大黄糖络丸通过调控PI3K-Akt/NF-κB信号通路减轻糖尿病大鼠大血管炎症反应

目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(PKB/Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路,探讨大黄糖络丸(RSP)防治Zucker糖尿病肥胖(ZDF)大鼠大血管炎症反应的作用机制。方法:15只雄性ZDF(fa/+)大鼠作为对照组;高脂饲料诱导成模的75只雄性ZDF(fa/fa)大鼠随机分为模型组,高、中、低剂量RSP组,以及二甲双胍组,每组15只。药物干预12周后,处死大鼠,分离血清,检测高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平;ELISA法检测大鼠血清CD4、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;HE染色观察大鼠腹主动脉组织病理改变;免疫组化染色检测腹主动脉中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠腹主动脉中PI3K、Akt和NF-κB p65的mRNA表达;Western blot观察腹主动脉组织中PI3K、Akt、p-Akt、p-IκB和NF-κB p65蛋白水平。结果:与模型组相比,RSP显著降低糖尿病大鼠空腹血糖及LDL-C、TG和TC水平(P<0.05),升高HDL-C水平(P<0.05或P<0.01),显著降低血清炎症介质表达,IL-6、TNF-α和CD4水平显著下降(P<0.05或P<0.01),腹主动脉组织病理学损伤程度显著减轻,腹主动脉中PI3K、Akt和NF-κB p65的mRNA及蛋白水平,以及MCP-1、p-Akt和p-IκB蛋白水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:RSP可降糖调脂并减轻糖尿病大鼠大血管炎症损伤,其机制可能与抑制PI3K-Akt/NF-κB信号通路活化、减轻炎症反应有关。

银杏总黄酮通过ERK/NF-κB信号通路对兔蛛网膜下腔出血后血管痉挛的影响

目的 探究银杏总黄酮通过细胞外调节蛋白激(ERK)/核因子(NF)-κB信号通路对兔蛛网膜下腔出血(SAH)后血管痉挛的影响。方法 雄性家兔随机分为假手术组、模型组、银杏总黄酮(156 mg/kg)组、3,4,5,4′-四甲氧基二苯乙烯(DMU-212,ERK激活剂,18 mg/kg)组、银杏总黄酮(156 mg/kg)+DMU-212(18 mg/kg)组,每组6只,模型组和用药组兔建立SAH模型。分组处理后,检测各组神经功能并进行评分;尼氏染色检测各组大脑海马神经元形态变化;苏木素-伊红(HE)染色检测各组大脑基底动脉痉挛情况,比较各组管壁厚度及管腔横截面积;测定各组基底动脉血流速度和脑组织氧化应激因子[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)-Px、丙二醛(MDA)];Western印迹法检测各组脑组织ERK/NF-κB通路相关蛋白p-ERK/ERK、核内NF-κB p65蛋白表达水平。结论 与假手术组相比,模型组大脑海马神经元出现明显损伤,基底动脉表现出严重的痉挛现象,管壁厚度、神经功能评分、血流速度、MDA水平、p-ERK/ERK、核内NF-κB p65表达明显升高,管腔横截面积、SOD和GSH-Px水平明显降低(P<0.05)。与模型组、银杏总黄酮+DMU-212组相比,银杏总黄酮组大脑海马神经元损伤和基底动脉痉挛明显减轻,管壁厚度、神经功能评分、血流速度、MDA水平、p-ERK/ERK、核内NF-κB p65表达明显降低,管腔横截面积、SOD和GSH-Px水平明显升高(P<0.05);DMU-212组大脑海马神经元损伤和基底动脉痉挛明显加重,管壁厚度、神经功能评分、血流速度、MDA水平、p-ERK/ERK、核内NF-κB p65表达明显升高,管腔横截面积、SOD和GSH-Px水平明显降低(P<0.05)。结论 银杏总黄酮通过抑制ERK/NF-κB信号通路激活,降低氧化应激水平,减轻海马神经元损伤,进而改善兔SAH后血管痉挛症状,保护神经功能。

基于TLR4/NF-κB信号通路探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠肠组织损伤及肠道菌群的影响

