蛇床子素通过NF-kB信号通路调控退变髓核细胞的细胞外基质表达、炎症反应及凋亡

目的 研究蛇床子素对退变髓核细胞的细胞外基质表达、炎症反应和凋亡的作用及其潜在机制。方法 采用氧糖剥夺(Oxygen Glucose Deprivation, OGD)培养建立退变髓核细胞模型,将细胞分为:对照组(正常培养)、OGD组(OGD培养)、蛇床子素组(OGD培养+蛇床子素处理)、PDTC组(OGD培养+NF-κB通路抑制剂PDTC处理)和蛇床子素+PDTC组(OGD培养+蛇床子素+PDTC处理)。采用Western blot检测细胞中Ⅱ型胶原(Collagen typeⅡ,Col2al)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、P65和p-P65蛋白表达,ELISA法检测细胞培养液中炎性因子血清白细胞介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 与对照组比较,OGD组细胞中Col2al、Aggrecan蛋白相对表达水平明显降低,细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高,细胞凋亡率明显升高,细胞中p-P65蛋白表达明显升高;与OGD组比较,蛇床子素组和PDTC组细胞中Col2al、Aggrecan蛋白相对表达水平明显升高,细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低,细胞凋亡率明显降低,细胞中p-P65蛋白表达明显降低,而蛇床子素+PDTC组上述指标改变最为明显。结论 蛇床子素可能通过抑制核因子激活的B细胞的κ轻链增强(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的活性,促进退变髓核细胞的细胞外基质合成、抑制退变髓核细胞的炎症反应和凋亡。

探讨MIAT通过NF-KB/IL-6/STAT3通路影响心梗后交感神经重构

目的探讨MIAT通过NF-KB/IL-6/STAT3通路对MI后交感神经重构的影响,为临床MI后心源性猝死防治提供新的理论依据和治疗靶点。方法选取SPF级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,根据实验需求随机分为Sham组、AMI组、AMI+shMIAT组和AMI+shControl组,每组各6只。AMI组和AMI+shMIAT组、AMI+shControl组大鼠行冠状动脉左前降支结扎术。Sham组的大鼠则接受相同的手术程序,但不结扎冠状动脉。分组干预处理后,对比各组大鼠MIAT、NGF、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-kB、p-P65、p-IkBa、p-JAK2、p-STAT3、JAK2和STAT3的表达水平。结果单因素方差分析结果显示,各组大鼠MIAT、NGF、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-kB、p-P65、p-IkBa、p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。两两比较结果显示,AMI组、AMI+shControl组大鼠MIAT、NGF、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-kB、p-P65、p-IkBa、p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3水平显著高于Sham组及MI+shMIAT组(P<0.05);AMI+shMIAT组高于Sham组,且MIAT、IL-6、STAT3差异显著(P<0.05)。AMI组与AMI+shControl组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论心梗后表达的MIAT可能通过NF-KB/IL-6/STAT3通路促进心交感神经重构,进而恶性室性心律失常的发生,而降低MIAT的表达可抑制NF-KB/IL-6/STAT3通路,抑制心交感神经重构,降低心梗后恶性室性心律失常的发生,有效降低心源性猝死的发生。

基于人脐静脉内皮细胞的OGD/R模型研究当归-川芎药对中7个活性成分对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路的影响

目的探讨当归-川芎药对中7个活性成分(绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、丁烯基苯酞、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、藁本内酯)对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白及其上下游血管活性物质、黏附因子和炎症因子的调控作用。方法构建人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,采用细胞增殖试剂盒(CCK-8法)检测细胞活力,探索7个成分的最佳造模时间;通过检测乳酸脱氢酶(LDH)释放探索最佳给药浓度;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测7个成分对VEGF、VCAM-1、PAI-1、NF-κB、IL-1和IL-6表达的影响;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测7个成分对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白mRNA表达的影响。结果HUVEC氧糖剥夺6 h再复氧为最佳造模时间。高剂量绿原酸组、阿魏酸组、洋川芎内酯H组,低、中剂量丁烯基苯酞组,中、高剂量洋川芎内酯A、藁本内酯组显著降低LDH漏出率(P<0.05,P<0.01);绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯H部分剂量组细胞中VEGF、ICAM-1、VCAM-1的表达显著降低,绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯H、藁本内酯部分剂量组细胞NF-κB的表达显著下降,绿原酸、咖啡酸、丁烯基苯酞、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A部分剂量组细胞中IL-6的表达显著增加,绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯A部分剂量组细胞IL-1表达显著减少,阿魏酸、洋川芎内酯H部分剂量组细胞中PAI-1的表达量显著下降(P<0.05,P<0.01);绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、丁烯基苯酞和洋川芎内酯A部分剂量组细胞中ERK、VEGF、NF-κB、VEGFR2和MMP9的mRNA相对表达量显著下调,洋川芎内酯H和洋川芎内酯A部分剂量组细胞中AKT的mRNA相对表达量均显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论当归-川芎中的药效成分可能通过抑制黏附因子、炎症因子和VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白mRNA的表达,从而发挥抗缺血性中风的作用。

