NDM-5阳性大肠杆菌裂解性噬菌体的生物学特性

NDM-5基因是在动物源细菌尤其是鸡源大肠杆菌中主要流行的碳青霉烯类耐药基因,携带该基因的菌株呈现多重耐药性,传播能力强,被称为"超级细菌"。本研究以携带NDM-5基因的鸡源大肠杆菌SQ-C-E5为宿主菌,从污水中分离了对该细菌具有裂解作用的噬菌体,命名为vB_EcoM_Bp5。通过透射电镜观察,最佳感染复数测定,一步生长曲线绘制,杀菌试验,热稳定性及酸碱稳定性测定等试验分析该噬菌体的生物学特性。结果表明,该噬菌体为肌尾病毒科,其噬菌斑透亮,无晕圈,最佳感染复数为10,潜伏期为5 min,爆发期为65 min,该噬菌体在温度为30~60℃和pH为5~10时较稳定,并且噬菌体vB_EcoM_Bp5的裂解谱较广,对多株NDM-5阳性和阴性大肠杆菌都具有裂解作用。因此,噬菌体vB_EcoM_Bp5在防治携带NDM-5基因的大肠杆菌方面具有潜在应用价值。

1株可裂解bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌噬菌体的分离与生物学特性

旨在分离1株可裂解bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌的噬菌体,探究该噬菌体的生物学特性,为防控bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌感染提供新的技术思路。对分离出的噬菌体进行透射电镜观察、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性试验及全基因组测序分析。结果显示:成功分离出1株大肠杆菌噬菌体vB_EcoM-ZQ1,该噬菌体属于有尾病毒目,肌尾病毒科,其最佳感染复数为0.1,潜伏期为20 min,裂解期为10 min,裂解量为92 PFU·cell^(-1)。在温度4~55℃、pH4~10条件下,该噬菌体都有较高的活性。其对多重耐药大肠杆菌有一定裂解作用,裂解率为25.5%。该噬菌体基因全长149112 bp,GC含量为49.1%,共有184个ORF,其中70个ORF编码功能蛋白,有2个ORF编码tRNA,并未发现含有耐药基因与毒力因子;经BLAST比对发现,噬菌体与Shigella phage phiSboM-AG3有92.37%的相似性,基于噬菌体末端酶大亚基构建的同源进化树结果可得结论,噬菌体vB_EcoM-ZQ1和与沙门菌噬菌体pSal-SNUABM-02的亲缘关系最近。综上提示,噬菌体vB_EcoM-ZQ1,生物学特性稳定,基因结构完整,为后续bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌感染的防控奠定了一定前期基础。

禽流感病毒H5N1亚型NS1基因在大肠杆菌中的表达

目的表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1蛋白,用于AIV感染与注射灭活疫苗鸡的鉴别诊断和NS1蛋白功能研究。方法采用RT_PCR方法对H5N1亚型AIVNS1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM_T_easy载体,将该基因插入pGEX_4T_1中构建NS1基因原核表达载体,转化BL21大肠杆菌后,在IPTG诱导下表达NS1蛋白,Westernblot鉴定表达NS1蛋白。结果成功克隆H5N1亚型AIV的NS1基因,其核苷酸序列长度为690bp,编码230个氨基酸残基。构建NS1基因原核表达载体在大肠杆菌内表达出约51×103的NS1融合蛋白。Westernblot鉴定表明表达NS1蛋白与H7N2AIV感染鸡血清有反应性。结论在大肠杆菌中成功表达了H5N1亚型AIVNS1基因蛋白,具有与感染H7N2亚型AIV阳性血清反应原性。