目的 探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠脑组织Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路及肠组织损伤、肠道菌群的影响。方法 将50只大鼠建立缺血性脑卒中模型,随机分为低(7.16g/kg)、中(14.33 g/kg)、高(28.66 g/kg)剂量双路通脑方组和模型(M)组,并设假手术(S)组,每组10只。制作模型前30 min予以相应剂量双路通脑方颗粒溶液灌胃,在大鼠成模清醒后1 h给予该颗粒灌胃,连续6 d,每天2次。M组和S组同步灌胃无菌水。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测量脑梗死体积;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、干扰素(INF)-γ水平;Western印迹检测脑TLR4/NF-κB通路蛋白及结肠密封蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin)-1、紧密连接蛋白(ZO)-1蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织结构变化;16 S rDNA扩增测序法分析肠道菌群构成。结果 M组脑梗死比例较S组显著增加(P<0.05);中、高剂量双路通脑方组脑梗死比例较M组显著降低(P<0.05),且高剂量双路通脑方组最低,后续以高剂量28.66 g/kg进行研究。与S组相比,M组结肠黏膜结构损伤,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、髓样细胞分化因子(MyD)88蛋白及p-核因子κB抑制蛋白(IκB)/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平显著较高,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较低(均P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可改善结肠黏膜结构,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、MyD88蛋白及p-IκB/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平明显降低,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较高(P<0.05)。肠道菌群分析显示,与S组相比,M组菌群多样性和丰度降低,在门水平,M组厚壁菌门丰度和F/B值明显升高,而拟杆菌门明显降低(P<0.05);在属水平,M组瘤球菌属、拟杆菌属等丰度明显较高,双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度明显较低(P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可上调菌群多样性和丰度,明显提高拟杆菌门丰度,提高降低厚壁菌门丰度和F/B值,明显增加双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度,明显降低艾克曼菌属等丰度(均P<0.05)。结论 双路通脑方可重塑肠道菌群,恢复肠道屏障,并抑制脑TLR4/NF-κB通路活化,实现对缺血性脑卒中大鼠的治疗作用。

基于NF-κB信号通路探讨被动运动对膝关节骨关节炎大鼠关节软骨的保护作用

目的 观察被动运动对膝关节骨关节炎大鼠关节软骨的保护作用,并探索其作用机制。方法 SPF级SD大鼠30只随机分为空白对照组、模型组、被动运动组各10只。采用改良Hulth法建立膝骨关节炎大鼠模型,被动运动在术后第7天即开始进行,2次/d, 5 min/次,连续4 w。病理切片组织染色观察关节软骨的形态学变化。免疫组化检测各组关节软骨中白细胞介素(IL)-1β和基质金属蛋白酶(MMP)-13水平的含量变化,Western印迹和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测软骨组织中核转录因子(NF)-κB抑制蛋白(IκB)、NF-κB P65、IL-1β蛋白和相关基因mRNA的表达情况。结果 与空白对照组关节软骨相比,模型组关节软骨Mankin评分显著升高,IL-1β、MMP-13及NF-κB信号通路表达出现显著上调(P<0.01)。与模型组相比,给予被动运动治疗后,治疗组关节软骨Mankin评分显著降低,IL-1β、MMP-13及NF-κB信号通路表达显著下调(P<0.05)。结论 被动运动可以通过减轻炎症及软骨基质降解改善膝关节骨关节炎,其机制可能是通过抑制关节软骨中NF-κB信号通路的异常激活。

