胡桃醌对肺癌NCL-H460细胞的影响

目的观察胡桃醌对肺癌NCL-H460细胞的影响。方法应用不同浓度的胡桃醌作用于体外培养的肺癌NCL-H460细胞,观察各组细胞形态改变,MTT法分析生长抑制率。结果各组与阴性对照组比较,细胞生长明显受到抑制(P<0.05),抑制率在10.0%~67.4%之间,随着各组胡桃醌浓度的依次增加,肺癌NCL-H460细胞存活量显著减少,呈明显相关性。结论胡桃醌能显著抑制肺癌NCL-H460细胞的增殖。

益生菌发酵黄芪对LPS诱导的人正常结肠上皮细胞NCM-460氧化损伤保护作用的机制研究

探究益生菌发酵黄芪(fermented Astragali Radix,F-As)与黄芪(Astragali Radix,As)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肠道细胞NCM-460氧化损伤的保护作用及其分子机制。利用MTT法确定了LPS、As和F-As的工作浓度;分别检测并比较了LPS组、As+LPS组和F-As+LPS组,细胞中氧化应激相关指标、抗氧化相关基因在转录水平和蛋白水平表达的变化。与Con组相比,LPS组的活性氧(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)增加(P<0.01),而细胞的存活率、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)以及细胞中的抗氧化基因在转录水平和蛋白水平均显著降低(P<0.01);而As+LPS组和F-As+LPS组,细胞中的ROS和MDA水平降低(P<0.01),细胞的存活率GSH、SOD、T-AOC以及抗氧化基因在转录和蛋白水平得到恢复(P<0.01),且与As+LPS组相比,F-As+LPS组恢复得更显著(P<0.05)。研究结果提示,As和F-As均可以通过激活抗氧化基因的表达,清除细胞内过多的ROS和MDA,从而对LPS诱导的细胞氧化损伤起到保护作用,且F-As优于As。

胡桃醌对肺癌NCL-H460细胞凋亡机制的影响

目的观察胡桃醌对肺癌NCL-H460细胞凋亡机制的影响。方法应用不同浓度胡桃醌作用于肺癌NCL-H460细胞,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用Western Blot法检测Bcl-2、Bax、p-p53蛋白表达水平。结果胡桃醌促进肺癌NCL-H460细胞凋亡,并存在剂量效应;与对照组相比,实验组Bcl-2表达水平降低,Bax、p-p53表达水平显著升高(P<0.05)。结论胡桃醌可通过P53途径诱导肺癌NCL-H460细胞凋亡。

茯苓多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用

为评价茯苓(Poria cocos)多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用,用CCK-8法测定茯苓多糖对细胞增殖的抑制率,用DAPI染色法、AOEB双荧光染色法分析茯苓多糖对细胞凋亡的影响,用细胞划伤愈合实验测定茯苓多糖对细胞迁移能力的影响,用蛋白免疫印迹实验检测茯苓多糖对细胞凋亡、迁移相关蛋白表达的影响。结果表明:茯苓多糖具有抑制NCI-H460细胞增殖、集落形成和迁移的能力,可诱导NCI-H460细胞凋亡;500、1000μg·mL^(-1)的茯苓多糖可使Bax和P53蛋白表达量升高,Bcl-2和MMP-2蛋白表达量降低。