基于PPAR-γ/NF-κB信号通路探讨肺心汤对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠模型的作用及机制

目的基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ/核因子κB(PPAR-γ/NF-κB)信号通路探讨肺心汤(黄芪、桃仁、红花、葶苈子、赤芍等)对野百合碱诱导肺动脉高压(PAH)大鼠模型的作用及机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、西地那非组(0.025 g·kg^(-1))及肺心汤低、中、高剂量组(11.7、23.4、46.8 g·kg^(-1))。采用单次腹腔注射野百合碱溶液(60 mg·kg^(-1))构建PAH大鼠模型。造模1 h后开始灌胃给药,每日1次,连续28 d。检测各组大鼠的血流动力学及超声心动图指标:右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(m PAP)、右心肥厚指数(RVHI)、肺动脉加速时间(PAAT)、肺动脉射血时间(PET)、三尖瓣环缩期位移(TAPSE)、右心室舒张末期内径(RVIDd)和右心室前壁厚度(RVAWT);采用HE染色法观察肺小动脉病理改变;免疫荧光法检测大鼠肺动脉中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;ELISA法检测血浆白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;免疫组化和Western Blot法检测PPAR-γ/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠的RVSP、m PAP、RVHI、RVIDd及RVAWT显著升高(P<0.01),PAAT、PAAT/PET、TAPSE均显著降低(P<0.01);肺小动脉血管壁明显增厚,肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比、血管壁面积占小动脉总横截面积的百分比均显著升高(P<0.01);肺动脉中α-SMA蛋白免疫荧光的阳性表达率显著升高(P<0.01);血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.01);肺组织中的PPAR-γ蛋白阳性表达率显著降低(P<0.01),NF-κB蛋白阳性表达率显著升高(P<0.01);肺组织中PPAR-γ、IκB-α蛋白表达显著下调(P<0.01);p-NF-κB/NF-κB蛋白表达比值显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的RVSP、m PAP、RVHI、RVIDd和RVAWT均显著降低(P<0.05,P<0.01),PAAT、PAAT/PET、TAPSE均显著升高(P<0.05,P<0.01);血管壁厚度明显降低,肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比、血管壁面积占小动脉总横截面积的百分比均显著降低(P<0.05,P<0.01);肺动脉中α-SMA蛋白免疫荧光的阳性表达率显著降低(P<0.05,P<0.01);血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.05,P<0.01);肺组织中的PPAR-γ蛋白阳性率表达显著升高(P<0.05,P<0.01),NF-κB蛋白阳性表达率显著降低(P<0.05,P<0.01);肺组织中PPAR-γ蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),p-NF-κB/NF-κB蛋白表达比值显著降低(P<0.01);肺心汤高剂量组大鼠肺组织中IκB-α蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论肺心汤能改善野百合碱诱导的PAH大鼠肺动脉压力升高、右心功能障碍和肺血管重塑,其机制可能与调控PPAR-γ/NF-κB信号通路抑制炎症反应有关。