基于ERK1/2-GSK3β-NFκB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响

目的 研究基于细胞外信号调节激酶(ERK)1/2-糖原合成酶激酶(GSK)3β-核因子(NF)κB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响。方法 40只SD大鼠随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余建立慢性肾衰竭(CRF)模型,建模成功后分为模型组、治疗组(芪黄苁蓉通便散贴)、药物对照组(复元四红散)各10只。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肾功能、氧化应激相关指标水平,苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肾组织病理形态学,采集粪便检测肠道细菌种类及数量,Western印迹检测ERK1/2-GSK3β-NFκB通路相关蛋白。结果 与健康组相比,模型组尿素氮、血肌酐、尿酸、丙二醛、肠球菌、肠杆菌、ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、NFκBp65、p-NFκBp65、单核细胞趋化蛋白-1、细胞间黏附分子-1升高,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、双歧杆菌、乳酸杆菌水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善,且以治疗组效果显著(P<0.05)。健康组肾组织结构正常;模型组肾小球变形,肾小管扩张,大量炎性细胞浸润;与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善。Masson染色显示,健康组结构正常;模型组出现肾组织肾小管发生变性、萎缩、破坏及再生等病理改变,间质中单核与淋巴细胞浸润及胶原纤维表达最多;治疗组与药物对照组肾小管、间质的病理改变得到有效改善,蓝色胶原纤维沉积也呈下降趋势。结论 芪黄苁蓉通便散贴可能是通过抑制ERK1-2-GSK3β-NF-κB通路的激活,改善CRF大鼠肠道菌群及肾功能。

脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制

目的 探究脑蛋白水解物联合长春西汀通过Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制。方法 选择102例重症高血压性脑出血患者随机分为两组各51例,对照组给予复方丹参液治疗,实验组给予脑蛋白水解物联合长春西汀治疗。于治疗前后分别检测患者临床指标变化、神经功能评分;检测血清氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)变化;检测血清内皮功能指标人内皮素(ET)-1,血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)变化;检测TLR4/MyD88信号通路、TLR4、MyD88和核因子(NF)-κB水平。结果 治疗前两组临床指标、神经功能评分、血清SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR4、MyD88、NF-κB水平无显著差异(P>0.05);治疗后,与对照组相比,实验组临床相关指标、美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分降低,格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分和Barthel指数评分升高,SOD和GSH-Px水平升高,MDA、ET-1水平降低,VEGF和NGF水平升高,TLR4、MyD88、NF-κB水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 脑蛋白水解物联合长春西汀可改善重症高血压性脑出血患者神经功能,其机制与降低氧化损伤和TLR4/MyD88/核因子(NF)-κB信号通路的调控有关。

舒肝和络醒脾方对肝纤维化模型大鼠TNF-α/NF-κB信号通路的影响

目的:观察舒肝和络醒脾方对肝纤维化模型大鼠TNF-α/NF-κB信号通路以及炎症因子的影响,探讨舒肝和络醒脾方干预肝纤维化进程的相关机制。方法:将雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组,模型组,阳性对照组,舒肝和络醒脾方高、中、低剂量组共6组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均采用腹腔注射40%CCl4油溶液方式诱导肝纤维化模型,注射同时采用相应药物进行灌胃治疗,8周后取大鼠肝脏与血液标本。造模期间观察记录各组大鼠一般情况;HE染色与Masson染色观察大鼠肝组织病理形态学变化;免疫组织化学法检测肝组织α-SMA表达水平;双抗体夹心ELISA法检测大鼠血清IL-1β、TNF-α炎症因子水平;RT-q PCR法检测TNF-α、NF-κB p65的m RNA表达水平;Western blot技术检测TNF-α、NF-κB p65的蛋白表达水平。结果:同模型组比较,大鼠经药物干预后一般状况均改善;肝脏病理形态明显改善(P<0.05);α-SMA表达水平明显下降(P<0.05);炎症因子IL-1β与TNF-α表达水平明显下降(P<0.05);TNF-α、NF-κB p65的m RNA水平和蛋白表达均明显下降(P<0.05)。其中舒肝和络醒脾方高剂量组效果较为显著且稳定,和阳性对照组疗效趋同。结论:舒肝和络醒脾方可延缓由CCl4诱导的肝纤维化进程,其作用机制可能与TNF-α/NF-κB信号通路有关。

