HIV-1 NCp15基因的克隆、蛋白表达及鸡卵黄抗体的制备

目的:为研究HIV-1 NCp15的生物学活性,制备HIV-1 NCp15蛋白及其鸡卵黄抗体。方法:用PCR的方法扩增编码NCp15基因序列,将其克隆到原核表达载体PGEX4T1中表达HIV-1 NCp15蛋白,用HIV阳性血清做Western blot鉴定目的蛋白。以纯化的NCp15蛋白抗原免疫产蛋鸡,制备卵黄抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),Western blot检测抗体滴度及特异性。结果:成功构建原核表达载体PGEX4T1-NCp15,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约45ka的NCp15融合蛋白,经Western blot鉴定正确。纯化蛋白免疫产蛋鸡,制备的鸡卵黄抗体IgY具有较强免疫特异性。结论:得到纯化的HIV-1NCp15蛋白,制备的IgY能够检测HIV-1病毒蛋白NCp15,为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。