山姜素调节Nrf2通路对高糖诱导的结肠细胞NCM460异常增殖的影响研究

目的 研究山姜素对高糖诱导的结肠细胞NCM460异常增殖的影响及对Nrf2通路的调节作用。方法 结肠细胞NCM460分为正常对照组、高糖模型组、山姜素低、中、高剂量组及阳性对照组,高糖模型组加入终浓度为33 mmol/L的葡萄糖,山姜素各剂量组加入终浓度为33 mmol/L的葡萄糖,同时分别加入终浓度为25、50、100μmol/L的山姜素,阳性对照组加入终浓度为33 mmol/L的葡萄糖的同时加入4μmol/L的富马酸二甲酯,培养72 h,CCK-8试剂盒测定NCM460细胞增殖率,使用试剂盒测定NCM460细胞活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平及NCM460细胞上清液白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8、IL-6、IL-12水平,原位末端标记法(TUNEL)染色法测定NCM460细胞凋亡率,碘化丙啶(PI)染色法测定NCM460细胞周期分布,实时定量聚合酶链式反应(RTq-PCR)NCM460细胞Nrf2、HO-1 mRNA水平,免疫印迹法(Western blot)测定NCM460细胞Nrf2、HO-1蛋白水平。结果 与正常对照组比较,高糖模型组NCM460细胞增殖率,ROS、MDA水平,NCM460细胞上清液IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-12水平,NCM460细胞S及G2期比例显著升高(P<0.05),NCM460细胞SOD、CAT水平,NCM460细胞凋亡率及G1期比例,NCM460细胞Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05);与高糖模型组比较,山姜素各剂量组及阳性对照组NCM460细胞增殖率,ROS、MDA水平,NCM460细胞上清液IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-12水平,NCM460细胞S及G2期比例显著降低(P<0.05),NCM460细胞SOD、CAT水平,NCM460细胞凋亡率及G1期比例,NCM460细胞Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05),且随着山姜素剂量的增加,各项指标变化更优(P<0.05)。结论 山姜素能够显著抑制高糖诱导的NCM460细胞炎症水平,修复NCM460细胞氧化应激损伤,抑制高糖诱导的NCM460细胞的异常增殖并促进其凋亡,其机制可能与调节Nrf2/HO-1通路有关。

基于NF-κB信号通路探讨湿生扁蕾乙酸乙酯提取物对NCM460细胞凋亡的影响

目的探讨湿生扁蕾乙酸乙酯提取物对人正常结肠上皮细胞NCM460凋亡的影响。方法采用10 g/mL脂多糖(LPS)诱导NCM460细胞建立炎症模型,给予湿生扁蕾乙酸乙酯提取物(50、100、200 g/mL)干预24 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,ELISA法检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6水平,TUNEL染色技术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9及NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB、p-NF-κB、IKKα/β、p-IKKα/β、IκBα、p-IκBα蛋白表达,免疫荧光技术观察NF-κB在细胞核中的表达。结果与对照组比较,LPS处理NCM460细胞24 h后细胞存活率降低(P<0.01),细胞凋亡加重(P<0.01),细胞中IL-1β、IL-6水平升高(P<0.01),Bax、caspase-3、caspase-9、p-IKKα/β/IKKα/β、p-IκBα/IκBα、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01),并促进NF-κB入核;与LPS组比较,湿生扁扁蕾乙酸乙酯提取物干预24 h后细胞存活率升高(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡减轻(P<0.01),IL-1β、IL-6水平降低(P<0.01),Bax、caspase-3、caspase-9、p-IKKα/β/IKKα/β、p-IκBα/IκBα、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01),并抑制NF-κB入核。结论湿生扁蕾乙酸乙酯提取物可能通过调控NF-κB信号通路改善LPS诱导的NCM460细胞凋亡。

鸦胆子油乳抑制肺癌NCI-H460细胞的增殖及其机制

目的:探讨鸦胆子油乳在体外对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用及其机制。方法:以不同质量浓度鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)处理NCI-H460细胞,24、48、72h后收集细胞,MTT法检测鸦胆子油乳对NCI-H460细胞增殖的抑制作用;吉姆萨染色后光学显微镜下观察NCI-H460细胞形态学改变;流式细胞仪测定NCI-H460细胞凋亡率;caspase-3酶活性试剂盒检测NCI-H460细胞caspase-3酶活性。结果:鸦胆子油乳可剂量和时间依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,80μg/ml鸦胆子油乳作用72h时的抑制率达(91.07±1.60)%。鸦胆子油乳作用后,NCI-H460细胞呈现典型凋亡形态学改变;流式细胞术检测结果显示,10、20和40μg/ml鸦胆子油乳作用48h后,NCI-H460细胞凋亡率分别为(45.23±4.30)%、(54.14±3.09)%和(61.57±7.28)%(P<0.01)。鸦胆子油乳可剂量依赖性上调NCI-H460细胞caspase-3酶活性,40μg/ml鸦胆子油乳时caspase-3酶活性为(1.07±0.07)μmol/μg,是对照组的4.97倍(P<0.01)。结论:鸦胆子油乳可能通过活化caspase-3诱导NCI-H460细胞凋亡,抑制NCI-H460细胞增殖。