超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:探究超分子水杨酸对兔耳痤疮模型p38MAPK/NF-κB信号通路的影响机制。方法:将30只实验兔随机分成正常对照组、2%超分子水杨酸(Salicylic acid,SA)组、30%SA组、夫西地酸组、模型对照组,每组6只,并予以相应外用药物干预,连续4周,并分别于用药2周后、用药4周后检测p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白的表达。结果:结果显示,随着用药时间的延长,各组的p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8均呈下降趋势。用药前,各组间p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8蛋白表达均差异无统计学意义(P>0.05)。用药2周后,2%SA组、30%SA组、夫西地酸组p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8低于模型对照组(P<0.001);三个用药组之间p38MAPK、NF-κB、IL-1β两两比较差异无统计学意义(P>0.05);2%SA组IL-8低于30%SA组、夫西地酸组(均P<0.05);30%SA组与夫西地酸组IL-8差异无统计学意义(P>0.05)。用药4周后,三个用药组p38MAPK、NF-κB、IL-1β、IL-8低于模型对照组(P<0.05);2%SA组、30%SA组p38MAPK、NF-κB、IL-8低于夫西地酸组(P<0.05),2%SA组IL-8低于30%SA组(P<0.05);2%SA组与30%SA组p38MAPK差异无统计学意义(P>0.05);2%SA组、30%SA组与夫西地酸组IL-1β均差异无统计学意义(均P>0.05);2%SA组IL-1β低于30%SA组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:超分子水杨酸可通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路来发挥抗炎作用,且随着用药时间的延长疗效也在逐渐增加,并优于夫西地酸。

大黄素通过NF-kB-iNOS/COX-2信号通路治疗急性胰腺炎的作用机制研究

目的石研究大黄素对急性胰腺炎的抗炎治疗作用及相关机制。方法半将24只SPF大鼠随机分为假手术组(Sham组)、蔗糖脂肪酸酯处理组(Z组)、模型组(AP组)和大黄素处理组(E组),每组6只。除Sham组外,每一个组中均须使用L-精氨酸制作急性胰腺炎模型,E组于造完模型后1h及6h分别给予大黄素(60mg/kg)腹腔注射治疗;Z组比照E组,腹腔注射等量的4%的蔗糖脂肪酸酯溶液进行处理;造模实验期间每间隔2h观察大鼠的一般情况,AP组造模12h后处死大鼠,E组及Z组末次给药后12h后处死大鼠,ELISA法检测大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS和COX-2,TBA法检测大鼠血清中SOD、MDA含量;WesternBlot检测大鼠胰腺组织NF-kB蛋白的表达情况;HE染色法检测胰腺及周围组织中的细胞炎症情况。结果与Sham组相比,AP组大鼠一般情况明显变差,血清TNF-α、IL-6及IL-1β指标升高(P<0.05),SOD活性升高,MDA活性降低(P<0.05)COX-2及iNOS显著升高(P<0.05);与AP组相比,大黄素处理组中TNF-α、IL-6及IL-1β指标明显降低(P<0.05),SOD活性升高,MDA活性降低(P<0.05);COX-2及iNOS明显降低(P<0.05);与Sham组比较,AP组大鼠胰腺组织中NF-kB蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与AP组相比,E组NF-kB蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论大黄素可以通过NF-kB-iNOS/COX-2通路来控制胰腺炎症,从而达到治疗胰腺炎的效果。

支气管肺泡灌洗液及血清NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α在肺炎诊断中的应用价值

目的探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在肺炎诊断中的应用价值。方法选取2023年1月—2024年3月于吉林大学第二医院就诊的57例肺炎患者纳入研究组,另取同期体检的健康者57例纳入对照组,均采集外周静脉血与肺泡灌洗液,检测NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平,采用Pearson相关性分析患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α的相关性。结果研究组患者血清NF-κB(41.74±4.75)μg/L、TLR-2(5.32±1.12)ng/L、TLR-4(6.44±1.61)ng/L、TNF-α(4.36±1.03)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者BALF中NF-κB(8.19±2.62)μg/L、TLR-2(2.97±0.79)ng/L、TLR-4(4.24±1.18)ng/L、TNF-α(2.04±0.59)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平呈正相关性(P<0.05)。结论肺炎患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α均呈高表达,联合检测有助于早期诊断及评估病情。

Wnt/β-catenin通路与NF-kB通路的交叉调控对间充质干细胞分化的影响

Wnt/β-catenin信号通路与NF-kB信号通路都是高度保守的通路,调节多种生物学过程,二者之间的交叉影响已在多个生物和医学研究领域引起重视。该文将就Wnt/β-catenin信号通路与NF-kB信号通路的相互作用及对间充质干细胞多向分化的影响进行综述。