基于TGF-β/Smad信号通路研究NF-κB在电针抗慢性疲劳综合征中的作用及机制

目的 观察电针干预对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠核转录因子(NF)-κB表达的影响,探索电针治疗CFS的作用机制。方法 清洁级SD雄性大鼠36只,随机将大鼠分为对照组、模型组、电针组各12只,采用负重强迫游泳联合慢性应激刺激造模建立CFS动物模型,电针组选取双侧感觉区、百会、宁神进行治疗,检测各组大鼠行为学指标(鼠尾悬挂实验,力竭游泳实验,水迷宫实验);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆褪黑素含量;免疫组化法(IHC)检测NF-κB p65蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测大鼠转化生长因子(TGF)-β1、Smad4 mRNA表达;Western印迹检测大鼠TGF-β1、Smad4蛋白的表达。结果 与对照组比较,模型组鼠尾悬挂实验挣扎次数减少,静止时间明显延长,力竭游泳时间明显缩短,水迷宫用时明显延长,有效区停留时间明显缩短;褪黑素含量昼夜波动程度减弱,变化趋势与对照组不同,海马区NF-κB p65阳性表达细胞数量增多,颜色较深,TGF-β1、Smad4 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,电针组鼠尾悬挂实验静止时间明显缩短,挣扎次数明显增加,力竭游泳时间明显延长,水迷宫用时明显缩短,有效区停留时间明显延长(P<0.05);褪黑素含量昼夜波动程度明显增强,变化趋势与对照组相似,海马区NF-κB p65阳性表达细胞数量明显减少,颜色较浅,TGF-β1、Smad4的mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 电针治疗可明显改善CFS大鼠的疲劳状态和学习能力,降低海马区NF-κB蛋白表达,可能是通过调控TGF-β/Smad通路实现的。

有氧运动对CAP大鼠前列腺组织miR-155表达、TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨有氧运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠前列腺组织miR-155表达、Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法雄性健康SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、CAP模型对照组(模型组)、游泳运动观察组(运动组),每组10只,注射消痔灵进行大鼠造模,模型形成期7 d,后运动组进行50 min/(次·d)的游泳运动,每周运动6 d,持续28 d,正常组和模型组不进行任何运动,自由活动取食;末次运动结束后2 h处死大鼠,采用ELISA检测前列腺组织白细胞介素(IL)-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,Western印迹检测TLR4、NF-κB P65蛋白相对表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-155表达,观察各组前列腺组织病理学改变。结果28 d游泳运动结束后,与正常组比较,模型组和运动组前列腺组织内IL-8、IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB P65和miR-155表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,运动组上述各项观察指标均显著降低(P<0.05);相关分析显示,TLR4、NF-κB P65与IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关,miR-155与TLR4、NF-κB P65、IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关(均P<0.01);病理观察显示,正常组前列腺组织学观察未见异常改变,模型组前列腺组织内可见腺体上皮细胞及纤维组织明显增生,间质中淋巴细胞等慢性炎症细胞浸润;与模型组比较,运动组前列腺腺体上皮细胞轻度增生,间质轻度纤维化,慢性炎症细胞浸润现象明显好转。结论有氧运动能够对CAP大鼠炎症起到缓解作用,其作用机制可能与miR-155调控TLR4/NF-κB信号通路有关。

黄芪甲苷通过miR-126/NF-κB信号通路调控人牙龈成纤维细胞增殖及凋亡的分子机制

目的 探讨黄芪甲苷对人牙龈成纤维细胞(HGFs)增殖、凋亡的影响及其对miR-126/核转录因子(NF)-κB信号通路的调控作用。方法 采用不同浓度的黄芪甲苷处理HGFs细胞,miR-NC、miR-126 mimics、anti-miR-NC、anti-miR-126转染入HGFs;anti-miR-NC、anti-miR-126分别转染入HGFs后加入黄芪甲苷处理细胞;anti-miR-126转染入HGFs后加入NF-κB抑制剂PDTC与黄芪甲苷共同处理细胞;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-126的表达量;采用Western印迹检测p-p65、磷酸化抑制蛋白κBα(p-IкBα)蛋白表达量。结果 不同浓度的黄芪甲苷可明显提高细胞活力与周期素(Cyclin)D1蛋白水平及miR-126的表达水平明显降低凋亡率及Cleaved-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白水平(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-126组细胞活力明显升高,凋亡率明显降低(P<0.05),而转染anti-miR-126对细胞增殖与凋亡的作用与之相反;抑制miR-126表达可明显逆转黄芪甲苷对细胞增殖、凋亡及NF-κB信号通路的作用;添加PDTC处理后可明显提高细胞活力,明显降低凋亡率(P<0.05)。结论 黄芪甲苷可通过调控miR-126/NF-κB信号通路从而促进HGFs增殖及抑制细胞凋亡。

