肝癌及相关组织中NET-1基因与蛋白的表达

背景与目的:NET-1是最近发现的肿瘤相关基因,它在肝癌中的表达目前尚未见报道。本研究在胚胎肝、成人肝、肝癌及相应的癌旁组织中筛检和比较NET-1基因和蛋白表达,以探讨NET-1基因在肝癌表达的特征。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测3例胚胎肝、4例成人肝、4例验证肝癌组织和28例肝癌与相应癌旁组织中NET-1mRNA的表达,由四星图像分析系统软件检测NET-1基因mRNA的光密度。用基因生物工程方法制备NET-1多克隆抗体,并用激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学检测培养的人肝癌细胞系SMMC-7721中NET-1抗体的表达,免疫组化法检测28例肝癌与癌旁组织中NET-1蛋白的表达。结果:(1)正常成人和胎儿肝组织中NET-1基因mRNA不表达,4例验证肝癌组织中NET-1基因mRNA均呈阳性表达;肝癌与癌旁组织中NET-1基因mRNA高表达,阳性率均为85.71%(24/28)。肝癌组织中NET-1mRNA的平均光密度显著高于癌旁组织(0.64与0.47,P<0.05)。(2)经激光共聚焦显微镜观察SMMC-7721细胞中NET-1抗体的表达定位于胞浆。(3)免疫组化检测NET-1多克隆抗体在同组肝癌和癌旁组织中NET-1蛋白检出率分别为96.43%(27/28)和71.43%(20/28),两者差异具有显著性意义(P<0.05)。(4)RT-PCR方法和免疫组化方法检测肝癌和癌旁组织中NET-1基因mRNA表达与蛋白表达两者之间阳性率无显著性差异,并呈显著性正相关(癌中r=0.48,癌旁r=0.40,均P<0.05)。结论:NET-1基因表达可能是肝癌发生的早期分子事件,该基因在肝癌诊断中可能有一定的参考价值。

人类NET-1基因正、反义真核表达载体的构建及在肝癌SMMC-7721细胞中的表达

肝癌是全球发病率最高的恶性肿瘤之一，其中约55％发生在中国，至今仍缺乏有效的治疗手段。NET-1属于四次跨膜蛋白（TM4S）家族成员，具有显著上调癌形成的作用。在研究人体组织中NET-1表达及分析肝与肝癌组织NET-1表达差异的基础上，作者采用分子克隆和基因转染技术将构建的NET-1正、反义真核表达载体分别转染肝癌细胞SMMC-7721，为进一步探讨NET-1基因在肝癌发生发展中的作用提供实验模型。

敲除NET-1基因对肺癌细胞行为和肿瘤生长的影响

NET—1基因是新近报道的肿瘤相关分子基因，与肿瘤细胞增殖、迁移、浸润相关。我们通过靶向性短发卡RNA（shRNA）敲除肺癌A549细胞中NET-1基因的表达，研究其对A549细胞癌生物学行为的影响，进一步制备荷人肺腺癌裸鼠移植瘤模型，观察沉默NET-1基因后对裸鼠体内肿瘤生长的影响，探讨肺癌中NET-1基因表达的意义。

NET-1基因在肿瘤中研究进展

NET-1基因是新近发现的蛋白超家族的成员之一,尤其在肿瘤组织中的表达,国内外学者进行了大量研究。研究发现NET-1与肿瘤细胞增殖、黏附、迁移、浸润和诱导血管形成密切相关,并对预后判断有一定价值。

肿瘤相关基因NET-1的研究进展

NET-1基因是新近报道的肿瘤相关分子基因，与NET-2、NET-3、NET-4、NET-5、NET-6、NET-7总称为NET-X，属于四聚体超家族（TM4SF）的成员之一。在细胞的信号转导、调节、黏附、移动、增生和分化中起重要作用。本文对NET-1及TM4SF的功能及研究现况做一简介。

结直肠癌组织中CEACAM-1、NET-1的表达变化及其意义

目的探究癌胚抗原相关细胞黏附分子-1(CEACAM-1)和NET-1在结直肠癌中的表达变化、临床意义,同时分析二者致癌作用的相关性。方法收集河北北方学院附属第一医院50例结直肠癌患者癌组织和癌旁正常结直肠组织,用免疫组化法检测CEACAM-1和NET-1的表达,分析CEACAM-1和NET-1阳性表达与结直肠癌临床病理参数的关系,并初步探讨其致癌机制。结果结直肠癌组织和癌旁正常组织中CEACAM-1阳性表达分别为68%(34/50)和28%(14/50),两者相比,P<0.01;结直肠癌组织和癌旁正常组织中NET-1阳性表达分别为64%(32/50)和24.%(12/50),两者相比,P<0.01;CEACAM-1和NET-1的阳性表达与肿瘤浆膜浸润、TNM分期、血管浸润、淋巴结转移及肝转移紧密相关,P均<0.05;在结直肠癌组织中CEACAM-1、NET-1的表达呈正相关(r=0.497,P<0.01)。结论在结直肠癌组织中,CEACAM-1和NET-1表达均异常增高,均可作为评估结直肠癌发生、发展、转移的潜在生物学指标。

