鸡IL-2/NDV-F蛋白抗原表位融合基因的表达及免疫性初探

研究鸡白细胞介素-2(chicken interleukin-2,ChIL-2)的免疫佐剂功能,构建ChIL-2与新城疫病毒F蛋白多抗原表位(NDV-F)的嵌合基因,以对鸡新城疫疫病进行防治。采用重叠延伸PCR方法通过基因柔性接头将ChIL-2基因和NDV-F多抗原表位基因构建成ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因并克隆入PET-32a载体,经测序鉴定后,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His融合蛋白,Ni2^+亲和柱纯化,表达产物经SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA检测和鉴定。结果表明,实验成功构建并克隆了ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因,嵌合基因在大肠杆菌中表达的ChIL-2-linker-NDV-F融合蛋白分子量约为48kD,表达量约占菌体蛋白总量的45%,纯化后的ChIL-2-linker-NDV-F融合蛋白能与感染NDV的鸡血清发生反应。上述结果证明ChIL-2-linker-NDV-F嵌合基因在原核细胞中能有效表达,且融合蛋白具有较强的特异性和免疫原性。

SG97A平衡致死系统的构建及其初步应用

敲除鸡伤寒沙门菌(SG)减毒疫苗株97Aasd基因,构建宿主载体平衡致死系统并表达新城疫病毒(NDV)F蛋白,构建二价活菌苗。PCR扩增两段位于asd基因外侧的序列作为等位基因,以氯霉素抗性(CmR)基因替代asd基因,构建自杀质粒pGMB151Δasd::CmR,通过E.coliχ7213与SG97A固相杂交,将质粒转入SG97A,反向筛选获得SG97AΔasd::CmR,利用质粒pCP20去除CmR后,DAP的依赖菌株命名为SG97AΔasd。将含asd基因的质粒pYA3334转入SG97AΔasd中构建宿主载体平衡致死系统,并表达NDV-F蛋白。结果表明,通过等位基因重组方法,成功构建SG97AΔasd及宿主载体平衡致死系统,重组菌能够表达NDV-F蛋白,并能在鸡体内诱导产生特异性抗体。本研究成功构建SG97AΔasd宿主载体平衡致死系统,并表达NDV-F蛋白及其诱导宿主产生抗体,为应用该系统构建二价活菌苗的研究奠定了基础。