基于NF-κB信号通路探究木犀草素对宫颈癌细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:探讨木犀草素对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的调控作用。方法:将HeLa细胞分为对照组、5μmol/L木犀草素组、10μmol/L木犀草素组、20μmol/L木犀草素组和抑制剂组。5、10、20μmol/L木犀草素组HeLa细胞分别经不同浓度(5、10和20μmol/L)木犀草素处理24 h,对照组HeLa细胞不做处理。筛选出10μmol/L为木犀草素最适浓度,然后将细胞分为对照组、10μmol/L木犀草素组和抑制剂组[10μmol/L木犀草素+2.5μmol/L BAY 11-7082(NF-κB信号通路抑制剂)]。采用5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)测定细胞增殖情况,平板克隆测定细胞克隆情况,Hoechst 33258测定细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA和细胞周期素D1(Cyclin D1)mRNA表达,蛋白免疫印迹(Western blotting)法测定Caspase-3、Cyclin D1、NF-κB和p-NF-κB蛋白表达。结果:10、20μmol/L木犀草素组细胞增殖率、克隆形成率、Cyclin D1 mRNA和Cyclin D1蛋白相对表达量低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);10、20μmol/L木犀草素组细胞凋亡数、Caspase-3 mRNA和Caspase-3蛋白相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。因此本实验选择低浓度(10μmol/L)木犀草素加入NF-κB通路抑制剂作为抑制剂组进行后续验证实验。抑制剂组细胞增殖率和克隆形成率低于10μmol/L木犀草素组,差异有统计学意义(P<0.05)。10μmol/L木犀草素组Cyclin D1 mRNA、Cyclin D1蛋白、p-NF-κB蛋白相对表达量低于对照组,Caspase-3 mRNA和Caspase-3蛋白相对表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);抑制剂组Cyclin D1 mRNA、Cyclin D1蛋白、p-NF-κB蛋白相对表达量低于10μmol/L木犀草素组,Caspase-3 mRNA和Caspase-3蛋白相对表达量高于10μmol/L木犀草素组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:木犀草素可能通过抑制NF-κB信号通路诱导HeLa细胞的凋亡并减弱其增殖能力。

基于NF-κB信号通路分析桔梗多糖对咳嗽变异性哮喘老龄大鼠的干预作用

目的研究基于核转录因子(NF)-κB信号通路分析桔梗多糖(PGP)对咳嗽变异性哮喘(CVA)老龄大鼠的干预作用。方法选取SD雄性老龄大鼠45只,随机分为空白组、模型组、低剂量桔梗多糖组与高剂量桔梗多糖组,模型组老龄大鼠15例,在建模中死去5只,其余3组各10只。检测各组咳嗽次数、炎性细胞数,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP组织抑制因子(TIMP)-1、嗜酸性粒细胞活化趋化因子(Eotaxin)水平,Western印迹检测转化生长因子(TGF)-β1、NF-κBp65、抑制蛋白(IκB)蛋白表达。结果模型组、低剂量桔梗多糖组、高剂量桔梗多糖组咳嗽次数、炎性细胞数、MMP-9、TIMP-1、Eotaxin水平、TGF-β1、NF-κBp65蛋白表达明显高于空白组,IκB蛋白表达明显低于空白组(P<0.05);低剂量桔梗多糖组、高剂量桔梗多糖组咳嗽次数、炎性细胞数、MMP-9、TIMP-1、Eotaxin水平、TGF-β1、NF-κBp65蛋白表达均明显低于模型组,IκB蛋白表达明显高于模型组(P<0.05);低剂量桔梗多糖组咳嗽次数、炎性细胞数、MMP-9、TIMP-1、Eotaxin水平、TGF-β1、NF-κBp65蛋白表达显著高于高剂量桔梗多糖组,IκB蛋白表达明显低于高剂量桔梗多糖组(P<0.05)。结论桔梗多糖可以通过抑制NF-κB信号通路,抑制咳嗽变异性哮喘的发展。