归原疏筋合剂治疗腰椎间盘突出症的临床疗效及对血清NF-κB p65表达水平的影响

【目的】探究归原疏筋合剂治疗腰椎间盘突出症(LDH)患者的临床疗效及其可能的作用机制。【方法】将68例气滞血瘀证LDH患者随机分为试验组和对照组,每组各34例。对照组给予塞来昔布及甲钴胺片内服治疗,试验组在对照组的基础上加用归原疏筋合剂内服治疗,疗程为4周。观察2组患者治疗前后腰痛和下肢痛视觉模拟量表(VAS)评分、Oswestry功能障碍指数(ODI)评分、改良日本骨科协会(JOA)评分以及血清炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)]和血清核因子κB p65(NF-κB p65)水平的变化情况,并评价2组患者的临床疗效和用药安全性。【结果】(1)脱落情况方面,研究过程中,试验组脱落1例,对照组脱落3例,最终试验组33例、对照组31例纳入疗效统计。(2)疗效方面,治疗4周后,试验组的总有效率为96.97%(32/33),对照组为87.10%(27/31);组间比较(秩和检验),试验组的疗效明显优于对照组(P<0.05)。(3)量表评分方面,治疗后,2组患者的腰痛及下肢痛VAS评分、ODI评分均较治疗前降低(P<0.05或P<0.01),改良JOA评分均较治疗前升高(P<0.01),且试验组对腰痛及下肢痛VAS评分、ODI评分的降低幅度及对改良JOA评分的升高幅度均明显优于对照组(P<0.05或P<0.01)。(4)血清炎症相关指标方面,治疗后,2组患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β、NF-κB p65水平均较治疗前降低(P<0.01),且试验组的降低幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(5)安全性方面,治疗过程中,试验组的不良事件发生率为2.94%(1/34),对照组为8.82%(3/34),组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】归原疏筋合剂治疗气滞血瘀证LDH患者疗效确切,可有效缓解患者疼痛症状,改善患者腰椎功能,降低血清炎症因子及NF-κB p65表达水平,其作用机制可能与降低炎症因子水平,抑制NF-κB信号通路的活化有关。

当归芍药散调控IKK/IκBα/NF-κB通路对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响

目的探究当归芍药散调控核转录因子-κB抑制蛋白激酶(IKK)/核因子κB抑制蛋白(IκBα)/核因子-κB(NF-κB)通路对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响。方法将48只C57BL/6J小鼠随机分为老年性聋模型组(Model组)、低剂量当归芍药散组(中药-L组,3.2 g/kg生药)、高剂量当归芍药散组(中药-H组,6.4 g/kg生药)和高剂量当归芍药散+IKK/IκBα/NF-κB信号通路激活剂白藜芦醇(RES)组(中药-H+RES组,6.4 g/kg生药+43.33 mg/kg RES),每组12只小鼠;取12只2月龄的C57BL/6J小鼠作为对照组(Control组)。采用听性脑干反应(ABR)检测各组小鼠听阈值;HE染色观察小鼠耳蜗螺旋神经节的病理变化,并对小鼠耳蜗中回与底回的螺旋神经节细胞的数量进行计数;TUNEL染色法检测小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的凋亡。ELISA法检测小鼠耳蜗组织中丙二醛(MDA)与超氧化物歧化酶(SOD)水平。qRT-PCR法检测小鼠耳蜗组织中IL-1β、IL-6与TNF-αmRNA水平。Western blot法检测小鼠耳蜗组织IKK/IκBα/NF-κB通路与凋亡相关蛋白的表达。结果Model组小鼠较Control组小鼠8 kHz、16 kHz、24 kH、32 kHz听阈值、耳蜗螺旋神经节组织TUNEL阳性细胞数、耳蜗组织MDA及IL-1β、IL-6与TNF-αmRNA水平、p-IκBα、凋亡蛋白(Bax、cleaved-Caspase-3)表达水平、IKK、NF-κB p65磷酸化水平均显著升高(均P<0.05),耳蜗螺旋神经节细胞数量、SOD水平、IκBα蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),耳蜗螺旋神经节细胞的形态异常、排列疏松紊乱,发生空泡化,出现病理学损伤。中药-L组、中药-H组小鼠较Model组相应指标变化程度较轻(均P<0.05)。RES减弱了当归芍药散对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的抑制作用。结论当归芍药散可能通过下调IKK/IκBα/NF-κB通路抑制老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡。

