胃癌组织LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达与Wnt/β-catenin信号通路和预后的关系

目的研究胃癌组织长链非编码核糖核酸(LncRNA)NCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达水平与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路和预后的关系。方法选取2019年2~10月行胃癌根治术的113例胃癌患者,术中取其胃癌组织与癌旁组织。采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌组织与癌旁组织LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量及Wnt/β-catenin信号通路相关指标[Wnt3a、Wnt5a、β-catenin、细胞周期素D1(cyclin D1)、原癌基因(c-myc)]信使RNA(mRNA)表达量。采用Pearson相关性法分析LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量与Wnt/β-catenin信号通路相关指标mRNA表达量的相关性。绘制Kaplan-Meier生存曲线分析胃癌患者术后3年生存情况。结果胃癌组织LncRNA NCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌组织Wnt/β-catenin信号通路中Wnt3a mRNA、Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA、cyclin D1 mRNA、c-myc mRNA表达量均高于癌旁组织(P<0.05)。Pearson法分析显示,Wnt/β-catenin信号通路中Wnt3a mRNA、Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA、cyclin D1 mRNA、c-myc mRNA表达量与LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量呈正相关(P<0.05)。LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1表达量与胃癌患者的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05)。患者随访3年,随访中位时间为27.90个月。Kaplan-Meier生存曲线显示,LncRNANCK1-AS1高表达组3年生存率52.31%(34/65)低于LncRNANCK1-AS1低表达组的77.08%(37/48)(P<0.05),LncRNA TP73-AS1高表达组3年生存率52.78%(38/72)低于LncRNATP73-AS1低表达组80.49%(33/41)(P<0.05)。结论LncRNANCK1-AS1、LncRNATP73-AS1在胃癌组织中表达上调,可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌发生、发展,还可导致不良预后,有望作为辅助评估胃癌患者预后的生物标志物。

长链非编码RNA NCK1-AS1作为海绵体与TCF4竞争结合miR-153-5p调节乳腺癌细胞侵袭、炎症和凋亡

目的:研究LncRNA NCK1-AS1与miR-153-5p调节转录因子4(TCF4)对乳腺癌细胞生长、运动和炎症因子的影响。方法:以乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7作为体外研究对象,将裸鼠作为体内研究对象。RT-qPCR检测组织和细胞中LncRNA NCK1-AS1、miR-153-5p和TCF4表达;TargetScan预测与双荧光素酶报告实验验证LncRNA NCK1-AS1与miR-153-5p的靶向关系;Transwell检测细胞侵袭;ELISA检测炎症因子水平;流式细胞术检测凋亡;Western blot检测TCF4、c-myc、c-jun蛋白水平;裸鼠皮下注射MDA-MB-231细胞建立移植瘤模型;免疫组化检测Caspase-3、VEGF阳性细胞百分比。结果:LncRNA NCK1及TCF4在癌组织和细胞中高表达,而miR-153-5p则低表达。与对照组比较,LncRNA NCK1-AS1干扰抑制乳腺癌细胞侵袭和炎症反应,并促进其凋亡。LncRNA NCK1-AS1与miR-153-5p存在靶向关系。与对照组相比,LncRNA NCK1-AS1干扰和miR-153-5p过表达降低了细胞TCF4、c-myc和c-jun表达,而TCF4转染上调TCF4、c-myc和c-jun表达。与sh-NC组比较,shNCK1-AS1组裸鼠肿瘤体积、重量降低,NCK1-AS1表达降低,miR-153-3p表达升高,Caspase-3阳性细胞百分比升高,VEGF阳性细胞百分比降低,TCF4、c-myc和c-jun蛋白表达降低。结论:LncRNA NCK1-AS1和miR-153-3p通过TCF4调节乳腺癌细胞侵袭、炎症和凋亡。

干扰NCK1-AS1抑制乳腺癌细胞发生发展

目的探索长链非编码RNA(lncRNA)NCK1-AS1在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用和分子机制。方法定量逆转录PCR(RT-qPCR)和Western印迹检测25例乳腺癌组织和癌旁组织中NCK1-AS1、miR-361-5p与Rho相关蛋白激酶(ROCK)1蛋白的表达。将乳腺癌细胞分为si-NCK1-AS1组、si-NC组、miR-361-5p组、miR-NC组、si-NCK1-AS1+anti-miR-361-5p组和si-NCK1-AS1+anti-miR-NC组,应用细胞计数试剂盒(CCK)-8检测细胞抑制率,集落形成实验检测细胞集落形成数,划痕实验检测细胞迁移距离,Transwell实验检测细胞侵袭。荧光素酶活性检测分析NCK1-AS1与miR-361-5p、miR-361-5p与ROCK1的靶向关系。结果乳腺癌组织中NCK1-AS1、ROCK1蛋白的表达水平比癌旁组织高,miR-361-5p表达水平比癌旁组织低,差异有统计学意义(P<0.05)。si-NCK1-AS1组乳腺癌细胞miR-361-5p表达水平、抑制率比si-NC组升高,ROCK1蛋白的表达水平、集落形成数、迁移距离和侵袭细胞数依次比si-NC组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。NCK1-AS1靶向miR-361-5p,miR-361-5p靶向ROCK1。miR-361-5p组乳腺癌细胞的ROCK1蛋白表达水平、集落形成数、迁移距离和侵袭细胞数低于miR-NC组,抑制率高于miR-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-NCK1-AS1+anti-miR-361-5p组乳腺癌细胞中miR-361-5p表达水平、抑制率比si-NCK1-AS1+anti-miR-NC组低,ROCK1蛋白的表达水平、集落形成数、迁移距离和侵袭细胞数均比si-NCK1-AS1+anti-miR-NC组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论干扰NCK1-AS1通过miR-361-5p靶向ROCK1,抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。