Nm23-H1/NDPK-A基因在大肠杆菌中的高效表达及产物纯化的研究

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增人二磷酸核苷激酶Ａ亚基（ＮＤＰＫ－Ａ）基因，即ｎｍ２３－Ｈ１／ＮＤＰＫ－Ｋ基因的编码序列，经序列分析后，定向克隆于表达质粒载体ｐＢＶ２２０，在大肠杆菌ＤＨ５α中高效表达出重组人ＮＤＰＫ－Ａ．表达产物为可溶性的非融合蛋白，占菌体总蛋白４２％．斑点ＥＬＩＳＡ法鉴定表明表达产物与ＮＤＰＫ－Ａ标准抗血清呈阳性反应．以ＤＥＡＥ纤维素弱阴离子交换层析、ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅ染料亲和层析结合高效液相排阻色谱技术纯化ｒＮＤＰＫ－Ａ，得纯度为９６．７％的目标蛋白．以反相高效液相色谱法进行酶活性分析，表明纯化的ｒＮＤＰＫ－Ａ能催化ＡＴＰ＋ＵＤＰ＝ＡＤＰ＋ＵＴＰ的反应，比活性为８００Ｕ／ｍｇ蛋白．

BCL-2蛋白、NM23基因/NDPK、CEA在非小细胞肺癌的表达及其意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中bcl-2蛋白、nm23基因/NDPK、CEA的表达及其在NSCLC发生、转移、预后中的意义.方法 采用亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)免疫酶标法检测65例NSCLC、42例癌旁正常肺组织bcl-2蛋白、nm23基因/NDPK、CEA的表达情况.结果NSCLC中bcl-2蛋白、nm23基因/NDPK、CEA阳性率分别为33.8%、70.8%、61.5%,腺癌、腺鳞癌CEA阳性率(90%、60%)明显高于鳞癌(20%,P<O.01).nm23基因/NDPK阳性率在NSCLC伴淋巴结阳性组低于淋巴结阴性组(58.1%,82.4%,P<0.05);且Ⅰ、Ⅱ期患者阳性率高(84.6%、85.7%),Ⅲ期患者低(56.3%,P<0.05).CEA阳性率在NSCLC伴淋巴结阳性组高于淋巴结阴性组(87.1%,38.2%,P<0.001);且Ⅰ期患者阳性率低(34.6%),Ⅱ、Ⅲ期患者高(100%、75%,P<0.001);CEA阳性患者术后生存率明显低于CEA阴性者(P<0.05).结论 (1)bcl-2基因与部分NSCLC的发生有关,而与NSCLC淋巴结转移、PTNM分期、生存率无关.(2)nm23基因/NDPK与淋巴结转移呈负相关;临床分期越晚,阳性率越低;与生存率无关.(3)CEA可作为NSCLC早期诊断、鉴别诊断的参考指标.

双向凝胶电泳-飞行时间质谱技术鉴定小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M2/NDPK B的表达

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)分析未交配小鼠子宫内膜和妊娠第五天(D_5)小鼠子宫内膜胚泡黏附时植入位点及其旁组织蛋白质组。差异蛋白质组学显示,等电点(isoelectricpoint,pI)约7.1、分子量(molecularweight,Mw)约18kDa的蛋白质点在D_5小鼠子宫内膜特别是植入位点表达上调。对此蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix—assistedlaserdesorpion/ionizationtimeofflyingmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(PeptideMassFingerprint,PMF),经Mascot:PeptideMassFingerprint中SWISS-PROT数据库查询后,鉴定该蛋白质为鼠源性nm23-M2/NDPKB。RT-PCR和免疫组织化学结果也显示D_5小鼠子宫内膜nm23-M2/NDPKBmRNA和蛋白表达明显增加。提示nm23-M2/NDPKB参与胚泡着床这一重要生命活动过程。

p53 CD44V6及nm23/NDPK在非小细胞肺癌中表达的相关性分析

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中p53、CD44V6及nm23/NDPK表达的相关性及预后意义。方法:采用免疫组织化学SP法对69例NSCLC组织中p53、CD44V6及nm23/NDPK进行检测。结果:p53、CD44V6及nm23/NDPK的表达与NSCLC患者的临床分期(P<0.05,P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05,P<0.01)及生存率(P<0.05)密切相关。p53、CD44V6表达与nm23/NDPK在NSCLC中的表达呈明显负相关(P<0.01)。结论:联合检测NSCLC中p53、CD44V6及nm23/NDPK的表达对于判断预后和指导治疗可能具有实用价值。

人胰腺癌nm23基因产物/NDPK表达及其意义

人胰腺癌ｎｍ２３基因产物／ＮＤＰＫ表达及其意义①２００４３３上海第二军医大学长海医院李淑德许国铭倪灿荣②李兆申张洪富关键词肿瘤，胰，人；基因表达；ｎｍ２３／ＮＤＰＫ中国图书资料分类号Ｒ５７６１９８８年，Ｓｔｅｅｇ等〔１〕从具有不同转移能力的小鼠黑色素...

