新城疫热稳定性天然弱毒B95株核酸疫苗的构建

将含有新城疫热稳定性天然弱毒B95株F基因的重组克隆质粒 pGEM F用NotⅠ单酶切 ,电泳回收纯化目的片段 ,与同样用NotⅠ单酶切并经去磷酸化处理的真核表达载体 pcDNA3.1连接 ,构建了新城疫核酸疫苗 ,并用所构建的新城疫核酸疫苗与载基因阳离子脂质体结合进行了免疫试验 ,通过ELISA、淋巴细胞转化试验检测了核酸疫苗在鸡体内的表达。结果显示 ,表达产物作为抗原物质刺激机体产生了特异性应答反应 ,引起了机体特异性的体液免疫和细胞免疫 ,对新城疫强毒攻击的保护率为 75 %。

新城疫热稳定性天然弱毒株B95生物学与免疫学特性初步研究

新城疫病毒Ｂ９５（ＮＤＶ Ｂ９５）是从国外引进的一株热稳定性的天然弱毒株。本项研究证明：本毒株对鸡胚和鸡无毒副作用，ＩＣＰＩ和ＩＶＰＩ值分别为０；该病毒可凝集鸡、鸭、牛、绵羊、鹅、猪、小白鼠和人的红血球，血凝价与Ⅰ系、ＨＢ；和 Ｌａｓｏｔａ相似；将病毒置 ５６℃ ２ｈ，置 ３７℃保存１０ ｄ，仍见有血凝性和对鸡胚感染性；经点眼、饮水、非免疫鸡与免疫鸡同居，均能获得好的免疫效果，并能耐受新城疫强毒株的攻击。

鸡新城疫病毒B_(95)株免疫研究

本试验采用鸡胚增殖培养鸡新城疫B95 株病毒。经对培养的尿囊液病毒价达EID50 107.75。无菌性检验和安全性检验均符合疫苗要求 ,将其选作试验用疫苗进行了试验。结果表明 ,该苗滴鼻点眼免疫的最小剂量为105.75,拌料免疫最小剂量为106.75。以B95 株疫苗滴鼻点眼免疫的鸡 ,在免疫后5天时就可产生坚强的免疫力 ,免疫期可达4个月。同居接触免疫鸡能获得了良好的免疫效果 ,攻毒总保护率与滴鼻点眼免疫差异不显著。拌料免疫效果良好 ,与NDV滴鼻点眼免疫差异不显著。B95 株苗在0～4℃条件下保存4个月 ,免疫攻毒保护率达80% ;在室温下保存2个月 ,免疫攻毒保护率达100%。

鸡新城疫病毒B_(95)株的RT-PCR检测方法研究

本试验设计了一对B95 株的特异引物NDV -P1/P2,探讨了对其进行RT-PCR检测的可行性。结果证明 ,用该引物可以扩增出一条310bp的特异核酸带 ,敏感性为0.0043ng/ul。