基于TLR4/MYD88/NF-κB通路研究降脂通脉饮对高脂血症模型大鼠的影响

目的:基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MYD88)/核转录因子-κB (nuclear transcription factor-κB,NF-κB)通路探讨降脂通脉饮对高脂血症模型大鼠的影响。方法:从15只SD大鼠中随机选取3只作为空白组,其余大鼠给予高脂饲料2周建立高脂血症模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、降脂通脉饮低剂量组(1.56 mg·kg^(-1))、降脂通脉饮中剂量组(3.125 mg·kg^(-1))、降脂通脉饮高剂量组(6.25 mg·kg^(-1)),每组各3只,给予相应剂量药物8周,每日1次,空白组和模型组给予生理盐水灌胃。全自动生化仪检测大鼠血清血脂水平,包括总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C);ELISA检测血清炎症因子含量,包括肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ);Western Blot和qPCR检测颈动脉组织TLR4、MYD88、NF-κB蛋白和基因表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高(P<0.01);与模型组比较,降脂通脉饮低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠血清TC、TG、LDL-C水平降低(P<0.05);各组大鼠血清HDL-C水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组大鼠血清MCP-1、TNF-α、IFN-γ含量升高(P<0.01);与模型组比较,降脂通脉饮中剂量、高剂量组大鼠血清MCP-1、TNF-α、IFN-γ含量降低(P<0.05),降脂通脉饮低剂量组大鼠血清TNF-α、IFN-γ含量降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠颈动脉组织TLR4 mRNA、MYD88 mRNA、NF-κB mRNA表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,降脂通脉饮低剂量、中剂量、高剂量组大鼠颈动脉组织TLR4 mRNA、MYD88 mRNA、NF-κB mRNA表达水平降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠颈动脉组织TLR4、MYD88、NF-κB蛋白表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,降脂通脉饮中剂量、高剂量组大鼠颈动脉组织TLR4、MYD88、NF-κB蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:降脂通脉饮可降低高脂血症大鼠血脂水平,其机制可能与抑制TLR4/MYD88/NF-κB通路,从而减轻炎症反应有关。

活血理肝汤通过LPS/TLR-4/NF-kB信号通路治疗NAFLD大鼠的机制探讨

目的 探讨活血理肝汤通过LPS/TLR-4/NF-kB信号通路防治NAFLD的机制。方法 30只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和活血理肝汤组,每组10只。正常对照组给予普通饲料喂养;模型组和活血理肝汤组给予高脂饲料喂养。8周后经肝脏病理HE染色确认造模成功,活血理肝汤组按照8.5g/(kg·d)进行灌胃,正常对照组和模型组使用相同体积生理盐水灌胃,持续8周。全自动生化分析仪测定各组大鼠血清血脂、肝功水平,HE染色和油红O染色观察各组大鼠肝脏组织形态与脂质沉积情况;酶联免疫吸附法检测各组大鼠肝脏白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及血清、肝脏、盲肠内容物的脂多糖(LPS)水平。Western blot法和荧光定量PCR法分别检测各组大鼠肝脏组织NF-κB和TLR4的蛋白和mRNA表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)和天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)水平显著升高,高密度脂蛋白(HDL-C)水平显著降低(P<0.05);肝细胞内可见大量大小不等的脂肪空泡,肝窦狭窄或消失,脂质沉积明显;肝脏IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平以及血清、肝脏、盲肠内容物中LPS水平均显著升高(P<0.05);肝脏TLR4和NF-κB的蛋白和mRNA表达均增高(P<0.05)。与模型组比较,活血理肝汤组大鼠血清TC、TG、LDL-C和AST、ALT水平显著降低(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05);肝细胞内脂肪空泡明显减少,肝窦狭窄有所缓解,脂质沉积情况有所改善;肝脏IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平和盲肠内容物、血清、肝脏LPS水平均显著降低(P<0.05);肝脏TLR4和NF-κB的蛋白和mRNA的表达均降低(P<0.05)。结论 活血理肝汤能够改善NAFLD大鼠血脂水平、减轻肝脏脂质沉积,降低炎症指标IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α的水平,改善肝脏的内环境,并可能是通过LPS/TLR-4/NF-kB信号通路发挥NAFLD的保护作用。

