表达新城疫病毒HN基因的重组火鸡疱疹病毒的构建

应用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,用设计带有限制性酶切位点的特异地扩增了从起始密码子开始的 1 8kb新城疫病毒 (NDV)血凝素 神经氨酸 (HN)基因开放式阅读框 (ORF) ,然后插入 pTK2 B的NheI位点 ,构建了含NDVHN基因的插入载体 pTKHN1和 pTKHN2 ,将其与感染火鸡疱疹病毒 (HVT)细胞的总DNA共转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,经有限稀释法和Dot blot筛选 ,得到含有HN基因的重组体rHVT1和rHVT2 。对重组体进行组织培养传代和Westernblot分析 ,表明重组体在感染细胞中表达了HN蛋白 ,重组体在CEF上的生长特性与亲本病毒相同 ,且在连续传代过程中保持稳定。