壳聚糖影响动静脉内瘘模型兔血管重塑及TLR4/NF-κB信号通路改善血流动力学的机制

目的 观察壳聚糖对动静脉内瘘模型兔血管重塑及Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路的影响,初步探讨壳聚糖改善血流动力学的机制。方法 选取48只新西兰兔建立动静脉内瘘模型,术后在血管吻合部位涂以不同剂量(0、1、5、25μg/ml)壳聚糖溶液,分为模型对照组、低剂量壳聚糖组、中剂量壳聚糖组和高剂量壳聚糖组,每组12只,另取12只作为正常对照组,8 w后检测相关指标。苏木素-伊红(HE)染色观察血管组织形态学,Western印迹检测血管组织TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达量,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达。测定各组平均动脉压(MAP)和中心静脉压(CVP)。结果 各组TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达量均有明显差异(P<0.05)。TLR4蛋白及mRNA表达量中,建模的各组明显高于正常对照组,模型对照组高于中、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及其mRNA表达量中,低、高剂量壳聚糖组和模型对照组明显高于正常对照组(均P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB、PCNA蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(均P<0.05)。低、高剂量壳聚糖组MyD88蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB蛋白表达量明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。模型对照组MyD88、NF-κB和PCNA mRNA明显高于低、中、高剂量壳聚糖组(P<0.05);低、高剂量壳聚糖组MyD88 mRNA表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05)。TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达量与PCNA蛋白表达量呈正相关(r=0.471、0.455、0.351;P<0.05),TLR4 mRNA表达量与PCNA mRNA表达量呈正相关(r=0.395;P<0.05)。各组MAP和CVP差异均有统计学意义(P<0.001),低、高剂量壳聚糖组和模型对照组MAP和CVP均明显高于中剂量壳聚糖组和正常对照组(P<0.05),且模型对照组明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。结论 适宜剂量壳聚糖可以影响血管重塑,有效改善血流动力学,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路异常活化有关。

基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4信号通路分析血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗对急性脑梗死患者的机制研究

目的基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4(HMGB1/TLR4)信号通路分析血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗对急性脑梗死(ACI)患者的作用机制。方法将106例ACI患者随机分为对照组(n=53)与研究组(n=53)。对照组进行阿替普酶静脉溶栓治疗,研究组在对照组基础上应用血栓通注射液治疗。比较2组临床疗效与不良反应,治疗前及治疗后7、14 d的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,治疗前后的外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量,以及治疗前后炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平。采用Pearson检验和Spearman检验分析ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与NIHSS评分、疗效总有效率的相关性。结果治疗后7、14 d时,研究组NIHSS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平较治疗前降低,且研究组HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组血清HMGB1、TLR4蛋白含量较治疗前降低,且研究组血清HMGB1、TLR4蛋白含量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组血清TNF-α、IL-6水平低于治疗前,且研究组血清TNF-α、IL-6水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组总有效率为75.47%,研究组总有效率为94.34%,差异有统计学意义(P<0.05);对照组不良反应总发生率为9.43%,研究组不良反应总发生率为15.09%,差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson检验显示,ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与NIHSS评分呈正相关(r=0.431、0.443、0.396、0.375,P均<0.001);Spearman检验显示,ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与疗效总有效率呈负相关(r=-0.536、-0.481、-0.475、-0.506,P均<0.001)。结论血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗能有效改善ACI患者神经功能并降低机体炎症水平,其机制可能与下调HMGB1/TLR4信号通路有关。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路介导滑膜细胞焦亡探讨宣痹通络膏对急性痛风性关节炎的作用机制