当归芍药散基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对阿尔茨海默病模型大鼠神经炎症的影响研究

目的研究当归芍药散对β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导的阿尔茨海默症(Alzheimer’s Disease,AD)模型大鼠神经炎症及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调控作用。方法SD大鼠大脑双侧侧脑室注射Aβ1-42构建AD动物模型。实验分为假手术组、模型组、当归芍药散组和阳性药物组。假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,当归芍药散组给予当归芍药散24 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,阳性药物组给予米诺环素36 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,连续灌胃14 d。Morris水迷宫实验测定大鼠的学习记忆能力。复制模型成功后取材,HE染色检测海马神经元组织病理形态学变化,免疫荧光法检测小胶质细胞和星形胶质细胞活化情况,实时荧光定量PCR(qPCR)检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达情况,免疫印迹法(Western Blot)检测TLR4、MyD88和p-NF-κB p65蛋白的表达水平,免疫组化法检测NF-κB p65核转位的情况。结果与假手术组比较,AD大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.01),海马组织神经元形态受损,小胶质细胞和星形胶质细胞活化增加(P<0.01),炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平升高(P<0.01),TLR4、MyD88蛋白表达水平明显上升,p-NF-κB p65与NF-κB p65的比值明显增高(P<0.01),NF-κB p65在胞核的表达明显增加(P<0.01)。与模型组比较,当归芍药散组和阳性对照组AD大鼠学习记忆能力明显提高(P<0.01,P<0.05),大鼠海马组织神经元形态功能明显恢复,小胶质细胞和星形胶质细胞活化减少(P<0.01),炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平明显降低(P<0.01),TLR4、MyD88蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65的比值明显降低(P<0.01),NF-κB p65在胞核的表达明显减少(P<0.01)。结论当归芍药散可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制神经炎症反应,发挥神经保护作用。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨左归丸、右归丸影响骨关节炎模型的作用机制研究

目的利用细胞、分子生物学技术,采用蛋白免疫印迹(Western blot,WB)、实时荧光定量反转录聚合酶链反应(Real-time PCR,RT-PCR)、酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)检测方法,观察左归丸与右归丸对大鼠膝骨关节炎(Knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞、韧带组织的作用机制及细胞凋亡的影响,并讨论左归丸组与右归丸治疗膝骨关节炎的作用机制。方法选取8月龄的无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)级别Wistar大鼠40只(250±20 g),雌鼠与雄鼠各20只,使用数字随机法分组,分为正常组、模型对照组、左归丸组、右归丸组、硫酸氨基葡萄糖组,每组各8只大鼠(雌雄各4只),造模方法为膝关节腔注射0.1 mL浓度为10%的木瓜蛋白酶溶液,每隔2 d造模1次,共进行3次造模,每次造模后驱赶大鼠30 min,用此方法对模型对照组、左归丸组、右归丸组、硫酸氨基葡萄糖组大鼠进行模型复制。模型复制成功后分别对5组大鼠进行相应干预。连续治疗4周后,所有大鼠取腹主动脉血后处死,Elisa法检测各组大鼠血清白细胞介素(IL)-1β表达水平,取出膝关节软骨及韧带组织,RT-PCR法与WB法检测软骨及韧带组织中toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、IκB激酶(IKK)蛋白及mRNA的表达。剩余膝关节组织HE染色检测软骨组织情况。采用SPSS 22.0软件包对检测结果进行方差分析,P<0.05差异有统计学意义。结果(1)膝关节病理切片结果:经左、右归丸治疗后KOA炎症减轻。(2)RT-PCR检测结果:软骨和韧带组织中,较模型组对比左归丸组与右归丸组TLR4、IKK表达含量明显减少(P<0.05)。(3)WB检测结果:软骨和韧带组织中,较模型组对比左归丸组与右归丸组TLR4、IKK蛋白含量明显降低(P<0.05)。(4)Elisa法检测结果:各组大鼠血清中,左归丸组与右归丸组IL-1β表达水平明显降低(P<0.05)。结论左归丸与右归丸可通过抑制TLR4/髓样分化因子88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核因子κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路活化,降低TLR4、IKK、IL-1β的表达,达到保护软骨细胞及韧带组织、控制炎症、促进受损组织恢复的目的。

