自制NECM修复兔耳廓软骨缺损的试验研究

目的本研究的目的在于评价自制同种异体天然细胞外基质(NatureExtracellularMatrix,NECM)在修复兔耳廓软骨缺损中的价值,从而在体外研究的基础上进一步证实我们采用的去污剂-酶四步法制作的NECM在组织工程学中的可行性。方法选用10只新西兰大白兔,于其双耳廓制造1郾0×1郾0cm大小的软骨缺损后,分别作以下研究①灰兔NECM修复兔耳廓缺损。②灰兔NECM复合软骨膜修复兔耳廓缺损;③不植任何材料的空白对照。术后4、6、12、24周取材并行组织学检查。结果NECM植入后4、6周有轻重不一的炎症反应,第12周炎症反应消失,NECM周边无包裹现象。第12周时NECM复合软骨膜组有软骨膜细胞长入NECM,此时的软骨膜细胞多处于增殖期,24周时软骨膜细胞继续增殖分化细胞逐渐长入NECM深部,且部分软骨膜细胞发育成熟。单纯NECM修复组,第6周出现纤维结缔组织长入NECM,12、24周纤维结缔组织逐渐长入NECM深部,并逐渐取代NECM。结论①NECM可诱导软骨膜细胞增殖分化生长,修复软骨缺损;②NECM具有较好的组织亲和性和相容性;③软骨膜细胞可以作为NECM再生软骨的种子细胞的来源;④软骨膜可以阻止纤维结缔组织侵入修复区NECM。

从皮肤的细胞外基质(NECM)中制取可注射胶原

常规制取注射性胶原的方法是用酶降解法，经反复酸提、盐析、离心、交联等步骤，进行纯化，该法将胶原降解，酸提取分子片断，用交联剂组成可注射胶原。本法是从ＮＥＣＭ开始制取，ＮＥＣＭ已为胶原框架，因此步骤简化很多，仅需解裂胶原网状结构，酶解末端蛋白以消除特异性，最后降解成３００ｎｍ左右胶原。本法不用交联剂和稳定剂。生物原材料来源广泛，有利临床推广应用。经半年动物实验证明，本法制取的可注射胶原无排斥反应和炎性反应，也无包裹现象。

动物NECM的稳定性评价

“动物ＮＥＣＭ的制作”文章发表近半年，已制作好的动物皮肤、肌腱、软骨和骨的ＮＥＣＭ已在保存液中保存了１３个月。为了观察ＮＥＣＭ和保存液的稳定性，本文做了如下几个方面的研究：①保存液：未放置ＮＥＣＭ新配制的和已放置１年的保存液；放置ＮＥＣＭ的保存液（１９９７年２月）。上述保存液均做细菌培养、镜下观察和成分分析。②电镜和组织学光镜观察：１９９７年２月制作的ＮＥＣＭ的光镜观察；放置１３个月后的ＮＥＣＭ电镜和光镜观察（包括偏光显微镜）；新鲜的正常相应组织的电镜和光镜观察。实验结果证明：猪皮肤和牛肌腱的ＮＥＣＭ已无细胞成分，基质为平行排列的胶原纤维丝或松散的胶原纤维网。而正常组织中细胞完整，胶原纤维呈致密交叉的网状编织结构。保存液清晰，无细菌生长，成分未变。

耳廓软骨天然生物支架材料的制备及初步研究

目的探讨制备兔耳廓天然软骨细胞外基质材料的新方法,制备适用于组织工程应用的天然生物支架材料。方法①采用多步骤去污剂—酶处理技术抽提兔耳廓软骨细胞制备天然软骨细胞外基质(Nature Extracellular Matrix,NECM),对NECM行HE染色、澳新蓝染色、维多利亚蓝染色、VanGieson染色并进行组织学及扫描电镜观察;②以灰家兔NECM为支架材料和新西兰大白兔耳廓软骨细胞为种子细胞进行体外培养,倒置显微镜下观察其亲水性和对细胞的吸附力,并通过四氮唑盐比色法(MTTAssay)观察NECM对软骨细胞的增殖作用。结果通过HE染色、蛋白多糖、胶原及弹力纤维特染、扫描电镜观察分析证实经过多步骤去污剂—酶法抽提软骨细胞制备的天然生物支架材料里,不含细胞及细胞器成分,仅含有不溶解的胶原、弹性蛋白和蛋白多糖,亦即NECM;体外培养实验发现,兔耳廓软骨细胞易进入脱细胞异体软骨基质结构裸露的空穴,且生长旺盛,组织学检查证实兔耳廓软骨NECM上裸露的骨陷窝已部分被软骨细胞占据。MTTAssay检测证实NECM对软骨细胞增殖有促进作用。结论本实验制备的NECM脱细胞彻底、细胞外基质成分保留较完整,并具有促进细胞粘附、增殖和分化生长的作用,是一种较为理想的天然生物支架材料。

天然神经细胞外基质桥接周围神经缺损的实验研究

周围神经缺损的修复一直是困扰临床医生的一个难题，为此我们尝试了用组织工程方法修复周围神经缺损的实验研究，旨在了解天然神经细胞外基质（ＮａｔｕｒｅＥｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒＭａｔｒｉｘ，ＮＥＣＭ）在神经再生中的作用，为临床修复周围神经缺损寻求新的替代材料。实验用ＳＤ大鼠４８只各组１２只分别用ＮＥＣＭ，自体坐骨神经；腹壁浅静脉桥接坐骨神经１０ｍｍ缺损，空白对照组缺损旷置。术后８周，观察运动功能、再生神经形态学及ＨＲＰ逆行标记脊髓前角运动神经元情况表明，上述指标ＮＥＣＭ组与自体神经移植组无显著差异（Ｐ＞０．０５）优于静脉移植组（Ｐ＜０．０１）。该移植体无免疫排斥反应，具有良好的生物相容性，且富含神经再生所需生物要素，为神经再生构成了良好的微环境条件，因此在临床修复神经缺损有潜在的实用价值。

MANET中基于能量约束的机会路由研究

为了使能量受限的无线网络寿命更大化，提出了MANET中基于能量约束的机会路由（ECOR）。根据节点的能量消耗模型（NECM）建立了候选节点等待时间函数（WTF）；提出了基于能量的节点转发候选集选择策略（ECETX），综合考虑每个节点的归一化能量值（PI）与链路状况来产生投递矩阵（delivery marx），以确定转发候选集中节点的优先级；利用以上策略设计了基于能量约束的机会路由（ECOR）。仿真实验表明，提出的ECOR比ExOR的网络寿命有明显提高，平均增长55％-70％左右，吞吐量也有15％～23％的提高。关键词：无线自组织网；机会路由；能量约束；能量消耗模型；等待时间函数；

基于PSO优化LS-SVM的小样本非线性协整检验与建模研究

针对小样本非线性时间序列,根据非线性协整的定义,利用基于粒子群优化最小二乘支持向量机的方法,对小样本非线性协整关系检验与非线性误差修正模型建模进行研究,设计了方法的逻辑流程.对舰船维修费指数与物价指数进行实证研究,在协整关系类型判断的基础上,实现了小样本非线性协整关系的检验,建立了预测舰船维修费指数的非线性误差修正模型,并与线性向量自回归模型进行分析比较.研究表明:基于粒子群优化最小二乘支持向量机的小样本非线性协整检验与建模方法,刻画了小样本系统的非线性协整关系,所建立的非线性误差修正模型具有较好的预测效果,能够有效地预测小样本非线性系统.