肝细胞癌肝动脉化疗栓塞后PCNA和nm23-H1／NDPK的研究

目的:研究肝细胞癌肝动脉化疗栓塞(TACE)对肝肿瘤增生与转移的影响.方法:1992-07/2000-07不能手术切除的大肝癌经TACE治疗后,肿瘤缩小,而后二期手术切除,本组共施使这类手术72例,根据性别、年龄、既往史、肿瘤大小共计10项指标,与同期未经TACE治疗,直接手术切除的肝癌487例进行配对,有32对进入本课题研究.运用免疫组化技术,对比研究了肝癌细胞中的细胞增生核抗原(PCNA),和nm23-H1基因的表达.结果:肝癌经TACE治疗后PCNA的标记指数升高,PCNA标记指数≤25%、26-50%、51-75%、＞75%的对照组分别为75%、14.3%、10.7%、0%,TACE治疗组分别为35.7%、21.4%、28.6%、14.3%,(P＜0.01,n=28).nm23-H1基因表达肝癌细胞与细胞核中均存在,但治疗组与对照组无显著差异.结论:肝癌经TACE治疗后残留癌的反应性增生使PCNA标计指数升高,导致TACE治疗肝癌远期疗效不理想,所以肝癌TACE后二期手术很有必要.

AtNDPK2基因转化敖汉苜蓿及其耐盐性分析

植物核苷二磷酸激酶（NDPKs），属于蛋白激酶家族，参与植物的多种生理生化过程，在植物响应非生物胁迫过程中发挥重要作用。NDPK2基因转化紫花苜蓿，对提高紫花苜蓿的耐逆性具有重要意义。试验以“敖汉”苜蓿下胚轴的再生系统为基础，通过农杆菌介导法将SWPA2驱动的AtNDPK2基因转入紫花苜蓿下胚轴，获得抗性植株。通过PCR初步检测证明该基因已经整合到“敖汉”苜蓿的基因组，阳性植株转化率为23．3％。不同浓度NaCl胁迫测定转基因植株的SOD、POD活性及质膜相对电导率、MDA含量，结果发现在0．4％～1．0％NaCl胁迫下转基因植株的SOD、POD酶活性显著高于对照，相对电导率、MDA含量显著的低于对照，进一步说明AtNDPK2基因的转入增强了“敖汉”苜蓿的耐盐性。

NDPK/nm23-H_1在膀胱癌、肺癌、大肠癌中的表达及意义

收集石腊包埋组织标本膀胱癌８０例、肺癌６９例、大肠癌３７例，对有转移者同时收集其转移灶标本，应用免疫组织化学法检测ＮＤＰＫ／ｎｍ２３－Ｈ１的表达情况。结果显示：ＮＤＰＫ／ｎｍ２３－Ｈ１在膀胱癌、肺癌和大肠癌中表达的阳性率分别为６４％、８０％和９４％；其表达水平在膀胱癌、大肠癌与分化程度有关，随分化程度降低而显著降低（Ｐ＜００５）；在肺癌与组织学类型有关，以肺鳞癌中最高，其次为腺癌和小细胞癌（Ｐ＜００５）；在大肠癌与淋巴结转移有关，伴淋巴结转移者其原发灶中显著降低（Ｐ＜００１）；对原发灶和转移灶的配对分析，未发现相关性。提示ＮＤＰＫ／ｎｍ２３－Ｈ１表达水平是一个与肿瘤恶性行为相关的因素，但其临床意义存在组织学差异。

重组人Nm23-H1/NDPK-A蛋白抗血清的制备与鉴定

[目的 ]通过实验 ,制备出NDPK -A蛋白的抗血清 ,为国内NDPK -A的诊断试剂盒的研究开发提供基础条件。[方法 ]重组人肿瘤转移相关蛋白Nm2 3 -H1/NDPK -A蛋白经Macro -prepDEAE阴离子交换柱层析和CibacronBlue亲和层析 ,得到了电泳纯的NDPK -A蛋白 ,以此制备抗原 ,免疫新西兰纯种兔 ,进而得到NDPK -A蛋白的抗血清。 [结果 ]ELISA法检测所制备的抗体的反应效价为 :1:40 0— 80 0。 [结论 ]westernblot试验结果证实 ,该抗血清具备较好的特异性 ,能与NDPK -A蛋白发生反应 ,可应用于NDPK -A蛋白的实验检测利临床检测。