宁心涤痰汤通过AMPK/NF-κB通路抑制巨噬细胞分化改善血管再狭窄的机制研究

目的 研究宁心涤痰汤通过AMPK/NF-κB通路抑制巨噬细胞分化改善经皮冠状动脉介入术(PCI)后血管再狭窄的分子机制。方法 将人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)体外诱导分化成巨噬细胞,并分为空白组、模型组、宁心涤痰汤低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,余下各组通过氧化修饰型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导构建泡沫细胞模型,并给予相应的含药血清进行干预。分别检测各组细胞内胆固醇的含量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)]的含量,流式细胞术检测巨噬细胞表型(CD11b+CD86+)及凋亡的影响,Western blotting检测细胞中AMPK/NF-κB通路中相关蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,模型组中游离胆固醇(FC)、总胆固醇(TC)、IL-6、IL-1β、TNF-α的含量升高和CD11b+CD86+及凋亡的比例显著升高,细胞内p-AMPK及细胞质NF-κB p65蛋白的表达显著降低,细胞核NF-κB p65蛋白的表达显著上调,差异均有统计学意义(P <0.01);与模型组比较,宁心涤痰汤各剂量及辛伐他汀均可显著抑制细胞内TC、FC、IL-6、IL-1β、TNF-α的含量和CD11b+CD86+及凋亡的比例,上调细胞内p-AMPK及细胞质NF-κB p65蛋白的表达,下调细胞核NF-κB p65蛋白的表达水平,差异均有统计学意义(P <0.05或P <0.01)。结论 宁心涤痰汤通过抑制AMPK/NF-κB信号通路来抑制巨噬细胞分化,达到预防PCI术后血管再狭窄的目的。

低氧性肺动脉高压雄性大鼠肺组织中的p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白的表达

目的构建低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)雄性大鼠模型,了解低氧性肺动脉高压雄性大鼠肺组织中的p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白的表达特点。方法将16只SPF级雄性SD大鼠随机分为control组、hypoxic组,每组8只。将hypoxic组大鼠置低压低氧舱(模拟海拔5000 m)饲养、control组置舱外饲养(海拔2260 m),持续28 d。使用右心导管术检测大鼠平均肺动脉压(mean pulmonary arterial pressure,mPAP),分离心脏并称重以计算RVHI;用HE染色法观察肺小动脉病理形态学变化,计算血管壁面积占血管总面积的百分比(WA%)、血管壁厚度占血管直径的百分比(WT%);用Western Blotting法检测肺组织p38、p-p38、IκBα、p-IκBα、p65、p-p65蛋白的表达水平。结果同control组比较,hypoxic组大鼠mPAP、RVHI升高(P<0.05),大鼠肺小动脉管壁明显增厚,管腔变窄,WA%、WT%升高(P<0.05);hypoxic组大鼠肺组织p-p38、p-IκBα、p-p65蛋白的表达水平均升高(P<0.05),p-p38/p38、p-IκBα/IκBα、p-p65/p65同样升高(P<0.05)。结论在低氧条件下,HPH雄性大鼠肺组织中的p-p38、p-IκBα、p-p65蛋白表达水平均升高,p38 MAPK/NF-κB信号通路被激活。

利胆清胰汤通过调节Nf-κB信号通路对小鼠急性胰腺炎模型影响的研究

目的 旨在分析利胆清胰汤通过调节Nf-κB信号通路对小鼠急性胰腺炎模型的影响。方法 2020年10月—2021年4月在牡丹江医学院临床学院将30只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组和利胆清胰汤组,每组10只,通过8次腹膜内注射雨蛙素构建小鼠急性胰腺炎模型,给予利胆清胰汤干预处理后,对小鼠疼痛行为进行观察,检测血清淀粉酶和髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)水平,同时观察胰腺组织病理改变,免疫印迹法检查胰腺组织中核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3, NLRP3),半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1),凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated spot-like proteins, ASC),磷酸化NF-κB-p65和非磷酸化p65蛋白表达水平。结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠疼痛行为第一次出现的时间明显缩短,血清淀粉酶、MPO水平明显升高,胰腺组织损伤明显升高,NLRP3、ASC、Caspase-1、p-NF-κB p65表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,利胆清胰汤组小鼠疼痛行为第一次出现明显延长,胰腺组织损伤明显减轻,血清淀粉酶、MPO水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组NLRP3、ASC、Caspase-1、p-NF-κBp65表达水平分别为(1.47±0.15)、(1.19±0.10)、(1.89±0.26)、(0.57±0.10)与利胆清胰汤组的(0.99±0.12)、(0.77±0.12)、(0.92±0.10)、(0.24±0.08)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。但各组小鼠非磷酸化NF-kB-p65蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 利胆清胰汤可能通过调节抑制NF-κB通路与NLRP3炎性小体激活对AP产生预防和治疗作用。