木犀草素通过上调microRNA-34a-5p诱导肺癌细胞株H460凋亡的研究

探究木犀草素诱导人肺癌细胞株H460凋亡的分子机制,为其治疗肺癌提供新的科学依据。选取处于对数生长期的H460细胞株,并分为对照组和不同剂量的木犀草素组。采用CCK-8法检测木犀草素对H460细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;PCR array检测肺癌相关基因mRNA表达;Western-blot检测p53、p21、Bax、Bcl-2表达量变化;qRT-PCR法检测microRNA-34a(miR-34a)的表达水平;本实验还检测了过表达miR-34a-5p后对H460细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。结果显示,木犀草素能有效抑制人肺癌H460细胞的增殖,并促进其凋亡,其机制可能是通过激活p53信号通路,上调miR-34a-5p,最终影响凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达来实现的。

和厚朴酚通过NF-κB信号通路抑制IL-1诱导的人肺癌细胞H460血管生成

目的探讨和厚朴酚(honokiol,HNK)对肿瘤炎性微环境诱导的肺癌细胞H460血管生成的影响及其可能的机制。方法采用CCK-8检测HNK对H460细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响;RT-PCR、Western blot、免疫荧光检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达;Western blot检测信号通路蛋白p-IκBα、p-IKKα和NF-κB p65蛋白表达。采用划痕试验、Transwell迁移试验和成管试验检测HNK抑制HUVEC细胞的迁移和血管生成能力。结果HNK作用H460细胞24、48、72 h后,浓度和时间依赖地抑制H460细胞增殖。HNK能够浓度依赖的抑制HUVEC细胞的存活。HNK还降低了H460细胞中血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白质和mRNA表达水平。随后,HNK浓度依赖性地抑制了NF-κB信号通路中IκBα、NF-κB和p-IKKα。划痕试验、Transwell小室迁移试验和成管试验显示HNK处理的H460条件培养基具有抑制HUVEC细胞的迁移和血管生成能力。结论HNK可以通过抑制NF-κB途径导致VEGF的下调而降低人肺癌细胞的活力和血管生成。

周氏克金岩方有效成分槲皮素促进肺癌细胞NCI-H460凋亡的相关机制研究

目的观察周氏克金岩方有效成分槲皮素诱导肺癌细胞NCI-H460凋亡的相关作用机制。方法采用Hoechst33258染色及透射电镜(TEM)观察槲皮素诱导细胞凋亡的形态学变化,结合Western blot法检测槲皮素对细胞内EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2及凋亡相关通路的影响。结果各浓度的槲皮素处理细胞24h后,以25、50μmol/L 2个药物浓度处理组的凋亡特征更为显著,荧光显微镜下可见细胞核或细胞质内浓染致密的颗粒块状荧光;在25μmol/L槲皮素处理细胞48h后在透射电镜的观察图片中也呈现出了细胞凋亡的特征;Western blot法对信号通路相关蛋白的检测结果表明,12.5μmol/L的槲皮素能显著抑制c-Raf的活化,而在25μmol/L下能促进caspase-3和caspase-7的活化。结论槲皮素能通过抑制c-Raf的激活,抑制EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2信号通路,同时诱导肺癌细胞凋亡。

腺病毒介导的IL-24对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的体外抑制效应

目的研究腺病毒介导的IL-24基因表达对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及分子机制。方法将Ad-IL-24重组腺病毒感染NCI-H460细胞。以Western blot法鉴定IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达;MTT法检测重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用;经Annexin-V-PE/7-AAD染色后流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率变化;RT-PCR检测NCI-H460细胞中bax、caspase-3、bcl-2、survivin等因子的表达。结果腺病毒介导的IL-24基因在NCI-H460细胞中能够有效表达;Ad-IL-24组对NCI-H460细胞的生长具有明显的抑制作用,Ad-IL-24能够上调bax、caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、survivin等因子的表达,诱导细胞凋亡。结论腺病毒介导的IL-24基因在体外可明显抑制人肺癌细胞NCI-H460的生长,诱导其凋亡,其分子机制可能与上调bax、caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