目的:探究宣痹通络膏对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠滑膜细胞焦亡的作用及机制。方法:将40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、宣痹通络膏组(36 g/kg)、秋水仙碱组(阳性对照药,0.3 mg/kg),每组各10只。除对照组大鼠外,其余各组大鼠均采取踝关节腔内注射尿酸钠构建AGA模型,并于造模成功后当天对大鼠进行分组灌胃给药干预,1次/d,连续3 d。分别于4、24、48 h测定各组大鼠踝关节肿胀指数;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠踝关节滑膜组织病理学变化;TUNEL染色检测滑膜细胞焦亡指数;免疫组化及酶联免疫吸附法(ELISA)检测滑膜组织及血清IL-1β和IL-18表达;免疫荧光及Western blotting检测滑膜组织TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠踝关节肿胀指数明显升高(P<0.05),滑膜组织明显增厚,并伴有炎性细胞大量浸润,滑膜细胞焦亡指数明显增加(P<0.05),且滑膜组织IL-1β、IL-18蛋白及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路蛋白(TLR4、MyD88、NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1)表达均明显升高(P<0.05),血清IL-1β和IL-18水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,宣痹通络膏组和秋水仙碱组大鼠踝关节肿胀指数明显降低(P<0.05),滑膜组织损伤减轻,滑膜细胞焦亡指数明显降低(P<0.05),且滑膜组织IL-1β、IL-18蛋白及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路蛋白表达均明显下调(P<0.05),血清IL-1β和IL-18水平明显降低(P<0.05)。结论:宣痹通络膏可能通过调节TLR4/NF-κB/NLRP3通路,抑制滑膜细胞焦亡,从而发挥抗AGA的作用。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨槲皮素对直肠癌模型大鼠炎症反应和应激反应的影响

目的探究槲皮素介导Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路对直肠癌模型大鼠炎症反应和应激反应的影响。方法饲养SD大鼠,二甲基肼构建直肠癌模型,用不同浓度的槲皮素(25、50、75 mg/kg)处理7 d,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中白细胞介素(IL)-1β,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平,苏木素-伊红(HE)染色检测组织病理学变化,qRT-PCR和Western印迹检测TLR4、NF-κB p65的表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;结果与NC组相比,Model组炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α表达显著升高;结肠组织上皮细胞不规则,结构被破坏;TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达显著升高;G0/G1期细胞明显减少,S期细胞明显增多,细胞凋亡率明显减少(P<0.05);与Model组相比,槲皮素处理各组炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α显著降低,组织病理结构稍微有所改善,TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达明显降低,G0/G1期细胞明显增多,S期、G2/M期细胞明显减少,细胞凋亡率明显增多(P<0.05),以上病理指标随着槲皮素浓度的增大而改善。结论槲皮素可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活,抑制直肠癌模型大鼠的炎症反应和应激反应。

基于HMGB1/NF-κB通路探讨温经通络汤对IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞炎症的影响

目的 观察温经通络汤对IL-1β诱导关节软骨细胞炎症的影响并探讨其作用机制。方法 从小鼠膝关节软骨中提取原代软骨细胞,并用甲苯胺蓝染色法鉴定;IL-1β诱导软骨细胞炎症模型,采用慢病毒RNAi-HMGB1转染软骨细胞,干扰HMGB1的表达;后用不同浓度的温经通络汤含药血清干预细胞;Western blot分析各组细胞中HMGB1、NF-κB信号通路蛋白的表达水平;qPCR检测HMGB1、NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清中炎症因子IL-6、PGE-2和TNF-α的表达水平。结果 与正常培养的细胞相比,IL-1β诱导软骨细胞炎症模型中HMGB1的表达水平显著上升(P<0.01),且p-IκBα/IκBα和p-P65/P65蛋白的相对表达量与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平均有所提高(P<0.01);与模型组比较,RNAi-HMGB1慢病毒转染可显著下调HMGB1的表达水平(P<0.01),并抑制p-IκBα/IκBα和p-P65/P65蛋白的相对表达量(P<0.01)与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平(P<0.05);与模型组相比,不同浓度的温经通络汤含药血清均表现出对HMGB1和NF-κB信号通路的抑制效应,表现为HMGB1与p-IκBα/IκBα和p-P65/P65的蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 温经通络汤能够改善IL-1β诱导软骨细胞炎症,其作用机制可能与抑制HMGB1介导NF-κB信号通路的活化相关。

