NDV La Sota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的主要特异性血清抗体动态变化规律比较

本研究应用间接ELISA方法对新城疫LaSota和V4疫苗免疫SPF鸡及免疫后攻毒SPF鸡的血清中新城疫病毒(NDV)特异性HI抗体、IgM和IgG抗体水平的动态变化进行了检测。结果表明 ,V4较LaSota疫苗免疫鸡HI抗体提前 3天左右出现 ,但除高峰期 (1周左右 )外 ,其HI抗体水平均低于LaSota免疫鸡。LaSota疫苗免疫鸡血清中NDV特异性IgM和IgG抗体水平高于V4免疫鸡 ,IgG抗体高峰较V4免疫鸡提前约 2周出现 ,攻毒后 ,LaSota免疫鸡血清中特异性IgG和IgG回忆应答显著 ,而V4免疫鸡IgM和IgG回忆应答不明显。

新城疫病毒La Sota株F蛋白结构与部分功能区的预测

以新城疫病毒(Newcastlediseace virus,NDV)La sota F蛋白的氨基酸序列为基础,采用Chou-Fasman法、Garnier-Robson法、Karplus-Schulz法与Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson-Wolf法分别预测蛋白质的二级结构和B细胞抗原表位。预测结果表明,NDV La Sota F蛋白结构较为复杂,含有较多的α-螺旋、β-折叠区,转角和无规则卷曲等有柔韧性区域。此外,应用Tmap法预测了NDV La sota F蛋白的跨膜区域,通过同源建模的方法预测了该蛋白的三维空间结构,并比较了强弱毒株裂解位点处空间结构的不同。为进一步通过试验方法确定其蛋白的B细胞表位和从结构出发了解其生物学功能,提供了理论依据。

法氏囊活性肽对新城疫La Sota株弱毒疫苗的免疫增强效果

将7日龄黄羽肉鸡300只均分为对照、常规疫苗剂量配合法氏囊活性肽、常规疫苗剂量减半配合法氏囊活性肽、生理盐水和法氏囊活性肽5组,通过血凝抑制试验测定血清抗体水平和间接ELISA检测鼻腔冲洗液中IgA水平及计算法氏囊指数等试验方法,研究法氏囊活性肽和新城疫La Sota弱毒疫苗配合应用的免疫效果。结果显示,29日龄后,常规免疫剂量配合法氏囊活性肽组的法氏囊指数、血清抗体滴度和IgA水平显著高于对照组(P<0.05),而常规剂量减半配合法氏囊活性肽组与对照组在法氏囊指数、血清抗体滴度和IgA水平上差异不显著(P>0.05);说明法氏囊活性肽对疫苗有免疫增强作用,疫苗剂量减半配合法氏囊活性肽应用可达到常规疫苗免疫效果。

抗生素和保存条件对新城疫La Sota抗原液效价的影响

利用同一批次的新城疫La Sota抗原液分别加入2种抗生素和两种用量,作用一定时间后每隔1周测定其效价(HA和EID50);同时,将这一批次抗原液分别放置在风冷冷库中和普通冷冻冰柜中保存;另外,将这一批抗原液不加任何抗生素条件下放置在风冷冷库中每隔1周测定其效价(HA和EID50)。结果表明:无论是抗生素的种类、用量还是冷冻保存的条件都会对其效价产生一定程度的影响。

猪脾转移因子对La Sota株鸡新城疫弱毒疫苗的免疫增强作用

【目的】本文旨在研究猪脾转移因子(TF)对新城疫(ND)病毒弱毒疫苗La Sota株的免疫增强作用及机理,为兽医临床防控提供理论依据。【方法】以4种不同剂量La Sota疫苗株分别单独、与TF联合免疫SPF鸡,14 d后以ND病毒(NDV)参考强毒F_(48)E_(9)株(10^(4.7) ELD_(50))进行攻毒,采用蛋白质芯片技术测定鸡外周血IL-6、IL-10、IL-16和IL-21浓度,并以血凝抑制(HI)试验和荧光定量RT-PCR方法分别检测鸡ND HI抗体效价和F_(48)E_(9)株的病毒血症水平。【结果】攻毒保护试验表明,单独免疫10^(5.17)、10^(4.17)、10^(3.17)和10^(2.17) EID_(50)剂量时疫苗攻毒保护率分别为100%、55%、0%和0%,半数保护量(PD_(50))为12023 EID_(50);对应剂量联合免疫时疫苗攻毒保护率分别为100%、75%、0%和0%,PD_(50)为6918 EID_(50);对照组(非免疫有攻毒)和空白组(非免疫非攻毒)死亡率分别为100%和0%。对10^(4.17) EID_(50)免疫剂量进一步检测分析表明,免疫后,联合免疫鸡IL-6、IL-10、IL-21和ND HI抗体效价(log_(2)x)比单独免疫最多时分别提高了254.95 pg/mL、62.10 pg/mL、1.51 pg/mL和2.6,其中ND HI抗体效价差异极显著(P<0.01);攻毒后,联合免疫鸡IL-10、IL-16、IL-21和病毒血症阳性率比单独免疫最多时分别降低了428.61 pg/mL、167.81 pg/mL、1.48 pg/mL和20%,其中IL-16、IL-21差异极显著(P<0.01)。【结论】本文结果显示,TF可提高La Sota株弱毒疫苗的免疫保护率及免疫后IL-6、IL-10、IL-21介导的免疫应答、ND HI抗体效价,降低疫苗PD_(50)及攻毒后IL-16、IL-21介导的炎症反应、IL-10介导的免疫应答抑制作用、病毒血症。本文明确了TF对La Sota株弱毒疫苗具有较好的免疫增强作用,为疫苗免疫佐剂研发和ND防控提供参考。

新城疫病毒融合蛋白的克隆和序列分析

根据NDV-LaSota-F(新城疫病毒LaSota株融合蛋白基因)亚家族氨基酸序列相似性,设计一对NDV-F特异引物,通过RT-PCR方法扩增得到全长1758bp的融合蛋白序列。利用生物信息学软件对此序列进行了开放阅读框分析、同源性分析、氨基酸组成分析、二级、三级结构预测。结果表明,该克隆片段为NDV融合蛋白。