重楼皂苷Ⅶ抑制肺癌H460细胞增殖和迁移能力研究

为研究重楼皂苷Ⅶ(polyphyllin Ⅶ)抑制人肺癌H460细胞增殖、迁移能力和诱导凋亡的作用和机制。本实验采用MTT法检测重楼皂苷Ⅶ处理后H460细胞生长抑制率,Hoechst 33258染色观察细胞形态,细胞集落形成实验考察细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell小室实验研究H460细胞迁移和侵袭能力的改变,并通过western blot法检测在重楼皂苷Ⅶ处理前后细胞蛋白表达变化情况。结果发现,重楼皂苷Ⅶ可显著抑制H460细胞增殖,影响其集落形成,并使细胞形态发生变化,抑制细胞体外的迁移和侵袭能力,并可诱导凋亡的发生。重楼皂苷Ⅶ处理后,H460细胞中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9显著降低,凋亡相关蛋白剪切型caspase-3、Bax表达增加,ICAD、Bcl-2表达降低,提示重楼皂苷Ⅶ体外可能通过调节基质金属蛋白酶抑制H460细胞迁移和侵袭,同时诱导凋亡的发生。

青藤碱诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡及其机制的实验研究

目的:探究青藤碱(SIN)诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡的作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定SIN对肺癌NCI-H460细胞生长的影响;Western blot测定Bcl-2,Bax蛋白的表达;用SIN、PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂干预NCI-H460细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果:SIN对肺癌NCI-H460细胞生长有抑制作用,呈时间、浓度依赖性;SIN可以使NCI-H460细胞Bcl-2表达减低,Bax增强;SIN与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用后可协同增加NCI-H460细胞凋亡(P<0.05)。结论:SIN可以抑制肺癌NCI-H460细胞的生长,能改变其Bax,Bcl-2蛋白的表达,与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用可协同发挥促进肺癌细胞凋亡作用,可望成为新的肺癌治疗药物。

H460细胞与单个核细胞三维立体混合培养中MMP-2和MMP-9的表达

目的:研究单个核细胞和肺癌细胞三维立体混合培养对MMP表达的影响.方法:活性胶原立体培养分为H460细胞组(HG)、单个核细胞组(MG)、混合组(HMG)3组,观察癌细胞的生长状况,用明胶酶谱法测定不同时间点各组MMP-2和MMP-9表达.结果:各组细胞在立体胶原内生长良好;MG未明显分泌MMP-2和MMP-9,HG和HMG分泌MMP-2和MMP-9,且HGM分泌的明显多于HG.结论:单个核细胞和癌细胞混合培养后MMP分泌增多.

花青素对肺癌细胞NCI-H460的体内外抗肿瘤效应

目的研究花青素对肺癌细胞NCI-H460的体内外抗肿瘤效应。方法采用细胞记数和台盼蓝拒染法观察对细胞增殖和活力的影响;用MTT比色分析法测定细胞生长抑制率,计算出IC50值;DNA琼脂糖凝胶电泳测细胞的凋亡;利用裸鼠肺癌细胞移植瘤模型观察花青素对裸鼠肿瘤生长的抑制作用。结果花青素可以使NCI-H460细胞的活力明显下降,对NCI-H460细胞具有抑制作用,并有时间和剂量依赖性,IC50值为90.8μg/ml;DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯形条带;花青素对裸鼠肿瘤的生长具有一定的抑制作用。结论花青素能明显抑制NCI-H460细胞的增殖、诱导细胞凋亡和抑制裸鼠肿瘤的生长。

黄芩苷对肺癌H460细胞生物学特性及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨中药单体黄芩苷对人肺癌H460细胞增殖、凋亡、上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移生物学特性及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测不同浓度的黄芩苷对H460细胞细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50)。通过流式细胞术检测黄芩苷对H460细胞凋亡的影响,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中上皮性钙黏附素(E-cadherin)、神经性钙黏附素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)基因表达量,划痕实验检测黄芩苷对H460细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测黄芩苷对H460细胞侵袭能力的影响,Western印迹检测H460细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及Wnt/β-catenin信号通路Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)等关键蛋白表达情况。结果黄芩苷可抑制H460细胞增殖,且呈浓度依赖性关系,对H460细胞的IC50为(188.1±11.52)μmol/L;黄芩苷以浓度依赖性促进H460细胞凋亡,抑制H460细胞侵袭和迁移;qRT-PCR结果发现黄芩苷能够促进H460细胞中E-cadherin基因表达,抑制N-cadherin和Vimentin基因表达;黄芩苷可下调PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达,上调Bax蛋白表达,且能够抑制Wnt/β-catenin信号通路中Wnt1和β-catenin蛋白表达。结论黄芩苷可抑制人肺癌H460细胞增殖、EMT、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,该过程的分子机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