肾癌组织中CD15和nm23/NDPK表达的临床意义

为了探讨评估肾细胞癌预后因素的指标，应用免疫组化方法研究６０ 例肾癌中细胞粘附分子ＣＤ１５ 和ｎｍ２３ 蛋白表达及其相关关系。结果表明：在肾癌细胞中ＣＤ１５ 和ｎｍ２３ 表达阳性率分别为７０ ．０％ 和５５ ．０ ％ 。肾细胞癌分级、分期和淋巴结转移与ＣＤ１５ 高表达和ｎｍ２３ 低表达有关（Ｐ 均＜ ０．０５） 。ＣＤ１５ 表达与ｎｍ ２３ 表达呈负相关性（ Ｐ＜ ０ ．００５，γ＝ － ０．４２） 。结果提示，ＣＤ１５ 高表达和ｎｍ２３ 低表达对判断肾细胞癌分化程度、预测淋巴结转移是良好指标。

CD44V6、NM23/NDPK在非小细胞肺癌中的表达与转移及预后关系的研究

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中CD44V6及NM23/NDPK的表达及其在NSCLC发生、转移以及预后中的意义。方法采用S-P免疫组化染色技术,检测69例NSCLC中CD44V6及NM23/NDPK的表达情况。结果肺癌原发灶CD44V6阳性表达率与NSCLC淋巴结转移及临床分期呈正相关(P<0.05,P<0.01),NM23/NDPK阳性表达率与NSCLC淋巴结转移及临床分期呈负相关(P<0.05),CD44V6及NM23/NDPK的表达与患者的生存率有关(P<0.05),但与组织学分级及分化程度无关。CD44V6及NM23/NDPK在肺癌中的表达呈明显负相关(P<0.01)。结论对NSCLC进行CD44V6及NM23/NDPK的检测,有助于预测NSCLC进展程度和淋巴结转移,以及评估NSCLC患者的预后。

NM23/NDPK在肺癌中的表达及其与预后关系的研究

目的 :探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中NM23/NDPK的表达及其在NSCLC发生、转移及预后中的意义。方法:采用S P免疫组化染色技术,检测69例NSCLCNM23/NDPK的表达情况。结果:肺癌原发灶NM23/NDPK阳性表达率与NSCLC淋巴结转移及临床分期有关,NM23/NDPK的表达与患者的生存率有关,但与组织学分级及分化程度无关。NM23/NDPK阳性率在NSCLC伴淋巴结阳性组低于淋巴结阴性组(P<0.01)。随着临床分期的增高,阳性率逐渐降低(P<0.05)。NM23/NDPK阳性患者术后1,3年生存率明显高于阴性者(P<0.05)。结论:对NSCLC进行NM23/NDPK的检测,有助于预测NSCLC进展程度和淋巴结转移的诊断,以及评估NSCLC患者的预后。

200例食管癌nm23/NDPK表达与淋巴结转移的关系

２００例食管癌ｎｍ２３／ＮＤＰＫ表达与淋巴结转移的关系沈金辉曾绍文蔡广玲方可君汕头市中心医院病理科（广东省汕头市５１５０３１）近年的研究发现，在人类基因组中存在一类与肿瘤转移表型抑制相关的基因，称为转移抑制基因。ｎｍ２３基因是一种较有代表性的转移抑制...

31例胰腺癌组织nm23/NDPK的表达及其意义

目的 :探讨nm2 3/NDPK癌基因在胰腺癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法 :采用免疫组化S P法 ,对 31例胰腺癌组织及 8例正常胰腺组织进行nm2 3/NDPK癌基因表达的检测。结果 :31例胰腺癌组织中有 2 0例nm2 3/NDPK表达阳性 ,占 6 4 5 % ;8例正常胰腺组织中仅 2例nm2 3/NDPK表达阳性 ,占 2 5 % ,两者有显著性差异 (P <0 0 5 )。低分化胰腺癌nm2 3/NDPK表达阳性率明显高于高分化胰腺癌 (8/ 9,88 8% ;2 / 6 ,33 3% ;P <0 0 5 )。其nm2 3/NDPK表达阳性与淋巴结转移密切相关 (9/ 12 ,75 % ;5 / 15 ,33% ;P <0 0 5 )。提示胰腺癌nm2 3/NDPK表达与淋巴结转移及肿瘤侵袭性呈正相关 ,与癌组织的分化程度呈负相关。结论 :nm2