基于“TLR4/NF-kB”信号通路研究“加味四妙丸”治疗急性痛风性关节炎大鼠的作用机制

[目的]观察"加味四妙丸"治疗急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)大鼠的疗效,并基于"TLR4/NF-kB"信号通路探讨"加味四妙丸"作用机制。[方法]108只SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组、"加味四妙丸"低、中、高剂量组,每组18只。除正常组外,其余大鼠参照Coderre造模方法膝关节腔注射尿酸钠悬浊液制作AGA模型,治疗4d后,计算各时间点受试关节肿胀指数,光学显微镜观察受试关节滑膜组织病理学变化,采用ELISA法检测关节腔冲洗液IL-1β、TNF-α的含量,免疫组化法检测关节滑膜组织TLR4、NF-kB、p-NF-kB蛋白表达,RT-PCR法检测滑膜组织TLR4m RNA表达。[结果]与正常组比较,模型组大鼠膝关节肿胀指数显著升高(P<0.01),关节滑膜组织炎性改变明显,滑膜组织中TLR4、NF-kB、p-NF-kB蛋白表达量和TLR4m RNA表达量显著上调(P<0.01),关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,"加味四妙丸"中、高剂量组大鼠治疗后关节肿胀指数显著下降(P<0.01),关节滑膜组织炎性改变明显减轻,滑膜组织中TLR4、NF-kB、p-NFkB蛋白表达量和TLR4m RNA表达量均显著下调(P<0.01),关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量显著下降(P<0.01)。[结论]"加味四妙丸"可能通过抑制"TLR4/NF-kB"信号通路,从而抑制IL-1β、TNF-α的产生,起到治疗AGA的作用,且其疗效与药物剂量有一定相关性。

牙周炎伴口腔扁平苔藓中IL-17激活NF-kB调控hPDLFs促进MMPs的分泌

目的:探讨IL-17在人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中的表达对牙周炎伴口腔扁平苔藓患者中的作用及意义。方法:采用ELISA方法检测43例健康志愿者(对照组)和43例牙周炎伴口腔扁平苔藓患者(研究组)血清中IL-17蛋白表达水平及IL-17在研究组唾液中的表达水平;检测研究组牙周指标。CCK8法检测IL-17对hPDLFs细胞增殖能力的影响;qRT-PCR和ELISA方法分别检测IL-17对hPDLFs中MMP1,MMP2,MMP3和MMP9的mRNA及蛋白质表达水平影响。通过Western blot及ELISA检测IL-17对hPDLFs细胞中NF-kB P65蛋白磷酸化的影响及MMP1,MMP2,MMP3和MMP9的蛋白表达变化。结果:研究组血清IL-17水平明显高于对照组(P<0.05),唾液中IL-17水平与牙周破坏程度呈正相关。IL-17可促进hPDLFs中NF-kB P65蛋白磷酸化,并促进MMP-1,MMP-2,MMP-3和MMP-9 Mrna及蛋白的表达。结论:IL-17可通过激活NF-kB信号通路促进hPDLFs中MMP-1,MMP-2,MMP-3和MMP-9的分泌。

X射线全身照射对免疫器官内NF-kB的DNA结合活性的影响

采用凝胶电泳移动变化分析（ＥＭＳＡ）方法，观察了 Ｘ射线全身照射后小鼠胸腺细胞及脾细胞内 ＮＦ－ｋＢ ＤＮＡ结合活性的时程变化及其剂量效应关系。结果表明；胸腺细胞及脾细胞核蛋白提取物内存在两种与 ｋＢ位点特异结合的 ＮＦ－ｋＢ二聚体。 照射后两者的变化时程及剂量效应关系显然不同． ２Ｇｙ照射后胸腺细胞内 ｐ５０／ｐ６５的 ＤＮＡ结合活住在 ２４～４８ｈ稍有升高，而 ｐ５０／ｐ５０的 ＤＮＡ结合活性在照射后很快开始上升，于 ４ｈ达峰值，维持于高水平至 １２ｈ后逐渐下降。 照射后 １２ｈ电离辐射诱导 ｐ５０／ｐ６５复合物活性变化不明显，当剂量达 １Ｇｙ以上时ｐ５０／ｐ５０的ＤＮＡ结合活性呈剂量依赖性升高。提示，中等以上剂量的电离辐射主要诱导具有转导抑制作用的复合物．对脾细胞核蛋白提取物剂量效应关系及２Ｇｙ照射后的时程研究表明，较低剂量辐射对 ｐ５０／ｐ６５ 二聚体的表达有轻度刺激作用，较高剂量则显示抑制效应，而对 ｐ５０／ｐ５０二聚体的活住几乎无影响．提示，ＮＦ－ｋＢ在不同免疫器官内的构成及其对电离辐射的反应存在着差异。