NEK8调控Ⅰ型干扰素信号通路的初步研究

为探究RLR通路中激酶NEK8对Ⅰ型干扰素的调控作用及其具体作用机制,笔者利用双萤光素酶报告系统检测SeV刺激下NEK8对IFN-β-Luc.,IRF3介导的启动子ISRE-Luc.以及NF-κB-Luc.的调控作用;转染不同浓度的NEK8,分析其对IFN-β-Luc.激活的调控是否是浓度依赖性的;检测NEK8对IL-6-Luc.和IRF-1-Luc.激活的调控作用来分析NEK8对IFN-β启动子调控的特异性;转染不同阶段的信号蛋白,分析NEK8在IFN-Ⅰ通路中发挥作用的具体位置;利用qRT-PCR技术分析NEK8对IFN-ⅠmRNA水平的调控作用及其特异性.结果显示:NEK8能够负调控RLR通路中IFN-β的启动子以及IRF3介导的启动子的激活,而对NF-κB启动子的激活无调控作用并发现其对IFN-β启动子的抑制作用是浓度依赖性的;NEK8对TNF-α诱导的IL-6启动子的激活以及IFN-γ诱导的IRF-1的激活均无调控作用表明其特异性负调控IFN-β-Luc.的激活;并发现其作用位点位于VISA和TBK1之间,NEK8特异性地负调控RLR通路中SeV或poly(I:C)刺激下IFN-β,CXCL10 mRNA的转录水平,而对IL-6 mRNA的转录水平无影响,并且其对TNF-α诱导的IL-6 mRNA以及IFN-γ诱导的IRF-1 mRNA水平无调控作用.该实验首次发现了在RNA病毒感染时,NEK8特异性地对IFN-β启动子的激活及其mRNA水平的负调控作用,并证明其发挥作用的位点在VISA和TBK1之间.

Nek8在食管鳞癌中的表达及意义

目的探讨食管鳞癌组织和细胞系中Nek8的表达及其与食管鳞癌临床病理特征和术后生存的关系。方法采用RT-PCR法检测食管鳞癌细胞系Eca109细胞、2例配对的食管鳞癌组织和癌旁黏膜上皮中Nek8mRNA表达情况;应用免疫组织化学法检测Nek8蛋白在食管鳞癌组织芯片中的表达情况,并结合临床病理资料和生存率进行统计学分析。结果 Nek8mRNA在Eca109细胞、2例食管鳞癌患者的癌组织均有表达,而癌旁食管黏膜上皮中均未见明显的表达。组织芯片结果示Nek8蛋白主要表达于细胞质,在78例配对的标本中,Nek8在食管鳞癌组织中的表达显著高于其在癌旁黏膜组织的表达(P=2.16E-13)。其表达与肿瘤大小有关(P=0.008),而与性别、年龄、分化程度、浸润深度、淋巴结转移无关(P>0.05)。生存分析显示高表达和低表达Nek8的患者生存率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Nek8在食管鳞癌组织和细胞中表达上调,可能参与了食管鳞癌的发生、发展,可作为诊断的标志物和治疗的靶点。

结直肠癌组织中Nek8、BICD2及VHL蛋白表达及意义

目的:探讨结直肠癌(CRC)组织内Nek8、BICD2及VHL蛋白表达与其生物学行为和预后的关系。方法:取30例CRC患者的癌组织及配对邻近的正常黏膜组织,20例结直肠黏膜慢性炎症组织、20例结直肠管状腺瘤及60例结直肠管状腺癌(II级)切片标本,应用免疫组化SP法检测Nek8、BICD2及VHL蛋白表达水平,Spearman分析Nek8、BICD2和VHL表达水平与CRC组织、结直肠管状腺瘤组织和慢性炎症组织的相关性,分析Nek8、BICD2和VHL表达水平与CRC临床病理参数的关系。结果:在30例配对标本中,Nek8和BICD2在CRC组织中高表达(56.7%、76.7%)明显高于配对的正常黏膜组织(13.3%、13.3%),而VHL在癌组织中的表达(30.0%)明显低于配对的正常黏膜组织(63.3%,P<0.05);Nek8和BICD2在CRC组织(83.3%、73.3%)及腺瘤组织(80.0%、75.0%)阳性率高于结直肠黏膜慢性炎症组织(25.0%、20.0%,P<0.05);VHL在癌组织(26.7%)、腺瘤组织(40.0%)及慢性炎症组织(75.0%)中的阳性表达呈逐渐增加的趋势(P<0.05)Nek8、BICD2和VHL的表达水平与CRC患者性别、年龄、浸润深度、临床分期、淋巴转移、5年生存率及远处转移无关(P>0.05);Spearman相关分析结果显示,CRC组织中Nek8与BICD2表达呈正相关(r=0.337,P<0.05),Nek8和BICD2与VHL间无相关性(P>0.05)。结论:在CRC组织中Nek8、BICD2表达上调,VHL表达下调,三者可能参与了CRC的发生和发展。

结直肠癌组织内Nek8表达及病理意义

目的:探讨Nek8在结直肠癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化SP法检测配对的40例结直肠癌患者的癌组织和结直肠正常黏膜组织、18例结直肠黏膜慢性炎症、18例结直肠管状腺瘤和50例结直肠管状腺癌(II级)中的Nek8蛋白表达水平,采用spearman分析Nek8表达水平与结直肠癌组织、正常黏膜组织和慢性炎症组织的相关性,分析Nek8表达水平与结直肠癌临床病理参数的关系。结果:在40例配对的标本中,结直肠癌组织中Nek8的表达阳性率(62.5%)高于正常黏膜组织(15.0%)(P<0.05);结直肠管状腺瘤和管状腺癌组织中Nek8的表达阳性率(83.3%,84.0%)明显高于结直肠黏膜慢性炎症组织(22.2%)(P<0.05),Nek8在结直肠黏膜慢性炎症、管状腺瘤及管状腺癌组织中的阳性表达存在正相关关系(rs=0.442,P<0.001);结肠癌组织中Nek8的表达水平与患者性别、年龄、5年生存率及癌组织的浸润深度、分期、是否发生淋巴转移无关(P>0.05)。结论:Nek8在结直肠癌组织中表达上调,可能参与了结直肠癌的发生发展。