人NESG1基因慢病毒载体的构建及其在293FT细胞中的表达

目的克隆人NESG1基因,构建与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的慢病毒载体pGC-FU-NESG1-EGFP,包装慢病毒,感染293FT细胞并进行鉴定。方法以NESG1全长克隆为模板扩增其编码框序列,通过限制性内切酶AgeI酶切、T4 DNA连接酶连接,将NESG1插入慢病毒载体pGC-FU-EGFP,构建pGC-FU-NESG1-EGFP重组载体。质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经PCR及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒三质粒系统共转染人胚肾细胞系293FT,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。病毒感染293FT细胞,荧光显微镜下观察感染效率,Western blot方法检测NESG1-EGFP融合蛋白的表达情况。结果成功构建慢病毒表达载体pGC-FU-NESG1-EGFP,三质粒共转染293FT细胞后可见大量绿色荧光;浓缩病毒后测定其滴度为2×107 TU/ml;以复感染系数MOI为1感染293FT细胞,感染效率在90%以上。Western blot证实细胞表达NESG1。结论成功构建NESG1慢病毒表达载体,包装得到高滴度慢病毒,为后续感染鼻咽癌细胞,探索其在鼻咽癌发生和发展中的作用奠定了基础。

NESG1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨鼻咽上皮细胞特异性蛋白1（NESG1）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化Envision两步法检测64例NSCLC组织中NESG1的表达，以39例癌旁正常组织作为对照，分析NESG1在NSCLC中的表达及与患者临床病理特征的关系。结果NESGI在NSCLC中的阳性表达率26．6％（17／64），在癌旁正常组织的阳性表达率为53．8％（21／39），NSCLC中阳性表达下降，差异有统计学意义（x2=7．748，P=0．005），NESG1的表达与患者年龄、淋巴结转移、分化程度、TNM分期有关（P〈0．05），而与性别、组织学分型、肿瘤大小无关（P〉0．05）。结论NESG1基因在NSCLC中表达下调，其表达水平与多种临床特征有关，可能作为一个重要因素参与了NSCLC的发生、发展。

2D-PAGE电泳和质谱分析筛选鼻咽癌中NESG1调控蛋白

[目的]利用蛋白质组学筛选抑癌候选基因NESG1在鼻咽癌中可能调控蛋白。[方法]提取NESG1稳定高表达的鼻咽癌3D8和对照鼻咽癌C6细胞蛋白,并采用双向凝胶电泳(2D-PAGE)技术进行有效分离,图像扫描后获得高分辨率的2D-PAGE图谱。选用差异蛋白质组学技术筛选差异蛋白位点,然后用肽质量指纹谱(PMF)和数据库检索技术给予鉴定。荧光定量PCR和Western Blot验证差异基因表达水平。[结果]质谱分析显示,PKM2、ERO1L和BCAS2在NESG1过表达的3D8细胞中表达下调,其下调倍数分别为-5.25,-3.65和-4.52倍。荧光定量PCR在mRNA水平验证了PKM2、ERO1L和BCAS2(-3.65、-3.42和-4.55倍)以及Western Blot在蛋白水平验证了PKM2和ERO1L蛋白在3D8细胞中表达下调。[结论]PKM2、ERO1L和BCAS2可能是NESG1调控的靶基因,参与了NESG1介导的鼻咽癌生长抑制。

非小细胞肺癌患者鼻咽上皮特异性蛋白1的表达及临床意义

目的探究鼻咽上皮细胞特异性蛋白1(nasopharyngeal epithelium specific protein 1,NESG1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及临床意义。方法收集临床及随访资料完整的150例非小细胞肺癌患者的癌组织及相应癌旁正常肺组织并制成组织芯片,利用免疫组织化学技术Envision二步法检测NESG1在肺癌及癌旁组织中的蛋白表达情况。结果 150例非小细胞肺癌患者的癌组织及相应癌旁正常肺组织免疫组化结果示,NSCLC组织中NESG1阳性表达率为33. 33%(50/150),显著高于癌旁正常组织的6. 47%(9/139),2组差异有统计学意义(χ2=32. 03,P=0. 00)。NESG1表达与淋巴结转移、TNM分期和肿瘤大小等临床病理变量密切相关(P <0. 05),而与患者的年龄、性别、组织类型及病理分级差异无统计学意义(P> 0. 05)。Kaplan-Meier生存分析显示NESG1阴性表达组患者的生存时间明显高于NESG1阳性表达组,二者间差异有统计学意义(P <0. 05)。多因素Cox比例风险模型分析显示NESG1是NSCLC患者预后的一项独立因素。结论 NESG1在NSCLC表达上调与肿瘤的发生发展密切相关,是一项独立的预后因素。它在NSCLC中的具体角色、分子机制还需要进一步研究。