新化合物D261抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖及其作用机制

肺癌是当今恶性肿瘤死亡率最高的癌症。早期肺癌主要以手术治疗为主,并辅以放疗化疗。但是化疗药物毒副作用大,且抗药性在一些肿瘤靶向性药物中逐渐显现。因此,亟需新的抗肿瘤药物。天然产物是小分子新药的主要来源。我们在对天然小分子化合物的筛选过程中发现D261（从固体发酵物中提取,纯度大于95%）具有潜在的抗肿瘤活性,且对非小细胞肺癌的抑制作用最显著。因此,本文对D261影响非小细胞肺癌NCI-H460及其相关机制作了初步探讨。

文殊兰叶氯仿提取物诱导NCI-H460细胞凋亡的研究

目的研究文殊兰叶氯仿提取物(CE)对非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响。方法通过MTT法检测CE对NCI-H460细胞的生长抑制作用;采用Hoechst33258荧光染色法检测CE作用后凋亡细胞形态的变化;通过免疫细胞化学检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;采用流式细胞术(FCM)检测CE作用后对细胞周期的影响。结果 CE抑制NCI-H460细胞增殖,其24、48、72h的IC50分别为:(36.22±3.04)、(41.21±2.50)、(62.55±3.47)mg/L;荧光染色显示,经CE作用后的细胞出现细胞核裂解,染色质浓缩,产生凋亡小体;免疫细胞化学法显示CE能增强促进凋亡蛋白Bax和降低抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达;FCM检测表明CE作用后的细胞被阻滞在G1/S期。结论 CE在体外能有效地抑制NCI-H460细胞生长,其机制可能与改变细胞周期并诱导细胞凋亡有关。

siRNA对肺癌细胞株NCI-H460 bcl-2基因表达的影响

目的:研究siRNA (smallinterferenceRNA)对大细胞肺癌细胞株NCI -H4 6 0bcl- 2基因表达的影响。方法:利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl - 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入NCI-H4 6 0细胞株,设置转染bcl- 2反义药物G3139和空白两对照组。用MTT法检测siRNA对细胞生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期的改变和Bcl- 2蛋白表达;RT -PCR检测bcl- 2mRNA水平。结果:siRNA组与对照组细胞存活率均有显著性差异(P <0 0 5 ) ;siRNA组bcl- 2的mRNA明显低于对照组和反义组(P <0 0 5 ) ;siRNA组Bcl- 2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组以及反义组细胞阻滞于S期。结论:体外转录合成的siRNA可抑制NCI-H4 6 0细胞bcl- 2基因的表达,抑制率可达5 0 %以上。

抗clusterin反义核酸治疗提高肺癌H460细胞放射敏感性的实验研究

目的:研究抑制clusterin的表达对肺癌H460细胞放射敏感性的影响。方法:用脂质体转染的方法将抗clusterin反义核酸转染肺癌H460细胞,以137Cs作为放射源对肺癌细胞进行放射干预。用流式细胞仪检测抗clusterin反义核酸治疗和放射干预对肺癌细胞凋亡的影响,用MTT法和克隆形成分析方法检测抗clusterin反义核酸治疗和放射干预对肺癌细胞增殖的影响。结果:抗clusterin反义核酸特异性抑制了分泌型clusterin的表达,而对核型clusterin的表达无明显作用。单纯放射干预或单纯反义核酸转染将凋亡细胞数提高了10%,反义核酸治疗联合放射干预使肺癌H460细胞的凋亡细胞数增加了25%,和单纯放疗或单纯反义核酸转染组比较有显著性差异(P<0.01)。MTT和体外克隆计数分析显示抗clusterin反义核酸治疗联合放疗干预显著抑制了肺癌H460细胞的增殖(P<0.01)。结论:体外实验提示抗clusterin反义核酸治疗可以提高肺癌细胞对放射的敏感性。