P62、胱天蛋白酶3(caspase-3)和多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白水平。结果 CPT处理后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比例增加;caspase-3和PARP发生明显降解;且这种降解作用能被3-MA增强而被CQ抑制。而且发现CPT处理后,引起细胞内TGF-β1降低。结论抑制NCI-H1975细胞自噬起始阶段后,增强CPT诱导细胞凋亡的敏感性。

EGCG和顺铂合用抑制人肺腺癌NCI-H1975细胞和人肺鳞状上皮癌NCI-H520细胞增殖及对EGFR表达的影响

目的研究EGCG和顺铂合用对人肺腺癌NCI-H1975和鳞癌NCI-H520细胞增殖及EGFR的影响。方法 CCK-8法检测细胞增殖;Hoechst33258染色检测细胞凋亡;Western blot检测Phospho-EGFR和EGFR表达;q-PCR检测细胞EGFR mRNA。结果 EGCG和顺铂合用明显抑制细胞增殖,呈时间和剂量依赖性。EGCG增加DNA-顺铂加合物;促进细胞核固缩;同时下调Phospho-EGFR和EGFR mRNA表达。结论 EGCG和顺铂合用抑制NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖,促进凋亡,该作用可能通过增加细胞DNA-顺铂加合物和破坏DNA实现,且与抑制EGFR mRNA和Phospho-EGFR有关。

EGCG对人肺癌细胞NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系增殖凋亡、周期的作用机制。方法对数生长期NSCLC细胞系NCI-H1975和NCI-H520,分为空白对照组(0 mol/L EGCG)和不同剂量(20、40、80、160、320mol/L)EGCG组,分别处理作用24、48、72h,CCK-8法检测细胞凋亡率;细胞流式细胞术检测细胞凋亡和周期;Western blot检测细胞周期、凋亡相关蛋白表达及NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路变化;细胞分为:Control siRNA组、EGFR siRNA组和EGFR siRNA+EGCG组,采用siRNA转染技术,分析下调EGFR对NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路的影响。结果分组的相应浓度EGCG组NCI-H1975和NCI-H520细胞的增殖显著降低(P<0.05),同时G1/G0细胞比例增高,G1/S期细胞比例下降(P<0.05),CyclinD1、CyclinE、CDK6蛋白表达降低(P<0.05),但对CDK4无明显影响(P>0.05),同时细胞凋亡增多,Cleaved caspase 3和Cleaved caspase 9蛋白表达上调(P<0.05)。P-P65、Bcl2、P-EGFR、P-AKT蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,但对P-ERK没有明显的影响。而EGCG+EGFR siRNA组,相比于EGFR siRNA组,明显降低各蛋白的表达,升高Bax蛋白(P<0.05)。结论 EGCG下调NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路抑制NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖、促进凋亡,并阻断细胞周期。

Polo样激酶1抑制剂在奥希替尼耐药的非小细胞肺癌细胞中的作用

目的:研究Polo样激酶1(PLK1)抑制剂在奥希替尼耐药的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中的作用及其合用奥希替尼的抗肿瘤效果。方法:利用药物浓度递增法构建对奥希替尼耐药的NCI-H1975细胞模型;在耐药细胞上合用肿瘤经典通路抑制剂库化合物与奥希替尼,筛选与奥希替尼存在协同作用的化合物;利用基因集富集分析考察奥希替尼耐药通路;利用磺酰罗丹明B染色法考察PLK1抑制剂对奥希替尼耐药细胞的抑制作用及其合用奥希替尼的抗肿瘤作用。结果:成功建立奥希替尼耐药细胞模型(耐药指数=43.45)。PLK1抑制剂GSK 461364和BI 2536与奥希替尼存在协同作用,与敏感细胞比较,奥希替尼耐药细胞中PLK1调控通路和细胞周期通路显著激活,且在接受奥希替尼治疗的表皮生长因子受体突变NSCLC患者队列中,PLK1信使RNA水平与患者的无进展生存期呈负相关(R=-0.62,P<0.05),证实NSCLC细胞中PLK1过度激活可能导致细胞对奥希替尼耐药。进一步体外实验发现,PLK1抑制剂伏拉塞替和GSK 461364对奥希替尼耐药细胞的半抑制浓度小于敏感细胞,相较于单用奥希替尼,PLK1抑制剂与奥希替尼合用可显著增强对耐药细胞的增殖抑制作用。结论:PLK1抑制剂与奥希替尼合用对奥希替尼耐药的NSCLC细胞的抑制作用更强,有可能用于奥希替尼耐药患者的干预和治疗。

NGX6基因联合顺铂治疗肺癌的体内外研究

目的探讨NGX6基因联合顺铂对肺癌A549细胞和NCI-H1975细胞的体外抑制作用及其体内抗肿瘤效果。方法以脂质体鱼精蛋白为载体,构建载NGX6基因的阳离子脂质体-DNA复合物。将A549细胞和NCI-H1975细胞均分为NGX6组(载NGX6基因的LPD,NGX6浓度为30μg/m L)、顺铂组、NGX6+顺铂组,以PBS为阴性对照。采用MTT检测各组对A549细胞和NCI-H1975细胞的生长抑制作用;克隆形成实验计算克隆形成率和抑制率;构建肺癌移植肿瘤模型,将裸鼠分为同细胞处理相同的4组,每组10只,统计各组裸鼠肿瘤体积和生存期,观察各组裸鼠肿瘤组织细胞凋亡情况。结果对肿瘤细胞的增殖抑制能力显著强于NGX6组和顺铂(P<0.01)。克隆形成实验结果表明,NGX6+顺铂组的肿瘤细胞克隆数小于NGX6组和顺铂组(P<0.01)。体内抗肿瘤实验结果表明,NGX6+顺铂组对荷瘤裸鼠的肿瘤生长抑制率显著高于NGX6组和顺铂组(P<0.01)。NGX6+顺铂组,NGX6组,顺铂组和生理盐水组荷瘤裸鼠的中位生存期分别为43、31、29、15d。结论 NGX6基因联合顺铂能够有效抑制肺癌细胞的增殖和肿瘤的生长。表明基因干预联合细胞毒性药物化疗能为肿瘤的治疗提供了一种新的治疗手段。

姜黄素对人肺腺癌NCI—H1975细胞放射的增敏作用

目的研究姜黄素对人肺腺癌NCI—H1975细胞放射增敏的作用。方法选取人肺腺癌NCI-H1975细胞作为研究对象，将细胞分为对照组、单独姜黄素处理组、单独放射处理组、姜黄素联合放射处理组。采用CCK-8实验检测细胞增殖的变化；流式细胞仪检测细胞周期的改变；细胞核Hochest33258染色技术和AnnexinV—FITC／PI双染技术检测细胞凋亡的情况。结果CCK-8实验结果发现姜黄素与X射线联合处理能显著抑制肺腺癌细胞增殖，且具有浓度依赖性。流式细胞仪检测发现姜黄素与X射线联合作用可以将细胞大部分阻滞在S期。细胞核染色及AnnexinV—FITC／PI双染技术结果发现姜黄素联合x射线可以增强姜黄素诱导的细胞凋亡作用。结论姜黄素联合X射线对人肺腺癌NCI-H1975细胞有很好的增殖抑制效果，其机制可能与细胞的S期阻滞有关，并且可以诱导细胞凋亡。