肿瘤转移抑制基因nm23/NDPK的结构与功能

nm23是第一个被人类发现的肿瘤转移抑制基因,为编码17KDI^NDPK样蛋白质,该蛋白具有二磷酸核苷激酶样活性,本文就nm23家族成员的分子结构、各自编码的蛋白质的结构特点、亚细胞定位和功能做一个综述。

nm23/NDPK在前列腺癌中的表达及意义

目的 研究nm2 3/NDPK在前列腺癌中表达的意义。方法 用免疫组织化学方法检测 4 0例前列腺癌标本中nm2 3/NDPK的表达情况。结果 在 4 0例前列腺癌标本中nm2 3/NDPK的阳性表达为 5 7.5 0 % (2 3/ 4 0 ) ,nm2 3/NDPK的表达随病理分化程度降低而下调 ;转移组 (36 .84 % )明显低于非转移组 (76 .19% ) ,P <0 .0 5。随前列腺癌Whitmore分期的增高 ,nm2 3/NDPK表达明显下调。结论 nm2 3基因在前列腺癌侵袭转移过程中发挥重要作用 ,检测nm2

nm23/NDPK与肿瘤

ｎｍ２３／ＮＤＰＫ与肿瘤李庆选综述孙宝存①审校天津市天和医院（天津市３０００５０）１９８８年美国国立癌症研究所的ｓｔｅｅｇ等应用差别筛选ｃＤＮＡ文库方法首先从小鼠黑色素瘤的Ｋ－１７３５细胞株中分离出一种ｃＤＮＡ基因，并证实其与肿瘤转移抑制有关，命名为...

NDPK-A过表达对膀胱癌细胞株T24增殖和超微结构的影响

目的探讨NDPK-A过表达对人膀胱癌细胞株T24增殖能力和超微结构的影响。方法通过脂质体转染和G418筛选,建立稳定表达外源NDPK-A的T24细胞株,免疫细胞化学法检测细胞内NDPK-A表达,MTT法测定细胞增殖能力,透射电镜观察细胞的线粒体超微形态。结果 NDPK-A过表达对T24细胞的增殖有抑制作用,引起了T24细胞内线粒体的固缩、内嵴变形,或发生肿胀和内部空洞化。结论 NDPK-A对膀胱癌细胞T24的线粒体有破坏作用,可能通过抑制细胞的新陈代谢而抑制其增殖。

nm23-H_1/NDPK与原发性胆囊癌生物学行为的关系

采用抗nm2 3-H1/NDPK单克隆抗体进行免疫组织化学SP法染色 ,检测原发性胆囊癌4 3例 ,胆囊腺瘤 10例 ,慢性胆囊炎 4 5例 ,其中nm2 3 H1/NDPK表达阳性率依序为 4 8 8%、90 0 %、77 8% ,原发性胆囊癌表达阳性率低于胆囊良性病变 (P <0 0 5)。nm2 3 H1/NDPK在原发性胆囊癌的表达 :按Nevin分期 ,早期高于晚期 (P <0 0 5) ,高分化癌高于低分化癌 (P <0 0 5) ,未发生转移者显著高于转移者 (P <0 0 2 5) ,其表达水平与转移呈负相关。nm2 3 H1基因可能在原发性胆囊癌转移过程中起负性调控作用 ;nm2 3 H1基因在原发性胆囊癌分期、分化程度及转移过程中起不同的调节作用。

青年期大肠癌nm23/NDPK蛋白的表达及意义(附30例报告)

目的：探讨青年期大肠癌中肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３／ＮＤＰＫ蛋白的表达情况及其与生物学特性的关系。方法：采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ方法检测３０例青年期大肠癌癌组织中ｎｍ２３－Ｈ_１ 基因产物／核苷二磷酸激酶（ｎｍ２３／ＮＤＰＫ）的表达。结果：青年期大肠癌ｎｍ２３／ＮＤＰＫ表达阳性率６３．３３％，在组织分化低、原发灶浸润程度（Ｔ_３、Ｔ_４）、淋巴结及远处转移，Ｄｕｋｅｓ Ｃ、Ｄ 期和血清ＣＥＡ阳性的大肠癌中表达明显减低（Ｐ＜０.０５），与其他生物学指标无关（Ｐ＞０.０５）。结论：青年期大肠癌组织学类型，浸润转移程厦与ｎｍ２３／ＮＤＰＫ蛋白的表达有密切相关，有助于青年地大肠癌生物学特性进一步了解及对病人预后的判断。