NET-1 shRNA抑制肺癌细胞A549中NET-1表达及对癌细胞增殖的影响

目的:探讨转染PSilencer4.1-NET-1 shRNA进入肺癌细胞株A549后对细胞中NET-1基因的表达及细胞增殖的影响。方法:转染PSilencer4.1-NET-1 shRNA进入肺癌细胞株A549,同时设立空转染对照组与空白组,Western blot检测细胞NET-1蛋白,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测癌细胞中NET-1mRNA的含量,WST-8法检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期的相关变化。结果:PSilencer4.1-NET-1 shRNA转染组中NET-1 mRNA的含量及细胞NET-1蛋白与对照组比较明显降低,实验组细胞的增殖明显慢于对照组与空白组,癌细胞阻滞在G1期占63.24%,S期细胞比例明显下降,与对照组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论:肺癌细胞中NET-1持续低表达可导致癌细胞增殖抑制、生长减慢,在肺癌患者的预后判断中有一定的参考价值。

大肠癌中NET-1与PCNA的表达及其临床意义

目的探讨NET-1基因蛋白及PCNA在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理因素的关系。方法对88例大肠癌手术切除标本行常规病理检查及采用免疫组化检测大肠癌中NET-1基因蛋白与PCNA表达。结果NET-1的表达与癌分化程度、Dukes分期,淋巴结是否转移以及肿瘤组织内坏死及癌间质中炎症反应有关。脉管中转移癌栓及神经侵犯的癌细胞NET-1基因蛋白多呈强阳性表达。PCNA表达与肿瘤的分化、Dukes分期及淋巴结转移情况均有显著相关性。结论NET-1和PCNA表达有协同作用,促进癌细胞分裂增殖。

NET-1在结直肠癌中的表达及临床病理意义

目的:探讨NET-1在结直肠癌中的表达及临床病理意义。方法:免疫组化法检测88例结直肠癌中NET-1基因蛋白的表达。结果:NET-1基因蛋白的表达与肠癌组织分化有关,低分化组中表达显著高于高分化组,有淋巴结转移组中的表达显著高于无淋巴结转移组,DukesC期组中表达显著高于DukesA期组.同时与肿瘤组织内坏死及癌间质中炎症反应有关(P均<0.05)。结论:NET-1基因蛋白是肿瘤相关蛋白,其表达与结直肠癌预后相关。

NET—1基因在人体组织中的表达

目的 为研究NET—1基因在人体组织中的表达，确定该基因是否可作为恶性肿瘤的特异性的标记。方法 用系统性RT—PCR方法在53种不同人体组织和肿瘤组织(包括30例正常成人组织和细胞、7例胎儿组织和16例肿瘤组织与细胞)中筛检NET—1基因表达。结果：NET—1基因在正常成人胰、肝、心、骨髓、造血细胞组织和细胞中阴性表达。NET—1在正常胎儿肝组织中阴性表达。恶性肿瘤组织和细胞中，除了造血系统恶性肿瘤(淋巴瘤和白血病)外，其他组织均为NET—1阳性表达(胰腺癌中呈微弱阳性表达)。结论 本文首次发现NET—1基因不同的表达于人体正常与肿瘤组织和细胞中，特别是在正常成人和胎儿肝组织中NET—1基因表达阴性，而在肝癌中呈阳性表达。提示：NET—1基因有可能是肝癌临床诊断的一个新的组织学标记。

NET-1蛋白在肝癌中的表达和意义

目的研究NET-1基因在肝癌中的表达和意义,分析其与临床病理因素的相关性。方法Western blot法检测8例肝癌组织中NET-1的表达,免疫荧光细胞化学法检测肝癌SMMC-7721细胞中NET-1蛋白的表达,免疫组化法检测130例肝癌石蜡包埋组织中NET-1蛋白的表达。结果Western blot法检测显示,8例肝癌组织匀浆中均有NET-1的表达。免疫荧光细胞化学激光共聚焦观察显示,NET-1在SMMC-7721细胞浆中表达呈不规则颗粒状,分布在高尔基体附近。免疫组化结果显示,肝癌组织中NET-1蛋白检出率为96.9%(126/130),其表达强度与癌细胞学类型密切相关;在透明细胞型、多形细胞型和肉瘤样型中,NET-1蛋白检出率和阳性强度显著高于肝细胞型(P< 0.05)。NET-1基因与癌病理分级、临床分期和癌伴肝炎肝硬化呈等级正相关,而与癌伴片块状坏死呈负相关(P均<0.05),与患者AFP水平、肿瘤大小及肿瘤生长方式无明显相关。结论在肝癌中,NET-1表达于胞浆,定位于近高尔基体处。NET-1蛋白表达可能促进肝癌细胞失控性增生和失分化。