基于p38MAPK/NF-κB信号通路探讨针刺调控线粒体自噬促进大鼠功能性消化不良发生发展的机制

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子(NF)-κB信号通路探讨针刺调控线粒体自噬促进大鼠功能性消化不良发生发展的机制。方法选取SPF级SD大鼠50只,10只为对照组,其余40只建立功能性消化不良模型,其中30只随机分为模型组、药物对照组、针刺组各10只。对照组、模型组不接受治疗,药物对照组采用莫沙必利治疗,针刺组选取大鼠太冲穴、足三里穴针刺治疗。观察各组大鼠一般情况、病理组织学、饮水量、进食量、胃肠动力、炎症因子、线粒体自噬、线粒体膜电位变化比例、三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)、p38 MAPK/NF-κB通路情况。结果与对照组相比,模型组、药物对照组、针刺组饮水量、进食量、ATP明显下降,白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞色素(CYT)-C、微管结合蛋白1A/1B-轻链(LC3)B、线粒体膜电位变化比例、ROS、p38MAPK、NF-κB表达量明显升高(P<0.05);与模型组相比,药物对照组、针刺组饮水量、进食量、ATP增加,IL-6、IL-1β、TNF-α、CYT-C、LC3B、线粒体膜电位变化比例、ROS、p38MAPK、NF-κB表达量明显下降(P<0.05);与药物对照组相比,针刺组饮水量、进食量、ATP明显增加,IL-6、IL-1β、TNF-α、CYT-C、LC3B、线粒体膜电位变化比例、ROS、p38MAPK、NF-κB表达量明显下降(P<0.05)。结论采用针刺对功能性消化不良大鼠进行干预,可介导线粒体自噬,使体内胃肠动力增加,改善大鼠症状,其作用机制可能与调控p38MAPK/NF-κB信号通路有关。

补肾通络法干预代谢综合征及其对TLR4/NF-κB炎性信号通路影响的临床研究

目的:观察补肾通络法干预代谢综合征(MS)的疗效及其对TLR4/NF-κB炎性信号通路的影响。方法:将符合纳入标准的98例MS患者随机分为2组,在行为干预的基础上,治疗组50例口服补肾通络方药清眩颗粒,对照组48例口服二甲双胍。2个月后观察2组患者体重、血压、血糖、血脂指标及TLR4/NF-κB炎性信号通路(TLR4、NF-κB p56、IL-6、TNF-α)的变化情况。结果:2组均有减重,改善空腹血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数,降低胆固醇、低密度脂蛋白的作用(P<0.05),组间比较无统计学差异(P>0.05)。而治疗组降低血压、甘油三酯,升高高密度脂蛋白及调控TLR4/NF-κB炎性信号通路的作用优于对照组(P<0.01或P<0.05)。结论:补肾通络法能有效干预MS,其机制可能与调控TLR4/NF-κB炎性信号通路有关。

化痰通络汤对MCAO大鼠脑保护作用及HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路的影响

目的基于HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路探讨化痰通络汤对脑缺血再灌注(MCAO)大鼠脑保护作用。方法将54只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、化痰通络汤组,其中模型组及化痰通络汤组行MCAO术,各组均于灌胃1 d、3 d、7 d后取材;比较各组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、脑含水量、脑组织高迁移率族蛋白l(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)含量。结果各时间点神经功能缺损评分比较显示,化痰通络汤组较模型组有明显下降,组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);脑梗死体积比较显示,化痰通络汤组在各时间点脑梗死体积均小于模型组,组间比较具有明显差异(P<0.01);化痰通络汤组1 d、3 d、7 d脑组织HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达均低于模型组,组间比较有明显差异(P<0.05或P<0.01);化痰通络汤组1 d、3 d、7 d脑组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量均低于模型组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);结论化痰通络汤对MACO大鼠的脑保护作用机制可能是通过抗炎症反应、阻断HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路实现的。