单克隆抗体ND-1-量子点荧光探针对大肠癌细胞的特异成像研究

目的制备抗人大肠癌单克隆抗体ND-1的量子点荧光探针,实现对大肠癌细胞的靶向成像。方法采用共价偶联方法,以1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)为缩合剂,通过在反应体系中加入不同摩尔比例的单克隆抗体ND-1和游离量子点QD605进行条件优化,制备偶联产物ND-1-QD605荧光探针;利用荧光光谱扫描技术对ND-1-QD605进行光学特性表征,并检测其抗光漂白能力;利用免疫荧光方法检测ND-1-QD605对大肠癌细胞的靶向结合能力。结果在量子点QD605与单克隆抗体ND-1摩尔比1:40条件下,可实现二者的高效偶联;荧光光谱分析显示ND-1-QD605保留了游离量子点QD605优良的荧光特性;在激发光照射1h内,ND-1-QD605荧光强度未发生明显改变;荧光显微镜观察可见该探针能够与表达有相应抗原LEA的人大肠癌CCL187细胞特异性结合,呈现高灵敏度、特异性荧光成像。结论制备的单克隆抗体ND-1的量子点荧光探针具有大肠癌细胞靶向成像能力,有望为大肠癌的体内靶向成像研究和临床诊断提供新方法。

间接荧光抗体法快速检测病禽组织中的新城疫抗原

利用间接荧光抗体法IFA对用新城疫病毒NDV攻毒鸡胚的卵黄、胚体、尿囊液、尿囊膜和人工感染鸡、自然病死鸡的心、肝、脾、肺、肾、脑、盲肠扁桃体、法氏囊等8种脏器进行检测。结果鸡胚收集液、6例人工感染和15例自然病例的脏器检测结果均为阳性;脏器以肝、脾、肺、脑的检出率最高,检出效果最好。

三种新城疫抗原检测法中抗体最适作用浓度的测定

以三种检测方法对兔抗 NDV- Ig G的最适作用浓度进行了测定。结果表明 :在琼脂扩散试验 ( AGP)中兔抗 NDV- Ig G的最适作用浓度为 1 45 0 .0 ug/ml,在免疫荧光抗体试验 ( IFA)为 72 .5 ug/ml,在酶联免疫吸附试验 ( ELISA)中为 1 62 .

鸡新城疫抗原抗体复合物疫苗的研究

用中等毒力新城疫(ND) Roakin株病毒作为抗原,与ND抗体配制不同比例的复合物,并在37℃感作不同的时间,分别配制复合物疫苗1和复合物疫苗2,用无特定病原菌(SPF)鸡进行免疫对比试验.试验鸡随机分为4组,饲养在隔离器中,除对照组外,试验1、2、3组分别在20日龄接种复合物疫苗1、复合物疫苗2和常规Roakin活疫苗.各组从免疫后第1周起至第7周,每周采血,用HI试验检测血清中ND抗体水平,70日龄时用北京株ND强毒进行攻毒试验.第1、2组在接种疫苗后,有个别鸡出现轻微喘气或羽毛蓬松的症状,2～3d后好转;第3组接种疫苗后,鸡群100%发病,呈典型ND症状,约1周后康复,无鸡只死亡;对照组的鸡群一直保持健康状态.第1、2、3组的抗体水平分别在免疫后的2、3、2周达到高峰,HI效价分别为1∶29、1∶28 5和1∶210,在第7周分别下降为1∶26 07、1∶26 07和1∶27,而对照组的HI效价一直在1∶22左右.攻毒后,对照组死亡率为100%,第1、2、3组分别为13 3%、6 7%和6 7%.试验结果提示:用中等毒力的NDV和ND抗体配制成抗原抗体复合物疫苗,可以大大减轻疫苗的毒副作用,在保持疫苗良好免疫原性的同时,提高了疫苗的安全性.

新城疫病毒单克隆抗体研究Ⅲ酶标单克隆抗体ELISA夹心法检测鸡新城疫病毒抗原

应用双抗体ＥＬＩＳＡ夹心法检测禽类新城疫病毒（ＮＤＶ）抗原，用单克隆抗体或多克隆抗体包被固相载体，将活化的４０孔板作为捕捉待检新城疫病毒抗原，以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）与单克隆抗体的结合物作为示踪抗体，比较了单克隆抗体和多克隆抗体的捕捉效率。结果表明，ＮＤＶ单抗２Ｃ１２、４Ｈ１０优于血清ＩｇＧ，同时确定了双抗体ＥＬＩＳＡ夹心法对不同日龄健康鸡组织产生背景反应的Ｏ．Ｄ．值基本参数，以Ｘ＋２ＳＤ为判定阈值。捕捉抗体２Ｃ１２、４Ｈ１０的工作浓度为５００～４００μｇ／ｍｌ；示踪抗体２Ｃ１２、４Ｈ１０的工作浓度为１∶３０００～１∶２０００，ＥＬＩＳＡ夹心法的灵敏度可达４μｇＮＤＶ蛋白／ｍｌ；对ＮＤＶ不同毒株感染鸡各脏器的ＮＤＶ检出率为：肾１００％、肺９０％。证明用双抗体ＥＬＩＳＡ夹心法检测鸡新城疫病毒抗原特异，敏感。

两种鸡传染性法氏囊病疫苗免疫1日龄商品肉鸡的效果比较

将IBD抗原抗体复合物疫苗(囊胚宝)和含IBDV VP2蛋白的亚单位灭活疫苗(新流法)免疫1日龄商品肉鸡,对其免疫效果进行了比较。抗体检测结果表明,利用经典IBD试剂盒检测时,囊胚宝免疫组35日龄和42日龄的ELISA抗体水平高于新流法免疫组;利用VP2专用试剂盒检测时,新流法组28日龄ELISA抗体水平高于囊胚宝组,35日龄时则是囊胚宝组抗体水平较高。于28日龄时利用IBDV超强毒株(vvIBDV)进行攻毒结果表明,攻毒后第4天,新流法免疫组的腔上囊大部分呈现出明显病变,且9/10的腔上囊中检出vvIBDV;囊胚宝免疫组鸡腔上囊则10/10仅检出W2512株疫苗毒。攻毒后4 d增重对比结果显示:囊胚宝免疫组鸡增重明显高于新流法免疫组和未免疫组。本试验结果表明,雏鸡通过1日龄免疫囊胚宝来预防IBD的效果要优于本试验中所用的新流法灭活疫苗。